肉毒梭菌的主要特征

1、4.2.7 肉毒梭菌,制作：白俊强,本节主要内容：,肉毒梭菌的主要特征,肉毒梭菌致病机理,肉毒梭菌的检验,一、生物学特性：,1.形态及染色,肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性(老龄菌是阴性），约为41m的大杆菌， 多单在，偶见成双或短链，两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于中央，常见很多游离芽胞。 有48根周生鞭毛，运动迟缓，无荚膜。,welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience,1.最严格

2、的厌氧菌 2.生长最适温度：28 37 ：pH为6.87.6，产毒的最适pH为7.8 8.2。 3.产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。C、D型温度高些为宜，35 培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果较好。 4.对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。,welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience,5.在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生长旺盛且产生大量气体，A、B、F三型表面浑浊，底部有粉状和颗粒状沉淀，并能消化肉块，变黑有臭味；而C、D、

3、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管壁。 6.在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状。中央低落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。 7.在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆盖着特有的彩虹样薄层，但G型没有,葡萄糖鲜血琼脂（A型）,（C型）,3生化特性,肉毒梭菌能分解葡萄糖，麦芽糖及果糖，产酸产气，能液化明胶，缓慢液化凝固血清，使牛乳消化，产生H2S，但不能使硝酸盐还原为亚硝酸盐。肉毒梭菌的生化性状很不规律，即使同型，也常见到株间的差异。,4.抵抗力,分类：,肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋白），根据毒素的抗原特异性将其分为A、B、C （1、2） 、D、E、F、G七个

4、型别。,抵抗力：,A型毒素经602分钟加热，差不多能被完全破坏，而B、E二型毒素要经702分钟才能被破坏；C、D二型毒素对热的抵抗更大些；C型毒素要经过902分钟加热才能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75加热510分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。,二 致病机理,肉毒毒素是一种神经麻痹毒素，主要抑制神经末梢释放乙酰胆碱，引起肌肉松弛麻痹，特别是呼吸肌麻痹导致死亡。,肉毒毒素的毒性极强，是目前已知在天然毒素和合成毒剂中毒性最强的生物毒素，据称，精制毒素1克能杀死400万吨小白鼠，一个人的致死量大概

5、1微克左右。,三、检验方法,培养基：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷酸盐缓冲液。,试剂：肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力1:250）、革兰氏染色液。,实验动物：小白鼠,检验程序,检 样,毒素检测,增菌、产毒培养 30，5 d,报告 （一）,毒素检测,报告（二）,分离培养,培养检查,毒素检测,报告（三）,增菌产毒培养 30，5 d,观察生长性状， 染色镜检,观察菌落性状 染色镜检,报告(一)：检样中有无肉毒毒素以及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中毒诊断，即可结束检验) 报告(二)：对增菌产毒培养物，一方面做生长特性观察，同时检测肉毒毒素。报告检样中有无肉毒梭菌以及有何型肉毒梭菌。（有些样品如土

6、壤、泥沙等基本上不可能含有毒素，则应从培养着手） 报告(三)：欲获纯菌株，可用增菌产毒培养物进行分离培养，对所得纯菌株进行形态、培养特性等观察及毒素检测，其结果可证明所得纯菌为何型肉毒梭菌。（一般情况下，没有必要从检样中分离纯的菌株，但研究或特殊需要例外）,肉毒毒素检测,注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24 h内发病、死亡。,液态或固体（明胶磷酸盐缓冲液）样品经过适当处理后离心，取上清液实验,上清液及其胰酶激活处理液,分别进行小白鼠腹腔注射，各3只，每只0.5 mL，观察4 d,确证试验,毒力测定,定型试验,选取证实含有肉毒毒素的增菌产毒培养物（必要时可重复一次适宜的加热处理）接

7、种卵黄琼脂平板，35厌氧培养48 h。肉毒梭菌在卵黄琼脂平板上生长时，菌落及周围培养基表面覆盖着特有的虹彩样(或珍珠层样)薄层，但G型菌无此现象。 根据菌落形态及菌体形态挑取可疑菌落，接种庖肉培养基，于30培养5d，进行毒素检测及培养特性检查确证试验。,分离培养,（1）毒素检测：试验方法同上。（2）培养特性检查：接种卵黄琼脂平板，分成两份，分别在35的需氧和厌氧条件下培养48 h，观察生长情况及菌落形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而在需氧条件下不生长。,肉毒梭菌的检出（增菌产毒培养试验）,取庖肉培养基三支，煮沸10min15min，做如下处理：,第一支：急速冷却，接种检样均质液1 mL2 mL；,第二支：冷却至60，接种检样，继续于60 保温10 min，急速冷却；,第三支：接种检样，