5.2多聚酶链式反应扩增DNA片段导学案_第1页
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文档简介

1、.课题2 多聚酶链式反应扩增dna片段导学案学习目标：1、了解pcr技术的基本操作。2、理解pcr的原理。3、讨论pcr的应用。基础知识pcr技术扩增dna的过程，与细胞内dna复制过程类似：1细胞内dna复制条件分析：条件组分作用模板dna的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成dna子链的原料酶解旋酶dna聚合酶打开dna双螺旋催化合成dna子链能量atp为解螺旋和合成子链供能引物rna为dna聚合酶提供合成的3端起点2细胞内dna复制过程的解析：解旋： 引物结合：dna聚合酶结合： 子链合成： 后续加工： 子链合成特点： 思考dna分子能准确复制的原因有哪些？3 dna分子复制的人

2、工控制解开螺旋：在 时，dna双螺旋打开，形成两条dna单链，称为变性。恢复螺旋：在 左右时，两条dna单链重新形成双螺旋结构，称为复性。复制条件： 反应场所： （自动温度周期性调节）。思考缓冲液相当细胞内的什么成分？（核基质）4pcr的反应过程精品.变性：在 时dna解旋 复性：在 时引物与dna单链结合延伸：在 时合成dna子链（两个引物间的序列）实验操作（1） pcr反应体系：缓冲液、 ， 、 、两种rna引物，水（2） 实验操作步骤按照pcr反应体系配方配制反应液；将pcr反应体系50l用微量移液器转移到微量离心管（0.5ml）中；将微量离心管放到pcr仪中；设置pcr仪的工作参数。dna在pcr仪中大量扩增。24 水浴法：将微型离心管依次在 、 、 的恒温水浴锅中循环处理相应时间。3实验注意事项（1）避免外源dna污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前高压灭菌。（2）缓冲液和酶分装成小份，20低温保存。（3）每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。（4）混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。多聚酶链式反应扩增dna片段pcr原理dna的复制需要酶、原料、能量、引物dna的变性和复性受温度影响pcr过程变性复性延伸操作步骤配制pcr反应体系移入离心管放入pcr设置工作参数dna扩增测定含量

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