(06)生技期中答案

2003 级生技/生技 A/生技应用专业 生物技术学 （基因工程部分）期中考试题 答案要点 2006 年 4 月 25 日 第一部分（30%） 单项选择题，每题 2 分： 1 DNA 片段的分部分离可采用（ b ） （a）蔗糖密度梯度离心；（b）琼脂糖凝胶电泳；（c）100乙醇沉淀；（d）前述方 法都可以。 2 DNA 缺刻平移（nick translation）反应是由下列哪一种酶催化完成的。 （ c ） （a） 反转录酶； （b）T4 多核苷酸激酶； （c）DNA 聚合酶 I；（d）S1 核酸酶。 3 下列基因工程载体元件中哪一个是非必需的（ c ） (a) 复制起始位点；（ b）选择记号；（c ）标签序列；（d）克隆位点 4 下列哪一种酶反应时不需要引物？（ a ） （a）末端转移酶；（b）DNA 聚合酶 I； （c）逆转录酶； （d）Taq 酶 5 T4 多核苷酸激酶酶可用于 （ b ） （a） 防止 DNA 的自身环化；（b）进行 DNA 的 5末端标记； （c）制备突出的 3末端； （d）上述说法都正确 6 以下关于质粒 pUC18 的叙述哪一点是不正确的： （ d ） (a) 多拷贝； （b）具有多克隆位点； （c）可以进行蓝白斑筛选； （d）是穿梭 质粒。 7 以 RNA 为模板合成第一链 cDNA 时，cDNA 的 3末端常会形成发夹结构，除去该结构 可用 （ b ） (a) 限制型内切酶; (b) S1 核酸酶； （c）10mol/L 的 NaOH; ( d ) 3 外切核酸酶 8 Northern 杂交是指( d ) (a) 蛋白质和蛋白质之间的杂交；（b）DNA 和 DNA 之间的杂交；(c) 蛋白质和 DNA 之间的杂交； （d）RNA 和 DNA 之间的杂交。 9 琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理之一是根据（ a ） （a）核酸分子的大小；（b）核酸分子所带的电荷；（c）琼脂糖的分子量；（d）琼 脂糖的熔点。 10 下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确的为 （d ） （a）Sma. I；（ b）Sau 3A I；（ c）bamH I；（d）Eco R I。 11 下列哪一项不是酵母载体的元件。( c ) (a) HIS； （b）ARS； ( c )T7 promoter ； ( d ) 细菌 ori。 12 在长链模板的指导下引物延伸合成长的 DNA 互补链时应选用（ c ） (a) T4 DNA 聚合酶；（b）Klenow 酶； （c）Taq 酶；（d）大肠杆菌 DNA 聚合酶 13 用碱变性法微量提取质粒的方案中，溶液 II ( 含 SDS 和 NaOH ) 的作用是： （ b ）(a) 使反应溶液维持一定的 pH 值； （b）裂解细胞并使核酸和蛋白质变性；（c）裂 解细胞但仅让核酸变性； （d）裂解细胞但仅让蛋白质变性。 14 融合蛋白中的标签蛋白具有以下作用（ c ） 。 （a） 利于形成包涵体 ；（b）利于目标蛋白的糖基化； （c）利于目标蛋白的纯化；（d）提高目标蛋白的生物活性 15 进行 Sanger 双脱氧链终止法 DNA 测序时不需要的成份是（ d ） 。 （a）dNTP ；（b）ddNTP；（c）Taq 酶；（d）NTP。 第二部分（20%） 正误题正确填（+） ，错误填（-） ，每题 1 分 1 一般来说，严紧型控制的质粒拷贝数较高。 （ ）拷贝数较少 2 限制性核酸内切酶 HpaII 和 MspI 的来源不同，但识别的序列都是 CCGG，这类酶称 为同尾酶。 （ ）同裂酶 3 多克隆位点（MCS）中不同的内切酶的识别序列可以有重叠。 （ ） 4 限制与修饰现象是宿主的一种自我保护体系，它是通过对外源 DNA 的修饰和对自身 DNA 的限制实现的。 （ ）错的吧！ 5 Klenow 大片段酶缺失了 5-3外切酶的活性。 （ ） 6 PCR 反应中退火和延伸可以采用同一个温度。 （ ） 7 TE 缓冲液中的乙二胺四乙酸（EDTA）可以抑制核酸酶的活性，是因为 EDTA 能螯 合二价镁离子等的核酸酶辅助因子。 （ ） 8 末端脱氧核苷酸转移酶可以进行 DNA 分子 5-末端的标记。 （ ）T4 多核苷酸激 酶 9 毕赤酵母表达真核生物糖蛋白基因的一个缺点是产物常常会超糖基化。 （ ） 10 科斯质粒载体（cosmid）含有 DNA 的 cos 序列和质粒的复制起始位点。 （ ） 11 穿梭质粒载体在不同的宿主中具有不同的复制机制。 （ ） 12 标签蛋白（tag）可以将表达的融合蛋白转运到细胞外。 （ ） 13 噬菌粒 pUC118 既能合成单链 DNA 也能合成双链 DNA。 （ ） 14 大肠杆菌 DH5 只在其生长的某一时期才出现感受态。 （ ） 15 DNA 探针既可作为探针也可作为引物使用。 （ ） 16 酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid system）主要用来研究蛋白质和蛋白质之间的相 互作用。 （ ） 17 用免疫化学法筛选重组体不需要外源基因的表达。 （ ） 18 3突末端或 3凹末端都可以用 Klenow 大片段酶进行标记。 （ ）末端脱氧核苷酸 转移酶 19 报告基因能用于检测启动子的活性。 （ ） 20 酵母分泌表达外源蛋白时，会在细胞外将信号肽序列除去。 （ ） 第三部分 名词解释（10，每题 2 分） （可用中文或英文回答） 1 Western blot 一种通过将蛋白质转移到固相载体上检测目标蛋白的方法。 2 Linker 一段人工合成的双链 DNA 短片段，用于连接到目标 DNA 片段的两端，便于克隆。 3 Cosmid 一种具有质粒特性又有噬菌体载体特性的载体。 4 Colony PCR 直接提取菌落 DNA 用特异引物进行 PCR 反应鉴定重组子的方法。 5 Inclusion body 大肠杆菌表达的外源蛋白不能形成正确的构型从而聚集成的不溶性无活性的聚合体。 第四部分 问答题（40%） ，请选择其中 4 道题回答，每题 10 分（多选不加分）： 1 试叙述将一个平末端的 DNA 片段克隆到载体上 EcoRI 和 XhoI 限制位点之间去的方法。 答案要点：（1）平末端的 DNA 片段两端接街头或衔接物；（2）载体补平再连接。 2 叙述 pUC18/19 载体可进行蓝白斑筛选的原理。 答案要点：在 IPTG 诱导下，载体上 LacZ基因表达的 beta 半乳糖苷酶的氨基端肽段与宿 主表达的羧基端肽段实现 alpha 互补，形成有活性的 beta 半乳糖苷酶，该酶可降解 X- Gal，形成蓝色产物，因此转化子呈蓝色。如果由于外源基因的插入破坏了 LacZ基因，则 不能形成有活性的 beta 半乳糖苷酶，转化子呈白色。 3 假设人类细胞中某一蛋白质的功能及其氨基酸序列是已知的，试叙述克隆其编码基因 的方法。 答案要点：根据氨基酸序列合成核苷酸探针或设计 PCR 简并引物，构建 cDNA 文库进行筛 选；或者利用相应的抗体从 cDNA 表达文库中筛选相应地克隆。 4 试叙述菌落原位杂交鉴定目的基因的原理和基本步骤。 答案要点：（1）原理：将转化平板上的重组菌落原位转移到固相载体上，然后利用标记探 针与载体杂交，根据杂交位点在原始平板上找到目标克隆。 （2）步骤：制备目的基因的标 记探针，将转化平板上的菌落一一对应转印到硝酸纤维素膜上，保留原初平板，对膜上的 菌落进行碱变性，中和，用缓冲液洗去细胞碎片，烤干或紫外照射将 DNA 交联到膜上， 在缓冲液中膜与探针杂交，洗去未杂交上的探针，放射自显影，返回平板挑取阳性菌落。 5 利用大肠杆菌表达外源基因时，为什么以及如