一种禽用地衣芽孢杆菌制剂的制备

1、 (19)人民国家知识产权局*CN101986865A*(12)发明专利申请A(10)申请公布号(43)申请公布日CN 1019868652011.03.23 (21)申请号200910069937.3(22)申请日2009.07.30(71)申请人天津瑞普生物技术股份地址 300300 天津市东丽开发区六经路 6 号(72)发明人 王小娥(51)Int.Cl.A23K 1/18 (2006.01) 35/74(2006.01)1/12 (2006.01) A61KA61P权利要求书 1 页 说明书 3 页 (54) 发明名称一种禽用地衣芽孢杆菌制剂的制备 (57) 摘要本发明公开了一种禽类地

2、衣芽孢杆菌制剂的制备方法，把地衣芽孢杆菌培育后加轻质碳酸钙脱水干燥，并用葡萄糖和白色淀维粉稀释成每克含 100 亿活菌的制剂，在临可用于治疗由大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等引起的腹泻和菌群失调。该制剂的稳定性高，贮藏简单，有利于长期使用。 CN 101986865 A 权利要求书CN 101986865 A1/1 页1. 一种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于包括下述步骤 ： (1) 用牛肉汤蛋白胨培养基为种子培养基，pH 值 6.0 8.0，30 37有氧条件下培养地衣芽孢杆菌 18 24h，成为一级种子 ； (2) 将一级种子液接种在营养肉汤培养基中培养，pH 值 6.0 8

3、.0，30 37有氧条件下培养 18 24h，成为二级种子 ； (3) 将二级种子液接种在牛肉汤蛋白胨培养基中发酵培养，pH 值6.0 8.0，30 37有氧条件下，采用连续补料分批发酵方式培养 48 72h，培养结束后静置 24 48h 使芽孢出芽率达到 90以上 ； (4) 发酵液经常温 8000rpm 20min 离心，菌体沉淀用轻质碳酸钙吸附，在干燥箱中 40 烘干成干粉 ； (5) 将上述干粉加入药用葡萄糖和白色淀维粉稀释，研磨混匀制成微生态制剂。 2. 根据权利要求1 所述的一种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法步骤(1) 中种子培养时间优选为 20h。 3. 根据权利要求1 所述的一

4、种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法步骤(3) 中所述的培养方式为连续补料分批培养方式，每隔 20h 流出 60 80发酵菌液，并补加等量发酵培养基。 4. 根据权利要求1 所述的一种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法步骤(4) 中所述的发酵液离心后的菌体沉淀与轻质碳酸钙以 1 3 比例混合，进行干燥。 5. 根据权利要求1 所述的一种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法步骤(5) 中所述干粉与药用葡萄糖和白色淀维粉的稀释比例为 1 3 6。 6. 根据权利要求 1 所述的一种禽类地衣芽孢杆菌制剂，以 1 5 比例拌饲料使用。 2 说明书CN 101986865 A1/3 页一种禽用地衣芽孢杆菌制剂的制备技

5、术领域0001本发明属于生物制品领域，具体的说是提供一种作为饲料添加剂的地衣芽孢杆菌制剂的制备方法。 背景技术0002 微生态饲料添加剂是根据微生态学理论研制的含有对动物有益微生物的活菌制剂，它们通过维持动物肠道内微生态平衡而发挥作用，具有促进动物生长发育，提高动物机体免疫力等多种功能，且无污染、无残留、无耐药性和对环境无害等，是一类新型绿色环保饲料添加剂。这些禽畜用的益生菌制剂含有芽孢杆菌，乳酸杆菌，粪链球菌，双歧杆菌，酵母等，光合细菌和梭状芽胞杆菌属的部分菌株及噬菌蛭弧菌等也偶然被用做益生菌添加到仔猪和仔鸡饲料中。 0003 活菌制剂始于上世纪初，有人用酸牛奶来调整幼畜腹泻出现的肠道微生物

6、菌群失调。后来，在研究中人们发现用活菌制剂可防止畜禽的腹泻和肠炎，继之又发现活菌制剂还可改善动物对饲料的利用，并有利于促进畜禽的生长发育和肠道健康，从而扩大了活菌制剂在畜牧生产中的作用和应用前景，概括起来，主要有以下几个方面的作用 ： 0004改善动物胃肠道微生态环境 ：研究表明，动物自身及许多致病菌不会产生各种物质，如胺、氨、细菌毒素、氧自由基等代谢产物。有些有益菌可以阻止毒性胺和氨的合成或把它们分解中和细菌毒素，从而避免这些有害物质对动物机体组织细胞的损害作用。一些好氧菌则通过产生超氧化物歧化酶来消除氧自由基，减少或消除氧自由基对细胞及细胞器膜质结构的损害。乳酸菌能够产生有机酸和抗菌物质，

7、降低肠道内 pH 值值和氧化还原电位，有利于宿主生长发育和维持肠道健康。 0005产生有益物质 ：动物微生态活菌制剂能够在动物体内产生各种消化酶，合成 B 族维生素、维生素 K 等动物所必需的营养物质 ；同时能促使动物体增加对肠道内容物中钙、镁等营养物质的吸收。 0006建立和维持肠道微生态平衡 ：研究表明，动物肠道内寄居的微生物，主要为厌氧菌。通常情况下，肠道内有益菌和致病菌会保持一定比例，当条件发生改变时，致病菌大量繁殖引起平衡失调，从而导致动物体患病。当需氧型益生菌进入消化道后，生长繁殖消耗肠道内大量氧 气，通过“生物夺氧”使需氧型致病菌大幅度下降，因而起到防止动物患病的作用。研究还发现

8、， 益生菌能够有秩序地定植于粘膜、皮肤等表面或细胞之间形成生物屏障， 这些屏障可以阻止病原微生物的定植，起着占位、争夺营养。互利共生或拮抗作用，形成保护屏障，阻止病原菌的侵入，从而对致病菌的定植产生抑制作用。增强动物免疫能力和促进动物生长 ：微生态制剂可作为非特异性免疫调节因子，增强吞噬细胞的吞噬能力和细胞产生抗体的能力，刺激动物产生干扰素，从而增强抗病能力。据报道，用活菌微生态制剂 益生素饲喂哺乳仔猪，添加组腹泻率明显比对照组减少 (3.91，P 0.01)，提高 79。在10 28 日龄的仔猪饲料中添加益生素，试验组采食量平均比对照组增加70g/d，增 重提高 4.2。又有研究报道，在雏鸡

9、中分别饲喂和不饲喂乳酸杆菌制剂两个组的基础上， 3 说明书CN 101986865 A2/3 页进行鸡的白痢沙门氏菌攻毒试验。结果表明，饲喂乳酸杆菌雏鸡组与对照组相比，死亡率明显降低了 20。还有报道称在鱼虾饲料中添加微生态制剂，可使鱼虾增重提高 10 20。0007 在畜牧生产中常用的微生态添加剂，乳酸菌和芽胞杆菌类益生菌为主要的微生态添加剂。与乳酸菌、双歧杆菌等相比，芽孢杆菌的优点在于它对外界不良环境有很强的抵抗力，能耐 60以上高温，保存时间长 ( 常温下 1 年以上 )，培养容易，便于加工制成各种制剂，效果稳定。本试验采用牛肉汤蛋白胨培养基为培养一级种子，用营养肉汤培养基培养二级种子，

10、用牛肉汤蛋白胨培养基进行连续补料分批发酵方式扩增培养，发酵液经过离心，菌体用轻质碳酸钙吸附在干燥箱中 40烘干成干粉，再与药用葡萄糖和白色淀维粉稀释制备 成微生态制剂。 发明内容0008 本发明的目的是提供一种能促进畜禽类生长，防治细菌性腹泻及菌群失调的地衣芽孢杆菌制剂的制备方法。 0009 本发明的技术方案概述如下 ： (1) 用牛肉汤蛋白胨培养基为种子培养基，pH 值 6.0 8.0，30 37有氧条件0010下培养地衣芽孢杆菌 18 24h，成为一级种子 ； 0011(2) 将一级种子液接种在营养肉汤培养基中培养，pH 值 6.0 8.0，30 37有氧条件下培养 18 24h，成为二级

11、种子 ； 0012(3) 将二级种子液接种在牛肉汤蛋白胨培养基中发酵培养，pH 值 6.0 8.0，30 37有氧条件下，采用连续补料分批发酵方式培养 48 72h，培养结束后静置 24 48h 使芽孢出芽率达到 90以上 ； 0013(4) 发酵液经常温 8000rpm 20min 离心，菌体沉淀用轻质碳酸钙吸附，在干燥箱中 40烘干成干粉 ； 0014(5) 将上述干粉加入药用葡萄糖和白色淀维粉稀释，研磨混匀制成微生态制剂。 0015上述步骤 (1) 所述种子培养时间为优选 20h。 上述步骤 (3) 所述的发酵培养为补料分批式，每隔 20h 流出 60 80发酵菌0016液，并补加等量发

12、酵培养基。 00170018001900200021上述步骤 (4) 所述的离心后的菌体沉淀与轻质碳酸钙以 1 3 比例混合，干燥。上述步骤 (5) 所述干粉与药用葡萄糖和白色淀维粉的稀释比例为 1 3 6。根据本技术方案制备的微生态制剂以 1 5 比例拌饲料使用。 本发明的有益效果是 ： 1、本发明提供的地衣芽孢杆菌微生态制剂对某些致病菌有明显的抑制作用，能调整肠道内的菌群，无毒、无不良反应，使用安全。 00222、采用补料式发酵方式使产菌量大大提高，利于工业化大量产生。 00233、用本发明的方法制备地衣芽孢杆菌微生态制剂作为饲料添加剂应用于禽类时， 可不使用抗生素和激素，并能促进禽类的生

13、长。 具体实施方式下面结合实施例对本发明做进一步的描述。00244 说明书CN 101986865 A3/3 页0025 实施例 1 ：地衣芽孢杆菌制剂的制备方法，包括下述步骤 ： 0026(1) 用牛肉汤蛋白胨培养基为种子培养基，pH 值 7.0，37有氧条件下培养地衣芽孢杆菌 20h，成为一级种子 ； (2) 将一级种子液接种在营养肉汤培养基中培养，pH 值 7.0，37有氧条件下培养0027地衣芽孢杆菌 20h，成为二级种子 ； 0028(3) 将二级种子液接种在牛肉汤蛋白胨培养基中发酵培养，pH 值 7.0，37有氧条件下，采用连续补料分批发酵方式培养 24h，培养结束后静置 24h

14、使芽孢出芽率达到 90以上 ； 0029(4) 发酵液经常温 8000rpm 20min 离心，菌体沉淀与轻质碳酸钙 1 3 比例混合， 吸附，在干燥箱中 40烘干成干粉，制得 800g 干粉 ； (5) 将上述 800g 干粉加入药用葡萄糖 2400g 和白色淀维粉 4800g 稀释，研磨混匀0030制成微生态制剂 8kg。 0031实施例 2 ：本发明的方法制备的干粉对单纯性鸡大肠杆菌病的治疗 0032 某鸡场饲养蛋鸡5000 只，曾于23 日龄有50左右的鸡发生鸡大肠杆菌病，并造成平均约每天 1的死亡率，表现症状为严重腹泻，直到 35 日龄就诊，其间曾用敌菌净、土霉素等治疗，连用一周病程好转，但停药后又复发，经粪涂片 30 份，无固定致病原