课题1微生物的实验室培养

第1部分专题2课题1理解教材新知把握热点考向应用创新演练知识点一知识点二考向一考向二自读教材 夯基础 1培养基(1)概念：人 们 按照微生物 对 的不同需求，配制出的供其 的 营 养物 质 。营 养物 质生 长 繁殖液体培养基固体培养基 菌落元贝驾考 元贝驾考 2016科目一 科目四金手指考试 金手指驾驶员考试(3)营 养成分：水、无机 盐 、 、 ，此外 还 要满 足微生物生 长对 、特殊 营 养物 质 及 的要求。2无菌技 术(1)目的：防止 污 染。(2)方法 消毒和 灭 菌。碳源 氮源pH 氧气外来 杂 菌消毒 灭 菌概念使用 较为 的物理或化学方法 杀 死物体 或 的部分微生物 (不包括 )使用 的理化因素杀 死物体内外 的微生物 (包括 和 )常用方法消毒法、 消毒法、 消毒法、紫外 线 消毒法灼 烧灭 菌、干 热灭 菌、高 压 蒸汽 灭 菌适用对 象操作空 间 、液体、双手等接种 环 、接种 针 、玻璃器皿、培养基等温和表面内部芽 孢 和 孢 子煮沸 巴氏化学 药剂强 烈所有芽 孢 孢 子1下面是察氏培养基 (培养霉菌所用 )的主要成分， 请根据下述培养基，回答下列 问题 ：蔗糖NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4琼 脂水 定容至 1 000 mL20 g3 g1 g1 g0.5 g0.01 g20 g(1)该 培养基根据物理性 质 划分 应 是什么培养基？ 为 什么？(2)该 培养基包含微生物生 长 和繁殖所需要的几 类营 养物 质 ？分 别 是什么？(3)蔗糖提供的是哪 类营 养物 质 ？ NaNO3提供的是哪 类营 养物 质 ？(4)在提供上述几种主要 营 养物 质 的基 础 上，培养基 还需要 满 足微生物所需要的哪些条件？提示： (1)固体培养基。因 为该 培养基加入了凝固 剂琼脂。(2)4种成分。分 别 是碳源、氮源、无机 盐 和水。(3)蔗糖提供的是碳源。 NaNO3提供的是氮源和无机 盐。(4)满 足微生物生 长对 pH、特殊 营 养物 质 以及氧气的需要。2探 讨 培养基、培养皿、接种 环 、 实验 者的双手、空气和牛奶所采用的 灭 菌或消毒方法。提示： 分 别为 高 压 蒸汽 灭 菌、干 热灭 菌、灼 烧灭 菌、化学消毒、紫外 线灭 菌、巴氏消毒法。跟随名师 解疑难 1培养基的成分营 养物 质 定 义 作用 主要来源碳源 凡能提供所需碳元素的物 质构成生物体的 细 胞物 质 和一些代 谢产物，有些是异养生物的能源物 质无机化合物： CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖 类 、脂肪酸、花生粉 饼 、石油等氮源 凡能提供所需氮元素的物 质合成蛋白 质 、核酸以及含氮的代 谢产物无机化合物： N2、 NH3、铵盐 、硝酸 盐 等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白 胨 等营 养物 质 定 义 作用 主要来源生 长因子生 长 必不可少的微量有机物酶 和核酸的 组 成成分维 生素、氨基酸、碱基等水 在生物体内含量很高不 仅 是 优 良的溶剂 而且可 维 持生物大分子 结 构的稳 定外界 摄 入无机盐为 微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素细 胞内的 组 成成分，生理 调节 物质 ，某些化能自养菌的能源， 酶的激活 剂无机化合物2.培养基的种 类(1)按物理性 质 分：名称 特征 功能固体培养基外 观 呈固体状 态 的培养基主要用于微生物的分离、 鉴 定液体培养基呈液体状 态 的培养基 主要用于工 业 生 产(2)按培养基功能分： 选择 培养基：允 许 特定种 类 的微生物生 长 ，同 时抑制或阻止其他种 类 微生物生 长 的培养基，如无氮培养基可 选择 培养固氮微生物。 鉴别 培养基：微生物或其代 谢产 物与培养基某些物 质发 生特定的 颜 色反 应 ，以 鉴别 不同微生物。自读教材 夯基础 1制 备 固体培养基计 算：依据牛肉膏蛋白 胨 培养基 比例， 计 算各成分的用量：牛肉膏比 较 黏稠，可用称量 纸 称取，牛肉膏和蛋白 胨 都易吸潮，称取的 动 作要迅速，称后及 时 盖上瓶盖配方称量：牛肉膏和称量 纸 水取出称量 纸 加蛋白 胨 和 氯 化 钠 加 琼 脂 (注意：不断用玻璃棒搅 拌，防止 琼 脂糊底而 导 致 烧 杯破裂 ) 补 加蒸馏 水至 100 mL灭 菌：待培养基冷却至 50 左右 时 ，在 附近 倒平板溶化干 热灭 菌倒平板 酒精灯火焰2 纯 化大 肠 杆菌(1)方法： ：通 过 接种 环 在 固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步 到培养基的表面。 ：将菌液 进 行一系列的 ，然后将不同 的菌液分 别 涂布到 琼 脂固体培养基的表面， 进 行培养。(2)鉴 定：将接种后的培养基和一个 的培养基都放入 恒温箱中，培养 12 h和 24 h后，分 别记录观 察。平板划 线 法 琼 脂 连续划 线 稀 释 分散稀 释 涂布平板法 梯度稀 释稀 释 度未接种37 (3)菌种保存：临时 保藏法 甘油管藏法适用对 象 使用的菌种 保存的菌种培养基类 型 固体斜面培养基 液体培养基温度 方法菌落 长 成后于冰箱中保存，每 3 6个月将菌种从旧的培养基 转 移到新 鲜 培养基上将培养的菌液与等体 积灭 菌后的 混合均匀后于冷 冻 箱内保存缺点 菌种易被 或 频 繁 长 期4 20 污 染 产 生 变 异甘油1培养基 灭 菌后，需要冷却到 50 左右 时 ，才能用来倒平板，你用什么 办 法来估 计 培养基的温度？提示： 可以用手触摸，感 觉 上以 刚 不 烫 手 为 准。2在用平板划 线 法接种大 肠 杆菌 时 ，第一次划 线 前、每次划 线 前及划 线 操作 结 束后，都要灼 烧 接种 环 ， 请 分析其目的分 别 是什么。提示：第一次灼烧 每次划线前灼烧 划线结束灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结束后接种环上残留的微生物，使每次划线的微生物来自上次划线末端杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者3在 纯 化大 肠 杆菌操作中，如何 验证 培养基 灭 菌是否 彻 底？提示： 将接种后的培养基和一个未接种的培养基，都放在 37 恒温箱中培养， 观 察并 记录结 果。跟随名师 解疑难 1微生物培养中有关 实验 操作的注意事 项(1)倒平板操作： 培养基 灭 菌后，需冷却至 50 左右 时 才能倒平板，原因是 琼 脂在 44 以下凝固。 培养皿打开一条稍大于瓶口的 缝 隙，不要完全打开。 整个操作 过 程要在酒精灯火焰旁 进 行，避免 杂 菌 污 染。 平板冷凝后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，造成 污 染。 若倒平板 时 ，培养基 溅 在皿盖和皿底之 间 的部位，这 个平板 应丢 弃。(2)平板划 线 操作： 第一次划 线 及每次划 线 之前都需灼 烧 接种 环灭 菌，划 线 操作 结 束仍需灼 烧 接种 环 。 灼 烧 接种 环 之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高 杀 死菌种。 划 线时 最后一区域不要与第一区域相 连 。 划 线 用力要大小适当，防止用力 过 大将培养基划破。2稀 释 涂布平板操作(1)稀 释 操作 时 ：每支 试 管及其中 9 mL水、移液管均需 灭 菌；操作 时 ， 试 管口和移液管 应 在离火焰 1 2 cm处。(2)涂布平板 时 ：稀 释 涂布平板的操作比 较 复 杂 ，且各个 细节 均需保 证 “无菌 ”， 应 特 别 注意： 酒精灯与培养皿的距离要合适。 吸管 头 不要接触任何其他物体。 吸管要在酒精灯火焰周 围 使用。3平板划 线 法和稀 释 涂布平板法的比较优 点 缺点 适用范 围平板划 线分离法可以 观 察菌落特征， 对 混合菌 进行分离不能 计 数 适用于好氧菌稀 释 涂布平板法可以 计 数，可以观 察菌落特征吸收量 较 少、较 麻 烦 ，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于 厌 氧菌和兼性 厌 氧菌例 1 下列描述正确的是 ( )A同一种物 质 不可能既作碳源又作氮源B除水以外的无机物 仅 提供无机 盐C凡是碳源都能提供能量D有些无机氮源也能提供能量解析 对 异养型微生物来 说 ，含 C、 H、 O、 N的化合物既是碳源，又是氮源。如蛋白 胨 既是碳源又是氮源和能源，葡萄糖是碳源同 时 又是能源。除水以外的无机物种类 繁多，如 CO2和 N2是无机物，但也是某些微生物的碳源和氮源。 CO2是光能自养 细 菌的碳源，但不能提供能量。NaHCO3可作 为 自养型微生物的碳源和无机 盐 。硝