川楝子醇提物体外肝细胞毒性研究

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 川楝子醇提物体外肝细胞毒性研究 【摘要】 中国论文网 /6/view-12957155.htm 目的:考察川楝子醇提物体外细胞 毒性。方法:将川楝子醇提物倍比稀释后 与小鼠肝细胞接触培养,通过显微镜观察 其形态,采用 MTT 法量化细胞毒性,计算 相对增殖率。结果:川楝子醇提物对肝细 胞的生长抑制作用无统计学差异 （P0.05） ，川楝子醇提物肝细胞毒性 级别为 0 级。结论:川楝子醇提物无明显 的肝细胞毒性。 【关键词】川楝子醇提物;细胞毒 性; MTT 法 【中图分类号】R104.45 【文献 标识码】B 【文章编号 】1005- -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 0515(2011)10-0417-02 川楝子(FructusToosendan) 是临 床常用中药。据中国药典2010 年 版所载为楝科植物川楝 (Melia toosendanSieb. et Zucc.) 的干燥成熟果 实，有肝小毒。本文用 MTT 法考察川 楝子醇提物对肝细胞的毒性程度。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂。 小鼠，1640 培养液，小牛血清， 噻唑蓝，CO2 恒温培养箱，酶标仪， 显微镜。 2 实验方法 2.1 供试品溶液制备:用含 10%血 清的 1640 培养基将供试品稀释至所需 浓度。 2.2 细胞接种:用机械分离法，将 小鼠肝脏剪碎，研磨，使肝细胞从肝组 织上脱落,获肝细胞，制成单个细胞悬液。 用含 10%血清的 1640 培养液种植消化 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 并稀释，将细胞密度调整为 1106 个/ml，接种到 96 孔培养板，每孔接种 200l 细胞悬液。置 CO2 培养箱 37培养使细胞贴壁 24h。 2.3MTT 法:取 8ml 供试品，倍比 稀释成 6 个不同浓度。设细胞对照组和 6 个不同浓度供试品组（从高到低浓度 依次为组、组、组、组、组、 组） ，每组 8 个复孔。在各孔中分别 加入 100L 培养液及 100L 不同浓度的 供试品稀释液，置 CO2 培养箱继 续培养 72h。置显微镜下观察细胞形态 （图 1） 。每孔加入 MTT 溶液 50L，37孵育 4h。置显微镜下观察 细胞形态（图 2） 。弃去孔内培养基和 MTT 溶液，再加入 DMSO 200L，混 匀 10min，采用酶标仪，在 492nm 和 630nm 处分别测定吸光度 A 值，用各孔 A492nm-对应孔 A630nm，取平行 4 孔 差值计算各组平均值。按下式计算细胞 相对增殖率： -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 细胞相对增殖率（RGR） =A/A0100% 式中：A 为供试品组吸光度；A0 为细胞对照组吸光度均值。 2.4 统计方法。 实验数据采用 SPSS11.0 统计处 理，计量数据 A 值以（Xs）表示，采 用 t 检验进行比较。 3 结果 3.1 细胞形态学观察。 显微镜下观察，肝细胞呈贴壁 生长，细胞多呈圆形、三角形、梭形， 胞浆丰富，细胞核有单或双核，呈圆形 或椭圆形。在每孔加入 MTT 溶液 37 孵育 4h 后,细胞生长密集,其形态和核相 均没有发生改变。结果见图 1 、图 2。 3.2 药物对细胞相对增殖的影响。 与细胞对照组相比，不同浓度供 试品组吸光度值均明显升高，有统计学 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 意义（分别为 P0.05、P0.01、P0.001） 。结果见 表 1。 表 1 细胞对照组和不同浓度供试 品 A 值比较（Xs） 组别 A 值 细胞相对增值率 （% ） 细胞对照组 0.500.29 组 1.290.25*259 组 1.210.19*242 组 0.960.47* 191 组 1.270.60* 255 组 1.170.59* 235 组 1.510.17* 303 注：与细胞对照组比较 *P0.05，*P0.01，*P0.001 4 结论 川楝子乙醇提取物无肝细胞毒性。 5 讨论 细胞活性和增殖状况的测定是评 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 价药物毒性过程不可或缺的步骤。MTT 法是最为简单、迅速和高敏感性的检测 细胞活性与生长增殖的方法。其原理为： 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外 源性的 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色 结晶物甲H，并沉积在细胞中， 而死细胞则无此功能。DMSO 能溶解细 胞中的甲H ，用酶联免疫检测仪在 490nm 波长处测定其光吸收值，可间接 反映活细胞数量，同时也可计算细胞相 对增值率（RGR ）或抑制率。本实验结 果表明，川楝子醇提物有明显的促进肝 细胞生长增殖作用。RGR 与药物毒性 级别的对应关系为：当 RGR 大于或等 于 100%时，级别为 0 级；当 RGR 在 75%99%时，级别为 1 级；当 RGR 在 50%74%时，级别为 2 级；当 RGR 在 25%49%时，级别为 3 级；当 RGR 在 1%24