全国艾滋病检测工作规范

全国艾滋病检测工作规范 前言 为了加强全国艾滋病（AIDS）检测工作的管理，提高检测工作质量，根据中华人民 共和国传染病防治法、关于加强预防和控制艾滋病工作的意见、采供血机构和血 液管理办法及血液制品管理条例的精神，对全国 HIV 检测管理规范（试行）进 行了修改，制定全国艾滋病检测工作规范（下称“规范“）。 艾滋病检测系指对人体血液、组织液、排泄物、组织、器官、精液以及有关血液制品、 生物组织或其他物品等进行艾滋病病毒（HIV）或其相应标志物的实验室测定，包括分离 HIV、检测 HIV 抗原、测定核酸和检测 HIV 抗体。鉴于目前常规检测方法为血液中 HIV 抗体 检测，本规范着重对这项检测工作作出相应的规定。 各级卫生行政部门负责辖区内 HIV 抗体检测实验室的管理，统筹规划辖区内各类 HIV 抗体检测实验室的设置，并经常进行监督和检查，以保证各类实验室的正常运转和检测质 量。本规范适用于全国所有 HIV 抗体检测实验室。 一.实验室的设置 （一）种类和分级 1、种类：HIV 抗体检测实验室分为确认与初筛（或称筛查）实验室两类。每省可以设 立一个以上确认实验室，初筛实验室可以设立在卫生防疫防治机构、检疫机构、医疗机构、 采供血机构、生物制品生产单位、医学科研教学等单位内。 2、分级：国家在中国预防医学科学院设立一个国家 HIV 抗体检测参比中心，各省、自 治区、直辖市分别在省卫生防疫站设立省级 HIV 抗体确认中心，并可根据需要在地、市级 卫生防疫站或有关系统中设立 HIV 抗体确认、初筛中心和初筛实验室。 （二）任务 1、HIV 抗体初筛实验室 （1）对本地按规定和要求检测的对象作 HIV 抗体初筛检测，并提供检测前、后的咨询 服务； （2）及时将初检呈阳性反应的标本送 HIV 抗体初筛中心实验室，再转送确认实验室确 认； （3）做好初检标本登记、实验记录，定期向当地的 HIV 抗体初筛中心实验室或省级 HIV 抗体确认中心报告 HIV 抗体检测情况。 2、HIV 抗体初筛中心实验室 （1）对本地按规定和要求检测的对象作 HIV 抗体初筛检测和咨询服务； （2）负责对本地区或本系统内其他 HIV 抗体初筛实验室发现的初检呈阳性标本的复检 工作，以及技术培训、咨询服务、质量管理和质量控制等工作； （3）收集、汇总本地区或本系统内其他 HIV 抗体初筛实验室的检测工作情况，上报省 级 HIV 抗体确认中心。 3、HIV 抗体确认实验室 （1）承担卫生部和省级卫生行政部门指定区域的 HIV 抗体确认任务； （2）承担部分 HIV 抗体初筛任务； （3）及时向省级 HIV 抗体确认中心和同级卫生行政部门报告确认的阳性结果； （4）按月向省级 HIV 抗体确认中心上报 HIV 抗体检测工作情况。 4、省级 HlV 抗体确认中心 （l）承担卫生部和省级卫生行政部门指定区域的 HIV 抗体确认和部分初筛任务； （2）负责本省内所有 HIV 抗体检测实验室的人员培训和质量控制工作.每年至少开展 一次； （3）负责收集、整理、分析本省各类 HIV 抗体检测实验室的检测、质控等工作情况， 分别报省级卫生行政部门和中国预防医学科学院； （4）评估本省内使用的 HIV 抗体检测试剂质量，供各类实验室应用时参考。受卫生部 新药审批中心的委托，对试生产或转为正式生产的 HIV 抗体检测试剂进行临床评估； （5）接受省外送检的确认标本； （6）如果本省内暂时没有确认实验室，省级卫生防疫站负责上述除 HIV 抗体确认外的 其他任务。 5、国家 HIV 抗体检测参比中心 （1）承担全国 HIV 抗体检测工作中疑难样品分析和确认任务； （2）向全国提供有关 HIV 检测工作的技术指导和培训，组织全国性的业务培训，每年 不少于一次； （3）定期召集全国省级 HIV 抗体确认中心会议； （4）对省级 HIV 抗体确认实验室进行质量控制，每年不少于一次； （5）为各省提供有关 HIV 检测技术进展和全国 HIV 检测工作的信息与资料； （6）组织编写和修改 HIV 检测技术工作手册。 （三）必备条件 1、人员条件 （1）初筛实验室：有 3 名以上的医技人员，其中中级卫生技术职称人员 1 名以上（采 供血机构的 HIV 抗体检测人员须具有技师以上卫生技术职称），从事病毒血清学检测技术 工作 2 年以上，接受过国家或省级 HIV 抗体确认中心举办的 HIV 抗体检测学习班培训，并 获得合格证书。 （2）确认实验室：有 5 名以上的医技人员，其中高级卫生技术职称人员 1 名以上，中 级卫生技术职称人员 2 名以上；担任确认试验的操作人员，需从事病毒血清学检测技术工 作 5 年以上，HlV 抗体筛查工作 3 年以上，受过国家或省级 HIV 抗体确认中心举办的 HIV 抗体确认试验学习班培训，并获得合格证书。 2、设备条件 （1）初筛实验室：有独立的实验用房（或至少有专用的检测台），污染区和清洁区要 分开。从我国 HIV 抗体检测工作发展要求，要以酶联免疫法测定考虑所需的检测器材，包 括酶标读数仪和洗板机、精确的移液器、专用的普通冰箱、低温冰箱、离心机以及各种消 毒与污物处理设施、安全防护用品和恒温设施。 （2）确认实验室：有单独的实验用房，设清洁区、半污染区和污染区三个区域，同时 具备初筛实验和确认实验用的设备，包括专用的普通冰箱、低温冰箱、水浴箱、温箱、离 心机、进口酶标读数仪、全自动洗板机、旋转震荡器、摇床、精确的移液器、具有高敏感 度和特异度的初筛与确认试剂、贮存或分析资料用的专用电脑和必要的摄影器材、必需的 消毒和污物处理设施、具有初筛和确认试验所需的安全防护条件和有关设备，以及实验室 恒温设施，并要建立血清库。 二、实验室的审批 设立 HIV 抗体初筛实验室的单位（包括中央直属单位和研究机构），须先报经当地卫 生行政部门同意后，再向省级卫生行政部门申请；由省级卫生行政部门组织专家组按本规 范的要求，就人员业务素质、实验室设施、场地、检测对象等进行实地考核和全面论证， 合格后发给批准文件或证书，并报卫生部疾病控制司和国家 HIV 抗体检测参比中心备案。 设立 HIV 抗体确认实验室的单位，由省级卫生行政部门对申报的确认实验室初评合格 后，报卫生部疾病控制司审批。卫生部疾病控制司将组织专家组进行全面论证和审核后发 给批准文件或证书。 初筛实验室审评专家组人数不少于 4 人。成员来自确认实验室或初筛中心实验室。初 筛实验室审评专家组成员由省卫生行政部门确定。确认实验室审评专家组人数不少于 4 人。 成员来自确认实验室。确认实验室审评专家组由卫生部疾病控制司确定。 每次审评论证的专家应不少于 3 人。 HIV 抗体初筛和确认实验室均应向同级计量部门申报并认可。 三、HIV 抗体检测程序 （一）检测试剂 1、初筛用的 HIV 抗体检测试剂，必须是 HIV-1/2 混合型，经卫生部批准或注册，经过 批批检检定合格，并在有效期内。常用的检测方法有固相酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay,ELISA）等. 2、确认试验为对初筛结果予以确定的检测方法，使用试剂应经卫生部批准或注册，并 在有效期内。常用的检测方法有免疫印迹法（Western Blot-WB）、条带免疫试验（LIA） 及免疫荧光试验（IFA），其中以免疫印迹法最为常用。以下的检测程序及流程图均以免疫 印迹法为例，使用其他方法时应参照执行。 常用的免疫印迹 HIV 抗体确认试剂有 HIV-1 型、HIV-2 型和 HIV-1/2 混合型，如用单一型 的 WB，先做 1 型再做 2 型测定。 （二）HIV 抗体检测程序及其流程图 1、初筛试验 （1）血液标本验收合格后，用初筛检测试剂进行检测，如呈阴性反应，则作 HIV 抗体 阴性报告； （2）初筛检测结果呈阳性反应的标本，须进行重复检测。复检时用两种不同原理的初 筛检测试剂复测； （3）如两种试剂复检结果均呈阴性反应，则作 HIV 抗体阴性报告；如均呈阳性反应， 或有一份阳性，该标本需送上级实验室加以进一步证实。送检时应将重新采集的该受检者 血液标本和原有血液标本一并送 （4）初筛检测的流程图（略） 2、确认试验 （l）复核：将初筛实验室检测呈阳性反应的标本，连同新采集的血液标本，同时用两 种高质量的初筛试剂复核，如均呈阴性反应，经与初筛检验人员共同研究复核检测结果， 确定无误后作阴性报告，不必做免疫印迹法。只要任何一种试剂检测结果呈阳性反应，须 用免疫印迹法证实； （2）如免疫印迹试剂为单一型，则先做 HIV-1 型； （3）如呈阳性反应，则作阳性确认报告； （4）如呈阴性反应，则再做 HIV-2 型免疫印迹法检测；如呈阳性反应则作 HIV-2 型阳 性确认报告；如为阴性反应，则作 HIV-1/HIV-2 阴性确认报告； （5）如 HIV-1 型确认试验呈可疑反应，应随访同时再做 HIV-2 型免疫印迹法，如呈阳 性反应，则作 HIV-2 型阳性确认报告；如 HIV-2 型呈阴性反应，则作 HIV-2 型阴性确认报 告；如 HIV-2 型呈可疑反应，应随访； （6）随访时间以每 3 个月一次，连续 2 次，仍呈可疑或阴性反应则作阴性确认报告； 如果在此期间发现阳性反应，则作阳性确认报告； （7）免疫印迹法检测程序流程图； （8）如选用的免疫印迹法为 HIV-1/2 混合型，则采用下列流程图； （9）也可将初筛检测呈阳性反应的标本直接用免疫印迹法检测，其检测程序基本上与 上述相仿，仅流程图省去复核部分； （10）按出现的条带反应，判定各型别的阳性反应、阴性反应和可疑反应； （11）如使用 HIV-1/2 混合型免疫印迹试剂，出现 gp36 条带，其结果可能为 HIV-2 感 染或 HIV-1 与 HIV-2 混合感染，需要用 HIV-2 型免疫印迹（WB-2）试剂检测，予以鉴别。 四、检测结果的判定和处理 （一）免疫印迹法检测后的判定标准 1、HIV 抗体阳性（+） 有下列任何一项者，即可确认： （1）至少有二条 env 带出现； （2）至少有一条 env 带和 p24 带同时出现。 2、HIV 抗体阴性（ ） 无 HIV 抗体特异带出现。 3、HIV 抗体可疑（）：出现 HIV 特异性抗体带，但带型不足以确认阳性的。 注：env 带指 gp160、gp120、gp41（HIV-2 型为 gp140、gp105、gp36） gag 带指 p55、p24、p18（HIV-2 型为 p56、p26、p16） pol 带指 P65、P51、P31（HIV-2 型为 p68、p53、p34） 上述标准为判读免疫印迹检测结果的基本原则，在实际工作中还应参照所用试剂的 说明书综合判断，遇疑难情况应报上级实验室解决。 （二）检测结果的处理 对 HIV 抗体阳性者应做好咨询、保密和报告工作。对 HIV 抗体阴性者，如近期有高危 行为如性乱史、吸毒史、受血史、献血浆史，或有急性流感样症状等情况，为排除窗口期 的可能，建议每 3 个月复查一次，连续 2 次。对 HIV 抗体可疑的对象要作好咨询和随访工 作。 五、反馈与报告程序 （一）HIV 抗体初筛实验室 l 、初筛检测中发现 HIV 抗体阳性反应的标本，应尽快（城区一般要求在 48 小时内， 农村要求在 96 小时内）将血样连同原始实验资料（包指厂家批号、试剂种类、有效期，如 ELISA 实验应附上阴性、阳性对照值，Cut off 值及样品 OD 值）和送检化验单送卫生行政 部门指定的初筛中心实验室，再转送确认实验室，或直接送 HIV 抗体确认实验室。送检化 验单必须由初筛实验室一名直接实验操作人员和一名中级技术职称以上的负责人员签名。 初筛实验室不得向受检者宣布初检阳性反应结果。 2、做好标本收集与检测登记工作，每月 5 日按统一表格向卫生行政部门指定的 HIV 抗 体初筛中心实验室报告检测情况，如无 HIV 抗体初筛中心实验室，则直接向省级 HIV 抗体 中心报告。 （二）HIV 抗体初筛中心实验室 1、对 HIV 抗体初筛实验室送来的可疑标本及时核对、登记，按卫生行政部门的规定进 行复检或转送确认实验室，并附上实验报告及化验单，包括具体的检测 OD 值和 Cut off 值， 及所用试剂的名称、厂家、批号和有效期。凡复检结果阴性的，在送检化验单上盖上“HIV 抗体阴性”字样，并把结果及时反馈给送检单位，此样品不必再送确认实验室；如复检结 果无法排除抗体阳性及本实验室初筛检测中发现的阳性标本，应及时送确认实验室确认； 2、将本中心连同各 HIV 抗体初筛实验室上报的检测情况汇总后，每月 10 日按统一表 式上报省级 HIV 抗体确认中心。 （三）HIV 抗体确认实验室 1、严格核对送检标本和送检化验单，确认无误后，按 HIV 抗体检测程序进行确认试验。 如属阴性结果，在送检化验单上盖上“HIV 抗体阴险”字样，并由一名高级卫生技术职称 人员复核签字后，按原送检程序反馈； 2、确认试验证实 HIV 抗体阳性，由具高级卫生技术职称的人员核签后出具报告，反馈 原送检单位，并按统一表式向同级卫生行政部门和省级 HIV 抗体确认中心报告。如确认对 象户口不属于本辖区内，确认报告应同时抄送感染者户口所在地的省级 HIV 抗体确认中心。 部队 HIV 抗体确认实验室确认的地方人员，也应及时向当地的卫生行政部门和省级 HIV 抗 体确认中心报告； 3、根据统一报表要求，每月 10 日向省级 HIV 抗体确认中心和同级卫生行政部门上报 检测情况。 （四）省级 HIV 抗体确认中心 1、严格核对送检标本和送检化验单，确认无误后，按 HIV 抗体检测程序进行确认试验。 确认试验结果，由具高级卫生技术职称人员核签后，向送检单位出具正式报告，按原送检 程序反馈； 2、省级 HIV 抗体确认中心确认的 HIV 抗体阳性者和本省其他确认实验室报告的 HIV 抗 体阳性者均按统一表式向省卫生行政部门和中国预防医学科学院报告； 3、省级 HIV 抗体确认中心难以确定的标本需送国家 HIV 抗体检测参比中心进一步确认； 4、收集、整理和分析辖区内 HIV 抗体检测资料，并于每月 15 日向省卫生行政部门和 中国预防医学科学院报告。 （五）国家 HIV 抗体检测参比中心 1、严格核对送检标本和送检化验单，确认无误后，按 HIV 抗体检测程序进行确认试验。 如属阴性结果，在送检单上盖上“HIV 抗体阴性”字样，由具高级卫生技术职称的人员核 签，按原送检程序反馈； 2、确认试验证实为 HIV 抗体阳性结果的，由具高级技术职称的人员核签后，向送检单 位出具报告，并按统一表式报中国预防医学科学院； 3、凡在非送检标本中发现 HIV 抗体阳性者，按统一表式报中国预防医学科学院，并通 知阳性者所在地的省级卫生防疫站； 4、每季次月 20 日将全国 HIV 抗体检测情况汇总分析后向卫生部疾病控制司和中国预 防医学科学院报告。 （六）确认试验结果的仲裁 如同一受检对象的标本在不同确认实验室得到不一致的确认结果时，由国家 HIV 抗体 检测参比中心或专家小组予以仲裁。 六、保密 （一）HIV 抗体检测实验室要有专人负责妥善保存各种实验记录、感染者档案，不得 擅自修改和销毁；严格遵守保密制度，未经省级卫生行政部门许可，不得向无关人员或单 位提供任何情况； （二）HIV 抗体初筛实验室（含初筛中心实验室）检测的阳性结果不是最终结果，应 及时作进一步确认，初筛实验室不能出具 HIV 抗体阳性的结果报告，更不能告知受检者本 人； （三）HIV 抗体确认实验室确认的阳性结果，以机密级向送检单位出具阳性报告；送 检单位接到阳性报告后，应报告当地卫生防疫和卫生行政部门，在对阳性者告知检测结果 时要先做好法律、医学、生活等方面的咨询。 （四）所有经确认的阳性标本，包括在实验室留存的标本，应送省级 HIV 抗体确认中 心或省级卫生行政部门指定的单位保存，不得擅自处理。标本保存时间至少 5 年。 七、HIV 抗体检测实验室质量管理 （一）所有实验室人员必须经过上岗前业务培训； （二）各级各类实验室应建立健全操作、消毒、复核、报告等制度，并严格执行； （三）国家 HIV 抗体检测参比中心对省级 HIV 抗体确认中心，省级 HIV 抗体确认中心 和 HIV 抗体初筛中心实验室对下一级实验室应定期进行业务培训、工作和技术考核，每年 不少于 1 次。实验室质量管理工作按照质量保证、质量控制和质量评价方案实施细则进行； （四）卫生部疾病控制司和省级卫生行政部门对违反本规范或质控不合格的 HIV 抗体 确认或初筛实验室，分别给予限期改进、停止工作整改和撤销实验室资格的处理。 本规范自公布之日起实施。 附件一：实验室安全措施 一、实验室要求 1、有专用实验室（或至少有专用的检测台），应划分清洁区和污染区（有条件的可设 半污染区），并有明显标记，有充足的操作空间； 2、实验室墙面、地面、台面材料应耐酸、耐碱、易清洁消毒、不渗漏液体；室内应有 防蚊、防蝇、防鼠等设备； 3、检验台上应装置紫外灯； 4、备有消毒药品、消毒器材和设备； 5、装有脚踏或感应流水装置，备有冲眼睛水，足够的一次性手套、口罩、隔离服和防 护眼镜； 6、清洁区（间）备有存放个人衣服、用品的设施；有条件的可设专用沐浴设备； 7、实验室应装置恒温设备，室温保持在 20-25。 二、安全操作 1、实验室工作人员要熟悉生物安全操作知识和消毒技术； 2、不得在实验室内喝饮料、吸烟、吃食吻和化妆打扮等；不得在实验室内会客； 3、实验室用品（包括工作服）不得用于其他用途；不可将私人和无关的物品带入实验 室； 4、工作时，要戴手套、穿工作衣和隔离衣，操作时手套破损应立即丢弃、洗手并带上 新手套； 5、不要用戴着手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等； 6、尽量避免使用尖锐物品和器具；宜用不易破碎材料制品；禁止用口吸任何物质； 7、工作结束后，要对工作台面消毒，如用消毒液清洗后要干燥 20 分钟以上；操作时 有标本、检测试剂外溅时应及时消毒；平时要保持环境整洁； 8、工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手； 9、遇有意外事故，应立即处理并分别以口头和书面报告上级部门。如工作人员皮肤被 刺伤，可以用流动水局部清洗或用刺激性较轻的含氯创伤消毒剂浸泡皮肤创口；样品或检 测试剂溅入眼内立即用生理盐水冲洗，溅入嘴内，先吐出残留的液体后，用水反复漱口； 10、遇有高危的意外事故发生，除进行局部处理外，同时应立即采取预防措施，包括 对其随访、 HIV 检测、休息并暂时离开原岗位 3 个月，按医嘱服用抗 HIV 药物进行预防。 三、废弃物品消毒处理 1、血液标本置于合适容器内，加盖盖紧后运送，切勿污染盛器外部。如果盛器被污染， 要用消毒液消毒。也可将血样置于有盖的塑料管内，外面套上塑料袋，封口，连同送检单 一并运送，有血液外溢时，立即用消毒液消毒； 2、各种试剂和化学品均应贴有标签，放置于合适的位置，试验台上不放置不必要的物 品。任何测试用的样品和试剂不宜置于桌面或架子的边沿，以防滑落打破，污染环境。一 旦污染，先在污染区外周围倒入消毒液，逐渐向中心消毒处理； 3、实验室所有垃圾，包括用过的一次性手套和工作衣，置于专门污物袋内，经焚烧或 有效消毒处理后丢弃，污染的非一次性工作衣应先消毒后再洗涤； 4、所有用过的实验用品，尤其是血样管和血液标本先在实验室内消毒，再移出清洗， 待消毒后再用； 5、所有尖锐物品应置于不宜刺破的容器内，消毒后用合适的方法处理； 6、常用的消毒剂和消毒方法与病毒性肝炎消毒法相同。 四、健康监护 1、实验室工作人员从事工作前必须进行 HIV 抗体和乙肝、丙肝等肝炎病毒标记物的检 测； 2、每半年进行一次 HIV 抗体的复检，并保留血样一年以上； 3、遇有意外事故，接触者应在接触当时、接触后 6 周、3 个月、6 个月及 12 个月备采 血检查一次； 4、患有皮肤疾患，尤其有皮肤溃烂、破损情况要及时诊治。 附件二：HIV 实验室操作技术要求 一、样本的采集 血液是最常见的样品，包括血清、血浆和全血，有时用唾液或尿液作测试样本。样品 采集应按试剂盒说明书要求采集。 采血时一定要注意安全，采血用一次性注射器，谨慎操作，防止发生刺伤皮肤和造成 外界污染。血样如即时用，可存于普通冰箱，如要长期保存，则位于-20及以下。如用滤 纸采样，则手指或耳垂局部消毒严格按常规进行，在刺破皮肤后，迅速把滤纸沾上，切勿 让血液滴落在其他物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装送检。如要置于低温， 将滤纸放进塑料袋，可以长时间保存。滤纸上的血量，一般直径为 6.3 毫米的圆点滤纸血 样相当于 10 微升全血或 5 微升的血清。 二、样本的运送 样品从一个实验室转送到另外一个实验室，必须是血清或血浆，除特殊需要外，一般 不能用全血，且须置于带有盖帽的试管内，防止样品流出，试管上应有明显的标记，标明 种类、姓名、地区、时间或原有的编号。将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易 于消毒处理，在所放试管周围上下均垫有软性物质，以免碰碎，容器外标有 HIV 检测专用 字样。如果路程较远或者气候炎热时，盛有样本的容器应置于 4以下运送。送样同时需 附送验单。如有特殊情况，对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但盛样品的 试管，必须包扎好，保证不会破碎、溢漏。如果为滤纸标本，置于塑料袋后再放入特快专 递投寄。 三、样本的处理 l 、对从其他实验室送来的样品，注意检查并注明其送检单与标本记录的符合、样品 管破损、溢漏情况。如有溢漏应立即将尚留存的血样移出，并对管壁和盛器消毒。要检查 并记录样品的质量有无严重溶血、细菌污染、血脂过多以及黄疸等情况。如经过某些临床 治疗可导致样品自发荧光的，不能供荧光方法测试用。 2、对实验室自己采集的本品，最好将血液先自然存放 1-2 小时后，再用 3000rpm 离心 15 分钟，吸出上清液备用，在日在几天内检测可放在 2-8冰箱中，如要贮存，则置于- 20的低温冰箱内。 四、样本的加量和稀释 严格按照每种试剂说明书规定加样量和稀释度操作，不能擅自更改，要做到准确地取 样、加样和稀降。加样器刻度必须标化，包括移液器、刻度吸管和机械吸液管，尤其移液 器一定要高质量的，要随时测定其