第九章免疫学实验技术概述

第九章 免疫学实验技术概述血清学反应：体外发生的抗原抗体反应。 第一节 体液免疫的检测 血清学反应所有血清学反应类型的基本原理：抗原抗体反应的特异性。二、血清学反应的一般规律(一 )特异性 Ab只能与相应 Ag特异结合。 Ag表面常具有多个 (多种 )不同表位，所以免疫血清中也应含有相应多种特异性 Ab。抗原与抗体的结合的特异性（二）交叉性交叉抗原：不同的 Ag物质之间存在相同的 Ag表位时，称为交叉抗原。交叉反应：又不同抗原制备的抗血清除与各自的相应 Ag发生反应外，尚能与对方Ag发生反应。通常两种 Ag之间亲缘关系越近，交叉反应程度越高。 A B抗原与抗体的结合的交叉性(三 )用已知测未知v 所有血清学反应都毫无例外地是用已知 Ag测未知 Ab或用已知 Ab测未知 Ag。v 用已知测未知的依据：抗原抗体的反应是特异的。v 正确理解实验原理或进行试验设计的关键是搞清楚什么是已知，什么是未知，谁是抗原身份，谁是抗体身份，谁是身兼两职的。(四 )试验与抑制试验许多血清学试验可以被相应的 Ag Ab所抑制，即抑制反应现象的出现，抑制试验可以验证反应的特异性；还可使一些不易被检测的 Ag(如简单半 Ag)或 Ab(如单价 Ab)， 得以检出。(五 )结合力与离解力Ag， Ab的结合为弱能量的非共价健结合，其结合力决定于 Ag表位与 Ab的 结合点之间所形成的非共价健的数量，性质和距离，包括 4种力的作用： vAg-Ab结合的离解力指 Ag-Ab结合具有可逆性，因为 Ag-Ab之间靠非共价结合，因此在一定条件下可使其解离。解离后的 Ag-Ab仍保留其原有活性。(六 ) 结合比例v Ag与 Ab的结合常需适当比例才出现可见反 应，在最适比例时反应最明显；v 这种现象可以用 “ 格子学说 ” 来解释： Ab(1gG)为二价， Ag通常为多价，只有 Ag， Ab结合形成大的复合物，肉眼才可见；v带现象只有当 Ag与 Ab比例适当时，才能形成大的复合物，比例不适当，就只能形成小的复合物而抑制反应现象的出现 .v前带现象： Ab过剩， Ag过少；稀释 Abv后带现象： Ag过剩， Ab过少；稀释 Ag。(七 ) 血清学反应的影响因素1电介质：生理盐水，缓冲盐水，少数动物 (禽 )血清用 8.5 NaCl；2 温度；3 pH： pH6.0 8.0三、血清学技术的优越性(一 )检样量少，预处理简单：一滴血清 /血、一根羽毛、少许组织悬液、植物一片子叶等。(二 )种类多，可择优选用(三 ) 方法简便快速(四 ) 特异性、敏感性(五 ) Ag/Ab定位、定量 四、血清学试验的制定原则特定的或建立新的血清学方法时，应注意以下原则：(一 ) Ag准备和提纯1购自试剂公司：如半 Ag、 激素、酶、农药、抗生素、昂贵的天然 Ag等。2自制：一般天然 Ag、 动物血清、组织 Ag等(二 ) Ab制备提纯 (三 )操作程序制定(四 )材料准备和滴定：工作浓度滴量(五 )试验条件选择：(六 )特异性试验1 Ag、 Ab验证：反复、重复验证2交叉试验3抑制试验 (阻断 )(七 )敏感性试验(八 )重复性试验(九 )稳定性试验五、血清学试验的应用(一 ) 血清学诊断(二 ) 生物活性物质超微定量(三 ) Ag/Ab亚细胞、细胞水平定位(四 ) Ag组分分析，如病毒结构蛋白可用免疫转印，免疫沉淀 (琼扩、电泳、交叉免疫电泳等 )(五 ) 物种鉴定分型(六 ) 有机物提取纯化六、血清学试验的类型（一）沉淀反应：环状沉淀试验琼脂扩散：免疫电泳对流电泳火箭电泳双向电泳补体结合试验（二）凝集反应：直