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文档简介

1、质粒的提取原理碱裂解法,质粒的提取原理碱裂解法,三种溶液： 溶液1： 50 m mol/l 葡萄糖-维持渗透压，防止DNA受机械损伤降解； 25 m mol/l Tri Cl （pH 8.0)-维持 pH; 10 m mol/l EDTA (pH 8.0)-螯合Ca2+, DNase 失活，保护DNA 溶液2： 0.2 mol/ NaOH-核酸变性（pH12或pH3) (解链） 1% SDS-蛋白变性，裂解细胞。 溶液3： 7.5 mol/L NH4AC （pH 7.6) -沉淀蛋白，大分子核酸，调节pH,使小分子核酸复性（可溶）。 其它溶液： （1）2M NH4AC-沉淀蛋白，溶解核酸； (

2、2) 异丙醇-沉淀质粒 （3）70乙醇-沉淀质粒，除去异丙醇，盐分。 (4) RNase-除去细菌RNA,质粒的提取原理碱裂解法,Protocal: 1.5 ml 菌液， 12000 rpm * 1 min, 弃上清 （repeat) 收集细菌 溶液1 (200 ul), 剧烈混匀提供缓冲液 溶液2 (400 ul)，温柔混匀，冰中5 min;裂解细胞，蛋白核酸变性 溶液3 (300 ul), 温柔混匀，冰中10 min;质粒复性 13000 rpm* 5 min, 取上清；除去细菌蛋白，基因DNA 540 ul 异丙醇， 室温 10 min;沉淀质粒 14000 rpm * 10 min, 弃上清；除去可溶性杂质 100 ul 2M NH4AC 13000 rpm* 5 min, 取上清； 100 ul 异丙醇，室温10 min; 14000 rpm * 10 min, 弃上清； 70%乙醇500 ul, 14000 rpm * 10 min, 弃上清；除去异丙醇，盐分 烘干10-30 min, 除去乙醇 50 ul ddH2O (含0.1 mg/ ml RNase), 37C* 30 min.除去细菌RNA 电泳鉴定,初 抽,精 抽,除去少量杂质蛋白,质粒的保存,1.ddH2O (可含EDTA) 中可短期保存 4 保存1

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