复杂背景下的圆形识别技术研究

辽宁中医药大学药学院本科生毕业论文题目：复方救必应胶囊的提取工艺研究学 院 药学院 年 级 2006 级 专 业 中药学英语班 指导教师 李学涛 学生姓名 王曼宁 学 号 20060204013 2011 年 06 月 17 日复方救必应胶囊的提取工艺研究专题学生：王曼宁 指导教师：李学涛 摘要目的：对复方救必应胶囊的提取工艺进行研究优选最佳提取工艺，最终确定提取工艺。方法：采用正交设计法，主要对水用量、提取时间及提取次数进行考察，以紫丁香苷含量为指标优选最佳提取工艺，最终确定提取工艺。结果：最佳提取工艺为用 6 倍量水回流提取 2 次，每次 60 分钟。结论：本工艺科学、合理、可行，适合工业化大生产。关键词：复方救必应；提取工艺；正交试验；紫丁香苷Abstract Objective: To compound rescue capsule extraction process will be optimized to study the best extraction process, ultimately determine the extraction process. Method: By the orthogonality tests, mainly on water consumption, extraction time and extraction times. Syringin content with the best indicators of optimal extraction process, and ultimately determine the extraction process. Result: The best extraction process is 6 times the amount of water, extracting 2 times, each time 60 minutes. Conclusion: The process scientific, reasonable, feasible, suitable for industrial mass production.Keywords: compound will be saved; extraction process; orthogonal test; syringin前 言复方救必应是根据民间验方，经医院临床验证，对治疗肠胃炎、胃肠绞痛、腹泻等卓有成效的复方制剂。复方救必应现有剂型为胶囊剂，收录于中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册(WS3-B-1986-95)，即现行标准制定于 1995 年，随着科学技术的发展，原有提取工艺采用水提醇沉的方法是否合理，是否最大程度的保留了有效成分，本研究通过选择方中主要有效成分的含量为指标进行再次评价。林彤等利用高效液相色谱法测定救必应及其制剂腹可安中丁香苷的含量,结果表明药品及救必应药材中丁香苷含量变化较大,且紫丁香苷为救必应主要有效成分之一，因此本实验以紫丁香苷的含量为指标衡量药材提取工艺的优劣。1 仪器与试剂（原料、药材）1.1 实验仪器电子天平：1203 型电子天平（上海天平一厂）；分析天平：德国 Sartorius BP-221s 电子天平；紫外分析仪：Heios 紫外分光光度计（Thermo Electron Corporation） ；旋转蒸发仪：EYELA-N1000 旋转蒸发仪（日本 EYELA 公司 东京理化器械株式会社） ；干燥箱：776-3 型远红外辐射干燥箱（上海浦东跃欣科学仪器厂）超声仪：超声清洗机（中船七院七二六所）；真空泵：SHZ-D()循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；高效液相色谱仪：戴安高效液相色谱仪（PDA-100 二极管阵列检测器，ASI100 自动进样器，P680A 四元泵，变色龙色谱软件，Autoscience AXW-5 柱温相）1.2 试剂和药材 东风桔对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：121363-200401）；救必应对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：121076-9901）；香附对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：121059-200506）；紫丁香苷对照品（批号：111574-200201；含量测定，中国药品生物制品检定所）；无水乙醇 （A.R.天津市富宇精细化工有限公司）；色谱乙腈（德国 Merck 公司）；2方法与结果：2.1 处方救必应 1000g 东风桔 1000g 香附 1000g2.2 单因素考察2.2.1 提取方法的选择取同一批次的救必应、东风桔、香附药材，粉碎成粗粉，按方中各药比例称取药粉，加 25ml 水，用超声和回流法提取，各分别提取 1 次、2 次，每次 1 小时，过滤，浓缩蒸干，加乙醇 5ml 溶解，取约 1ml 稀释 10 倍，过 0.45l 滤膜，得样品溶液。分别测定紫丁香苷含量。表.1 提取方法选择提取方法 次数 取样量（g） 峰面积 紫丁香苷含量(mg/g)超声 1 5.0121 449.1248 10.32超声 2 5.2312 512.3912 11.76回流 1 5.0231 565.9919 12.98回流 2 5.0183 605.0940 13.87由于取自同一批药材，即各样品中紫丁香苷的含量是一样的，但是不同的提取方法及次数影响了紫丁香苷的提取量，由上述数据可知，回流 2 次提取的效果较好。2.2.2 提取溶剂的选择取同一批次的救必应、东风桔、香附药材，粉碎成粗粉，按方中各药比例称取药粉，加不同溶剂（水、乙醇）50ml，回流提取 2 次，每次 1 小时。过滤，浓缩蒸干，加乙醇5ml 溶解，取约 1ml 稀释 10 倍，过 0.45l 滤膜，得样品溶液。表.2 提取溶剂的选择提取溶剂 取样量（g） 峰面积 紫丁香苷含量(mg/g)水 5.1141 644.1962 14.7620乙醇 5.5322 625.7435 14.3450乙醇 5.2163 609.9269 13.9875乙醇 5.1231 613.8811 14.07乙醇 5.4224 614.7597 14.09由上述数据可知，在 50ml 溶剂回流提取条件下，提取率水与不同浓度的乙醇对紫丁香苷的提取量影响不大，但以水提取结果较好，因此选择水作为提取溶剂。2.2.3 提取时间的选择取同一批次的救必应、东风桔、香附药材，粉碎成粗粉，按方中各药比例称取药粉，加水 50ml，分别回流提取 30 分钟、40 分钟、50 分钟、60 分钟、120 分钟。过滤，浓缩蒸干，加乙醇 10ml 溶解，取约 1ml 稀释 10 倍，过 0.45l 滤膜，得样品溶液。结果见表 3。表.3 提取时间的选择提取时间（min） 取样量（g） 峰面积 紫丁香苷含量(mg/g)30 10.1141 493.9385 11.3440 10.1033 524.2537 12.0350 10.3163 565.9919 12.9860 10.1331 616.0778 13.12120 10.4334 609.9269 13.13结合前面提取 1 小时和 2 小时的峰面积，可知，虽然回流提取 2 小时提取的紫丁香苷含量最高，但是紫丁香苷在提取 1 小时时已经提取较完全，在实际生产中，为了节约成本，提高生产效率，可以适当缩短提取时间。2.2.4 提取溶剂用量的选择取同一批次的救必应、东风桔、香附药材，粉碎成粗粉，按方中各药比例称取药粉，分别加药材的 2、4、6、8、10 倍量的水，回流提取 2 次，每次 1 小时。过滤，浓缩蒸干，加乙醇 10ml 溶解，取约 1ml 稀释 10 倍，过 0.45l 滤膜，得样品溶液。表.4 提取溶剂用量的选择提取倍数 取样量（g） 峰面积 紫丁香苷含量(mg/g)2 9.9358 537.4342 12.334 10.1215 524.2537 12.856 9.9853 565.9919 12.918 9.9331 616.0778 12.8810 9.4040 609.9269 12.93由数据可知，提取的紫丁香苷含量与溶剂体积有一定关系，有随着溶剂体积的增加而增加的趋势，在 10 倍量水时紫丁香苷含量最高，但是在 6 倍量水时其提取量变化逐渐变小，这可能与药材中紫丁香苷的含量多少有关，当溶剂达到一定量时，由于药材中紫丁香苷已经提取基本完全，这时再增加溶剂体积，提取的紫丁香苷就不会有明显变化。2.3 正交实验设计优化提取工艺2.3.1 实验设计结合单因素预实验，考虑到生产工艺的成本，选用水为溶剂进行提取，然后分别对提取时间、提取用水量、提取次数进行正交实验，并以紫丁香苷的含量为指标对实验结果进行评价。表.5 提取工艺正交实验设计表A B C因素水平提取时间（min）溶媒倍量（BV）提取次数1 45.0 4 12 60.0 6 23 90.0 8 32.3.2 紫丁香苷的含量测定方法2.3.2.1 色谱条件色谱柱:Phnomenex(菲罗门)：Cl8柱(250mm4.6mm)；流动相:乙腈-水(15:85)；柱温:25；流速:1.0mLmin。理论塔板数按紫丁香苷计算应不低于3000。2.3.2.2 检测波长的选择取紫丁香苷对照溶液,稀释成合适的浓度,进行紫外光谱扫描,在 220nm 和 265nm 处有较大光谱吸收,虽然 220nm 吸收较大,不过考虑到其他的干扰,选择了 265nm 为检测波长（图1）。图 1:紫丁香苷对照品紫外光谱扫描图2.3.2.3 对照品溶液的制备精密称取已恒重干燥的丁香苷对照品适量,加水溶解成每约1ml含20g紫丁香苷的溶液,作为对照品溶液。2.3.2.4 线性关系考察精密称取干燥至恒重的紫丁香苷对照品6.4mg，加水25ml使溶解，过0.45m微孔滤膜，稀释成一系列不同浓度的溶液，分别进样量10l，依法测定，得紫丁香苷峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线；表 6 紫丁香苷含量测定线性关系表进样量（g） 峰面积 1 峰面积 2 平均峰面积 0.2560 7.1078 8.0860 7.59690.5120 18.3165 17.9967 18.15661.5360 61.0624 63.1886 62.12552.5600 108.6542 107.9354 108.29483.5840 153.7644 153.6544 153.70944.6080 197.4012 198.6478 198.0245图.2 紫丁香苷线性关系图曲线方程：Y= 43.935X4.2844 ，r=0.9999；结果表明，紫丁香苷在进样量 0.2564.608g 范围内呈良好线性关系。2.3.2.5 精密度试验取紫丁香苷对照品溶液，依法测定，进样量 10l，连续测定 6 次，计算紫丁香苷峰面积标准偏差；结果表明方法精密度良好。结果见下表 7。 表 7：精密度试验结果测定次数 1 2 3 4 5 6 RSD(%)峰面积 42.7650 43.7161 43.6912 43.6857 43.7533 43.5885 0.872.3.2.6 重复性试验取紫丁香苷对照品溶液，依法测定，平行操作 6 份，进样量 10l，计算结果，RSD为 1.20%。结果表明，方法重复性良好，结果见表 8。表 8 重复性试验结果序号 1 2 3 4 5 6 平均 RSD(%)含量 21.3776 21.6861 21.7113 21.2237 21.6469 21.1787 21.5307 1.20y = 43.935x - 4.2844R2 = 0.99990501001502002500 1 2 3 4 5进 样 量峰面积 系 列 1线 性 (系 列 1)(mg/g)2.3.2.7 稳定性试验取紫丁香苷对照品溶液，按色谱条件测定 6 次，每次间隔 2h，进样量 10l，计算结果，RSD 为 1.20%。结果表明，样品在 12 小时内稳定性良好。结果见表 9。表 9 稳定性试验结果时间（h） 2 4 6 8 10 12 RSD(%)峰面积 55.1166 54.9516 53.4847 53.3435 53.2303 54.3730 1.562.3.3 正交实验结果按照下面实验安排进行实验，所测得紫丁香苷含量见表 10.表.10 提取工艺正交实验结果因素 提取时间（min）溶媒倍量（BV）提取次数紫丁香苷含量（）实验 1 45.0 4 1 9.55 实验 2 45.0 6 2 10.01 实验 3 45.0 8 3 10.26 实验 4 60.0 4 2 9.26 实验 5 60.0 6 3 10.15 实验 6 60.0 8 1 10.08 实验 7 90.0 4 3 9.87 实验 8 90.0 6 1 9.89 实验 9 90.0 8 2 10.12 均值 1 9.940 9.680 9.940 均值 2 9.950 10.017 9.987 均值 3 9.960 10.153 9.923 极差 0.020 0.473 0.064 表.11 正交实验方差分析表来源 离均差平方和 自由度 F 值 显著性A 0.001 2 0.167 B 0.356 2 59.333 *C 0.101 2 16.833 D(误差) 0.010 2F0.05(2,2)=19.0由实验分析可知：对提取工艺的影响大小为 BCA,其中 B 为主要因素,C 有影响，A 的影响不明显。综合直观分析和方差分析的结果,复方救必应胶囊最佳处方为 A2B2C2。提取用水量是影响提取工艺的主要因素，以 6 倍量水为佳，提取次数亦对提取结果有影响，以 2次为好，提取时间对结果影响不明显，可根据生产工艺灵活选用，结合单因素实验结果，时间以 60 分钟为好。因此，确定最佳提取工艺为用 6 倍量水回流提取 2 次，每次 60 分钟。3.结论最终优化的复方