Leica TCS SPE共聚焦显微镜操作规程(1)

1、Living up to LifeLeicaLeica TCSTCS SPESPE共共聚聚焦焦显显微微镜镜操操作作规规程程徕徕卡卡 市市场场部部王王怡怡净净开开机机Living up to Life11. 打打开开主主机机开开关关22. 打打开开显显微微镜镜控控制制电电源源33. 如如有有需需要要，打打开开荧荧光光电电源源开开软软件件Living up to Life11. 双双击击电电脑脑显显示示屏屏桌桌面面上上的的 “LASLAS AFAF”图图标标启启动动共共聚聚焦焦软软件件22. 单单击击“OKOK”打打开开软软件件开开软软件件Living up to Life11. 系系统统进进行行

2、自自检检，在在此此过过程程中中不不要要触触碰碰显显微微镜镜22. 自自检检完完毕毕之之后后，显显示示LASLAS AFAF基基本本界界面面在在显显微微镜镜下下观观察察样样品品Living up to Life11. 选选择择合合适适的的物物镜镜22. 将将样样品品放放置置于于载载物物台台上上，盖盖玻玻片片一一侧侧靠靠近近物物镜镜33. 在在明明场场下下观观察察样样品品。调调节节载载物物台台xyxy手手柄柄及及调调焦焦旋旋钮钮，寻寻找找合合适适的的焦焦平平面面及及视视野野44. 通通过过显显微微镜镜侧侧面面的的“INTINT”按按钮钮进进行行光光强强调调节节55. 按按“TL/ILTL/IL”转

3、转至至荧荧光光观观察察，通通过过前前面面板板按按钮钮选选择择适适宜宜的的滤滤块块，见见下下图图，样样品品观观察察完完毕毕后后按按ShutterShutter键键阻阻断断荧荧光光光光路路以以保保护护样样品品共共聚聚焦焦设设置置采采图图条条件件 Living up to Life11. 按按顺顺时时针针方方向向打打开开激激光光电电源源22. 在在BeamBeam PathPath下下调调用用已已存存的的采采图图参参数数，或或重重新新进进行行光光路路设设置置：1)1) 选选择择合合适适的的激激光光谱谱线线2)2) 调调节节激激光光输输出出功功率率3)3) 选选择择合合适适的的分分光光镜镜4)4) 选

4、选择择合合适适的的接接收收范范围围(可可拖拖动动黑黑色色滑滑块块或或双双击击后后输输入入接接收收波波长长范范围围) 5)5) 选选择择适适宜宜的的伪伪彩彩6)6) 调调节节PMTPMT GainGain值值(检检测测器器灵灵敏敏度度)和和PMTPMT OffsetOffset值值(背背景景值值)共共聚聚焦焦预预览览图图像像Living up to Life11. 单单击击LiveLive按按键键进进行行图图像像预预览览(单单击击前前；单单击击后后)22. 单单击击图图像像左左侧侧的的 图图标标(QuickQuick LUT)LUT)。蓝蓝色色表表示示灰灰度度值值为为255255 (饱饱和和)，

5、绿绿色色表表示示灰灰度度值值为为0044. 在在ZoomZoom InIn前前打打勾勾，然然后后用用鼠鼠标标在在图图像像上上圈圈定定ROIROI (感感兴兴趣趣区区域域)，也也可可直直接接输输入入放放大大倍倍数数55. 根根据据图图像像调调节节激激光光强强度度、接接收收范范围围、PMTPMT GainGain及及OffsetOffset等等参参数数66. 如如对对图图像像满满意意，单单击击LiveLive停停止止预预览览77. 如如有有必必要要，单单击击SaveSave保保存存当当前前参参数数，便便于于以以后后调调用用33. 调调节节至至合合适适的的zz轴轴平平面面Page 7共共聚聚焦焦采采

6、集集图图像像Living up to Life11. 在在AcquisitionAcquisition中中设设置置扫扫描描分分辨辨率率 (FormatFormat)22. 设设置置扫扫描描速速度度 (SpeedSpeed)33. 设设置置平平滑滑次次数数 (FrameFrame AverageAverage)44. 单单击击CaptureCapture ImageImage按按键键进进行行图图像像采采集集Page 8共共聚聚焦焦多多通通道道采采集集Living up to Life11. 在在BeamBeam PathPath SettingsSettings中中用用“+”添添加加通通道道数数

7、目目22. 在在每每个个通通道道中中如如前前所所述述进进行行预预览览，红红色色表表示示该该通通道道处处于于激激活活状状态态33. 预预览览满满意意后后，如如前前所所述述设设置置扫扫描描分分辨辨率率、速速度度和和平平滑滑次次数数44. 单单击击StartStart按按键键进进行行图图像像采采集集Page 9共共聚聚焦焦三三维维层层切切Living up to Life11. 单单击击LiveLive进进行行预预览览，调调至至合合适适的的焦焦平平面面，再再调调节节激激光光强强度度、接接收收范范围围、PMTPMT GainGain和和OffsetOffset等等参参数数22. 单单击击SetSet

8、PlanePlane记记录录焦焦平平面面位位置置33. 继继续续预预览览，改改变变zz轴轴层层面面以以确确定定层层切切的的起起点点和和终终点点，红红色色表表示示已已设设定定44. 采采用用系系统统优优化化值值；也也可可单单击击 NrNr. ofof stepssteps 设设置置层层切切数数，或或层层切切间间距距55. 设设置置扫扫描描分分辨辨率率、速速度度和和平平滑滑次次数数66. 单单击击StartStart按按键键开开始始三三维维层层切切Page 10共共聚聚焦焦时时间间序序列列扫扫描描11. 选选择择xytxyt模模式式22. 单单击击LiveLive进进行行预预览览，调调至至合合适适

9、的的焦焦平平面面，再再调调节节激激光光强强度度、接接收收范范围围、PMTPMT GainGain和和OffsetOffset等等参参数数33. 停停止止预预览览44. 设设置置采采图图的的时时间间间间隔隔，也也可可选选择择MinimizeMinimize55. 选选择择时时间间模模式式1)1) 连连续续采采图图直直至至手手动动停停止止2)2) 设设置置采采集集总总时时间间3)3) 设设置置采采集集帧帧数数66. 按按回回车车键键或或单单击击ApplyApply记记录录上上述述设设置置77. 单单击击StartStart按按键键进进行行时时间间序序列列扫扫描描Living up to LifeP

10、age 11共共聚聚焦焦波波长长扫扫描描Living up to Life11. 选选择择xyxy模模式式22. 单单击击LiveLive进进行行预预览览，调调至至合合适适的的焦焦平平面面，再再调调节节激激光光强强度度、接接收收范范围围、 PMTPMT GainGain和和OffsetOffset等等参参数数33. 停停止止预预览览44. 设设定定接接收收总总范范围围的的起起点点和和终终点点55. 设设定定接接收收带带宽宽 (默默认认值值为为10nm)10nm)66. 设设定定采采集集帧帧数数，或或接接收收带带宽宽的的步步进进值值77. 适适当当增增加加激激光光强强度度并并提提高高PMTPMT

11、 GainGain 值值，单单击击StartStart按按键键进进行行波波长长扫扫描描Page 12共共聚聚焦焦图图像像浏浏览览Living up to Life11. 若若为为多多通通道道图图像像，可可单单击击图图像像右右侧侧的的按按键键显显示示叠叠加加图图像像22. 若若为为多多维维 (xyz(xyz层层切切、xytxyt时时间间序序列列、xyxy波波长长扫扫描描)图图像像，可可单单击击图图像像右右侧侧的的按按键键显显示示所所有有图图像像33. 还还可可通通过过图图像像左左侧侧的的按按键键在在图图像像上上进进行行以以下下操操作作1)1) 添添加加标标尺尺2)2) 放放大大图图像像3)3)

12、缩缩小小图图像像4)4) 按按1:11:1显显示示图图像像Page 13共共聚聚焦焦图图像像保保存存及及输输出出 Living up to Life11. AcquireAcquire的的ExperimentExperiment下下显显示示采采集集的的所所有有图图像像名名称称，在在图图像像名名称称上上单单击击鼠鼠标标右右键键，选选择择savesave 或或 savesaveasas 进进行行保保存存，所所得得文文件件为为.liflif原原始始文文件件，只只能能通通过过徕徕卡卡软软件件打打开开。22. 在在图图像像名名称称上上单单击击鼠鼠标标右右键键，选选择择ExportExport进进行行图图

13、像像输输出出，可可输输出出成成图图片片(.tifftiff或或.jpeg)jpeg)，三三维维或或多多维维图图像像还还可可输输出出成成电电影影(.aviavi)。所所得得文文件件可可在在其其他他电电脑脑上上打打开开。33. 选选择择输输出出路路径径，以以及及所所需需标标尺尺位位置置等等Page 14共共聚聚焦焦参参数数一一键键式式恢恢复复 Living up to Life11. 如如需需恢恢复复某某一一图图像像的的参参数数，只只需需在在该该图图像像文文件件名名上上单单击击鼠鼠标标右右键键，选选择择PropertiesProperties ofof，系系统统即即显显示示该该图图像像的的所所有有参参数数设设置置 22. 单单击击ApplyApply SettingsSettings，即即可可恢恢复复该该图图像像采采集集时时的的参参数数设设置置Page 15关关机机Living up to Life11. 将将主主机机前前面面板板上上的的激激光光钥钥匙匙逆逆时时针针旋旋转转9090度度关关闭闭