家兔实验性肺水肿实验条件探讨.doc

-专业文档，值得下载!-专业文档，值得珍藏！-家兔实验性肺水肿实验条件探讨殷骏1，徐刚1，许蜀闽1，刘福玉1（1.重庆市沙坪坝区高滩岩第三军医大学高原军事医学系专管共用实验室，400038）摘要：目的：家兔实验性肺水肿是病理生理学课程中最经典的实验之一，本实验的目的是探索复制家兔实验性肺水肿动物模型中生理盐水注入速率、生理盐水注入量以及肾上腺素注入量三者之间的最佳条件，明确它们在肺水肿形成过程中的作用。方法：每个变量各设计3个水平，根据正交设计表L934得到9个实验组1，实验组动物麻醉、插管、输入生理盐水与注入肾上腺素后，观察家兔血压、呼吸、心率与肺系数变化，并听诊湿啰音出现时间。结果：实验组家兔均发生不同程度的肺水肿，实验组过程中动物呈现血压先升高后下降及心率减慢的现象，并出现呼吸抑制的表现，湿啰音在75ml/kg生理盐水注入量、100滴/min速率静滴生理盐水与0.45mg/kg注入肾上腺素实验组出现最快，且与其余组差异显著（P<0.05）；湿啰音在50ml/kg生理盐水注入量、10滴/min速率注入生理盐水与0.15mg/kg注入肾上腺素实验组出现最慢，且与其余组差异显著（P<0.05）。结论：成功复制出家兔急性肺水肿最佳模型，对以后学生实验设计有参考价值。关键词：肺水肿；正交设计；肾上腺素ABSTRACT:Theexperimentofpulmonaryedemaofrabbitwasoneofthemostclassicexperimentinthepathophysiology,theaimofresearchwastoexplorehowfastthevelocityofSodiumChloridewasinjectedandhowmuchSodiumChlorideandadrenalinewereinjected,andwecanknewhowthesefactorsbringaboutpulmonaryedema.Everyfactorwasdesignedthreelevel,AccordingtothetabelL934,wecangetninegroupsofexperiment,Everygroupofrabbitwasanesthetized,thentheleftveinandrightarteryandtracheawereintubatedwithplasticvessel,afterSodiumChloridewasdrippedinleftveinwiththesamevelocity,adrenalinewasdrippedinearveinwiththesamevelocity,werecordedthebloodpressureandthefrequencyofrespirationandheartrate,wecalculatedthepulmonarycoefficient,andweauscultatewhenwettympaniticoccurredin.Everygroupofexperimentofrabbitalloccurpulmonaryedema.Wefindthatthebloodpressureandheartrateelevatedaheadineverygroupofrabbit.Thenthebloodpressureandheartrateloweredineverygroopofrabbit.Whenweinjected75ml/kgsodiumchlorideanddrippedsodiumchloridewith10ml/min,whilewedrippedadrenalinewith0.5mg/kgfromearvein,wettympaniticoccurredinthegroupofrabbitmostquickly(P<0.05)；Whenweinjected50ml/kgsodiumchlorideanddrippedsodiumchloridewith0.5ml/min,whilewedrippedadrenalinewith0.15mg/kgfromearvein,wettympaniticoccurredinthegroupofrabbitmostslowly(P<0.05).Keywords:pulmonaryedema；orthogonaldesign；adrenaline；家兔实验性肺水肿病理动物模型的复制是高等医学院校病理生理学实验课最常采用的实验教学内容。目前国内各医学院校常用得是复制家兔急性肺水肿模型，复制该模型的两种常-专业文档，值得下载!-专业文档，值得珍藏！-见方法是油酸注射法与肾上腺素滴注法；由肾上腺素引起的肺水肿模型与油酸组相比，其特点是肺内水肿液形成尤其明显，可见多数动物从口鼻或气管插管的通气孔中流出粉红色泡沫样液体，听诊时肺部啰音显著1；故各病理生理学实验课较多采用肾上腺素滴注法，但肾上腺素引起的肺水肿模型的缺点是一次滴注后并不出现结果，还需重复滴注，所需时间较长，且在实验过程中生理盐水滴注量与生理盐水滴注速率以及肾上腺素滴注量一直没有个统一的标准2,3。本研究通过肾上腺素引起肺水肿模型，观察在不同生理盐水滴注量、不同生理盐水滴注速率与不同肾上腺素滴注量引起家兔肺水肿下，出现肺部啰音与出现粉红色泡沫痰时间的差异；为摸索最优的实验参数提供数据。1材料与方法1.1仪器与设备家兔，体重23kg；兔手术台、实验动物常用手术器械一套、型气管插管、橡皮管、细塑料管、纱布、棉线、注射器（1ml、5ml）及针头各一具、小橡皮块、听诊器、滤纸、婴儿秤、托盘天平、动脉夹、动脉导管、静脉导管、输液装置、中心静脉压计、血压计。1.2试剂3%戊巴比妥钠、1%普鲁卡因、0.9%生理盐水、1%肝素生理盐水、1%肾上腺素溶液。1.3方法1.3.1动物麻醉家兔1只，称重后用3%戊巴比妥钠按1ml/kg耳缘静脉麻醉家兔，剪去颈部手术区兔毛，用1%普鲁卡因作局部侵润麻醉。耳缘静脉推注肝素生理盐水（2ml/kg）。1.3.2动物插管颈部正中切口长约45cm，钝性分离气管，穿两条线备用；在气管34软骨环处剪一T形切口，插入气管插管，用线结扎固定；钝性分离左颈总动脉，结扎远心端，近心端插入带有三通活塞的动脉导管（导管内充满1%肝素生理盐水溶液），结扎固定，接血压计，观察血压值变化；钝性分离右颈外静脉，结扎远心端，近心端插入充满1%肝素生理盐水溶液的静脉导管，结扎固定后与中心静脉压计相连，观察中心静脉压值变化。1.3.3复制家兔肺水肿模型输液前记录血压、呼吸频率与心率。由静脉输入37oC，输液量按50ml/kg、75ml/kg、100ml/kg三个水平进行，生理盐水滴注速率按10滴/min、100滴/min、200滴/min三个水平进行，肾上腺素滴注速率按0.15mg/kg、0.3mg/kg、0.45mg/kg三个水平进行；滴注肾上腺素后，同时记录血压、呼吸频率、心率与肺部啰音变化；注意当肺部出现水泡音，气管内有泡沫液体溢出时，立即夹住气管，停止输液。其余8组实验家兔按上述方法进行急性肺水肿实验，每组做3个重复；并设一个不输液且不滴注肾上腺素的对照组。-专业文档，值得下载!-专业文档，值得珍藏！-处死动物，开胸，小心取出肺脏，用线在气管分叉处结扎（防止肺水肿液溢出），在结扎线上方剪断气管，摘去心脏及其它结缔组织，用滤纸吸去肺表面的水分称重；计算肺系数，并记录从滴注生理盐水到出现肺水肿所需的时间。肺系数=肺重量（g）/体重（kg）。1.4统计学处理实验数据以均值±标准差（sx）表示，采用正交设计助手3.1专业版设计正交设计表L934，见表2；采用SPSS10.0统计软件包处理数据，多组数据采用多因素方差分析，多组间两两比较采用q检验，以P<0.05为统计学有显著性差异，P<0.01为统计学有非常显著性差异。2结果2.1生理盐水量、生理盐水滴注速率与肾上腺素滴注速率不同引起肺水肿各指标观察各实验组指标间并无显著差异，实验结果见表1。表1不同生理盐水滴注量、不同生理盐水滴注速率与不同肾上腺素滴注量引起家兔实验性肺水肿实验记录因素输液前注入肾上腺素后血压(mmHg)呼吸频率(次/分)心率(次/分)肺部啰音血压(mmHg)呼吸频率(次/分)心率(次/分)肺部啰音对照组105±1.885±2.9264±6.0-106±8.083±6.9260±23-实验组1105±1.884±2.9266±6.0-140±8.0112±6.9355±23+实验组2104±1.880±2.9256±6.0-138±8.0106±6.9340±23+实验组3103±1.882±2.9260±6.0-135±8.0107±6.9341±23+实验组4105±1.880±2.9258±6.0-145±8.0110±6.9356±23+实验组5100±1.879±2.9262±6.0-158±8.0125±6.9414±23+实验组6106±1.886±2.9264±6.0-152±8.0123±6.9378±23+实验组7103±1.878±2.9250±6.0-156±8.0118±6.9379±23+实验组8105±1.877±2.9248±6.0-148±8.0108±6.9350±23+实验组9103±1.882±2.9260±6.0-142±8.0113±6.9358±23+注：+表示啰音显著。2.2生理盐水量、生理盐水滴注速率与肾上腺素滴注速率不同产生肺水肿的时间差异-专业文档，值得下载!-专业文档，值得珍藏！-湿啰音在75ml/kg生理盐水注入量、100滴/min速率静滴生理盐水与0.45mg/kg注入肾上腺素实验组出现最快，且与其余组差异显著（P<0.05）；湿啰音在50ml/kg生理盐水注入量、10滴/min速率注入生理盐水与0.15mg/kg注入肾上腺素实验组出现最慢，且与其余组差异显著（P<0.05）。结果见表2，肺水肿电镜见图14。表2不同生理盐水滴注量、不同生理盐水滴注速率与不同肾上腺素滴注量引起家兔肺水肿时间观察因素体重（kg）生理盐水注入量（ml/kg）生理盐水注入速率（滴/min）肾上腺素注入量（mg/kg）产生肺水肿时间（min）肺系数（g/kg）对照组2.0±0.130000±16.65±3.86实验组12.1±0.1350100.1561a±16.620±3.86实验组22.0±0.13501000.3047b±16.616±3.86实验组31.9±0.13502000.4545b±16.615±3.86实验组42.2±0.1375100.3050b±16.614±3.86实验组52.1±0.13751000.4536c±16.615±3.86实验组61.8±0.13752000.1552b±16.613±3.86实验组72.0±0.13100100.4544b±16.616±3.86实验组81.9±0.131001000.1553b±16.617±3.86实验组92.2±0.131002000.3044b±16.614±3.86注：表内括号上方标注相同小写字母表示差异不显著（P>0.05）；标注不同小写字母表示差异显著（P<0.05）；重复次数n=3。3讨论：肺水肿是由于过多的液体积聚在肺间质和/或肺泡腔内4；正常情况下，肺组织具有抗水肿特点，肺泡毛细血管的平均血压仅为2mmHg（0.93kPa），不到体循环的1/2；家兔肺中血液与干重比例为5:1，血液动力性变化引起的肺水肿是一个主要的分支，包括了心源性肺水肿和各种血液动力学变化所引起的肺水肿，如低血糖、高压氧与滴注肾上腺素等。肺水肿对肺功能的影响，在过度输液引起的肺水肿过程中，首先是发生肺充血，继之出现肺间质水肿，然后才发展为肺泡内水肿；在没有肺泡内水肿之前，一般还不至于引起气体叫唤障碍；因为肺充血和肺间质水肿虽然对小支气管有压迫作用，但也能刺激牵张感受器，通过迷走神经反射，引起呼吸加快和通气增加，因而肺泡通气量甚至可以增多，并引起CO2分压下降，氧分压可无明显变化；但到了肺泡内水肿期，则由于小支气管进一步受压迫，肺的顺应性及肺容量下降，气道阻力增加，以及由于水肿液的刺激引起支气管痉挛，可以导致动脉血氧分压下降。