药学专业毕业论文 外文翻译课件_1

本本科科毕毕业业论论文文(设设计计)外外文文翻翻译译 学学 院院 专专 业业药学 姓姓 名名 学学 号号 指导老师指导老师 职职 称称 合作老师合作老师职职 称称 外文题目（原文）外文题目（原文） 5-FU 修饰的白蔹素衍生物的合成与生物活性修饰的白蔹素衍生物的合成与生物活性 评价评价 译文：译文： 5-FU 修饰的白蔹素衍生物的合成与生物活性评价修饰的白蔹素衍生物的合成与生物活性评价 Synthesis and Biological Evaluation of New 5-Fluorouracil-Substituted Ampelopsin Derivatives Wei-Ming Zhou 1,2, Rong-Rong He 1, Jian-Tao Ye 1, Na Zhang 1 and De-Yu Liu 1,* 摘 要：本文报道了两种新型氟尿嘧啶取代的白蔹素衍生物。两种新化合物的结 构经过 1H-NMR，13C-NMR，IR 和 MS 元素分析方法得到确证。用 MTT 法检 测这两个化合物对 K562 和 K562/ADR 癌细胞株的体外抗癌活性，结果显示这 两种新的化合物比参照药物如白蔹素和维拉帕米更加有效。 关键词：白蔹素，5-氟尿嘧啶，抗癌活性 1. 前言 白蔹素（3, 5, 7, 3, 4, 5六羟基-2, 3 -二氢黄酮醇，CAS 号：27200-12- 0，1）是一种从中国传统中药粤蛇葡萄或藤茶的茎叶或根部提取出来经过纯化 而得到的天然成分1。它也被称为白蔹素或双氢杨梅苷。在传统的中医学中， 白蔹素具有消炎解毒的功能。我们的前期研究结果证明了白蔹素具有强大的抗 肿瘤和抗氧化活性2-3。它可以通过抑制血管内皮生长因子（VEGF）和 bFGF 的表达4而使得癌细胞凋亡和肿瘤血管成长抑制。然而，白蔹素的化学结构并 不稳定。其水溶液或有机溶液，在光照下容易分解，形成有色光解物5。一些 研究通过修饰其化学结构来提高白蔹素的稳定性68。因此，可以通过另一种抗 癌物质与白蔹素的结合来改变了它的化学结构从而提高了稳定性。这种结合为 恶性肿瘤的有效对症化疗提供了新的可能。 5-氟尿嘧啶（5-Fu，CAS:51-21-8）（2）首次合成的时间是在 1957 年14， 是一种很好的癌症治疗药物，尤其是消化道肿瘤913。它是一种治疗恶性肿瘤 的常用药物，如乳腺癌，结肠癌和胃癌15。然而，由于严重的毒副作用，其临 床应用受到了一定限制16。目前为减少其毒副作用而采取的修饰方法包括与小 分子化合物结17，与其他化合物结合18，利用聚合物修饰19和结合聚合侧链20。 这些在 N-1 和/或者 N-3 上取代得到的衍生物已经在药效和药代动力学特性方面 得到了改善，其中提高了生物活性，选择性提高，代谢稳定性和吸收能力，降 低了毒性21。 图 1.反应物结构式 在此，我们通过加入氯乙酸连接两个药物分子得到了两个新的 5-氟尿嘧啶 衍生物(3)（如方法 1），选用四氢呋喃（THF）为溶剂，NN-二环己基碳二亚 胺（DCC）作为缩合剂22。所得衍生物结构经 1H-NMR，13C-NMR，IR 和 MS 得到确证。此外，这些新化合物的体外抗癌活性通过 MTT 法测定评估，选用 K562 癌细胞株，其逆转耐药性方面的测试选取 K562/ADR 细胞株。 2 结果与讨论 2.1 合成和后处理 合成 5-氟尿嘧啶-1-乙酸(4)：5-FU 和氢氧化钾混合液中，加入氯乙酸，在 70下回流 2 小时，冷却到室温，用浓盐酸调 PH 至 5.5。之后在 4冷却 2h， 过滤23得到的晶体为未反应的 5-FU。在这种情况下，反应产物以阴离子状态存 在于溶液中。用浓盐酸调 PH 至 2，在 4下冷却 6h，经过这种处理方法可保证 结晶完全，提高 5-氟尿嘧啶-1-乙酸的产量。 图 2.方法 1.化合物 5,6 的合成路线 为优化 5-FU 和白蔹素酯缩合的最佳反应条件我们考察了不同的催化剂， 溶剂，反应时间和原料量的比这四个条件。实验结果显示传统催化剂包括 4 -二 甲氨基吡啶（DMAP）和吡啶对产物 5 的产量没有影响。在考察的三种溶剂中， 丙酮和 THF 的溶解度比乙酸乙酯好。因丙酮在中国属于管制品，所以选用 THF 作溶剂。结果还显示产物 5 的产量在反应 6h 时最大，以后即使增加反应时间产 率也不再增加。我们分辨选用 EDCHCl，DCC 和 DIC24-26作为缩合剂。实验结 果表明 DCC 更加合适，因为它可以提高反应物溶解度从而提高反应速率。此外， 该产品使用了不同比例的反应物，当 1 和 3 以低于 1：1.2 摩尔比反应时，只有 5 生成，而，当物料比大于 1:1.2 时，得到 5 和 6 的混合物。而且，5 与 6 的在 体系中产量随着 3 的比例增大而增加。当物料比达到 1：4 时，产量达到最大值， 5 和 6 的产率分别为 62.3%和 28.6%。 2.2 化学性质 化合物 5 的结构经过光谱(MS,IR,1H-NMR,13C-NMR)和元素分析数据来确 证。质谱数据显示负离子模式下呈现离子峰 489.0(M-H)和 978.8(2M-H)，同时， 正离子模式下呈现 513.1(M+Na),1018.9(2M+K)和 1508.6(3M + K)。因此，质谱 数据跟计算出的预计分子式是一致的。红外光谱显示 NH 的两个特征吸收谱带 分别为 3,112cm-1 和 1,458cm-1，C=O 伸缩振动为 1,756 cm-1。 在氢谱中， 5.971ppm 和 11.950ppm 为嘧啶上 NH，但化合物 1 的 C3-OH 峰很快消失。在 13C-NMR 谱 162.28 ppm 处出现 C-O 信号。基于 2D-NMR 光谱分析 （gCOSY，gHMQC 和 gHMBC），证明反应发生在 C3-OH，因为水平线跟垂 直线分别被波峰在 1H-NMR 5.834 ppm 和13C-NMR 处 166.787ppm 切割，显示 黄酮 C3 上的 C-H 基团与 5-氟尿嘧啶-羧酸（4）上的酰基相连。(如图 2) 化合物 6 的结构经过光谱(IR, 1H-NMR, 13C-NMR)和元素分析数据的确定， 红外光谱显示两个 NH 特征吸收频率为 3,078 cm1和 1,472 cm1。化合物 6 上的 三个羟基（(C3-OH, C7-OH 和 C4-OH）的信号不能在 H 谱上显示出来。根据 之前对化合物 5 的描述可知，缩合反应发生在第一个 C3-OH 上。氢谱上 C7- OH 的信号将会消失但加热后又会出现。此外，化合物 6 上的 C3-OH 和 C5- OH 的氢信号可以在 9.769 ppm 处观察到，这与化合物 5 在 9.003 ppm 处出现不 一样。因此，可以确定缩合反应发生在 C3-OH 和 C4-OH 位置上。经过热重分 析（TGA）显示，化合物 5 是以三水合物的形式存在，而化合物 6 是以四水合 物的形式存在。化合物 5 和 6 中的结晶水可能是在储藏时从环境中引入的。 2.3 生物活性方面 这些新的衍生物的抗癌活性通过 MTT 法测定评估，选用 K562 和 K562/ADR 28白血病细胞株。将细胞用化合物 5 和 6 处理 24 小时，48 小时和 72 小时。IC50 的值参照表 1。在 48 小时，化合物 5 和 6 的抑制作用达到最大 值，且不会随反应时间的增加而增大。在 K562 细胞株中，化合物 5 和 6 的 IC50 没有显著差异，当同 5-FU 联合给药时，5-Fu 与之形成的混合物没有显示 出加和效应。然而，在 K562/ADR 细胞株中显示，这些新化合物中化合物 5 的 抗癌作用比 AMP 和混合物更有效，显示出对耐药癌细胞的潜在抗癌效果。此 外，对 ADR 的 IC50值在 K562 和 K562/ADR 细胞株中分别为 1.26 0.15 mol/L 和 50.52 4.03 mol/L，数据显示 K562/ADR 细胞株对 ADR 有明显的 抵抗作用。 我们进一步研究了化合物 5 和 6 在 K562/ADR 细胞株中的逆转耐药性。在 这个实验中，目前分别检测维拉帕米，化合物 5、6，AMP，5-FU，AMP-5-FU 在 ARD 中的 IC50值（见表 2）。选择 0.625 mol/L 和 1.25 mol/L 两种浓度是 因为当单独使用此浓度的所有化合物没有显示出显著的细胞毒素（抑制率 10%）。结果显示，在 K562/ADR 细胞株中化合物 5 和维拉帕米有显著的逆转 耐药性，且比 AMP 和 5-FU 的混合物更加有效。在浓度为 0.625 mol/L 时，化 合物 5 的逆转作用比相同浓度的维拉帕米强。在浓度为 1.25 mol/L 时，化合物 6 也有微弱的作用。在目前低浓度的新化合物中，逆转作用的贡献在于增加癌 细胞对药物不良反应的敏感性。尽管内在机制有待进一步查明，我们的研究表 明，5-FU 取代 AMP 的衍生物在癌症的药物耐药性中有巨大的使用潜力。 3实验部分 3.1 仪器 IR光谱（用KBr压片）Bruker EQUINOX 55 FTIR Spectrometer.1H-NMR和 13C-NMR以DMSO为溶剂，TMS为内标，Varian INOVA 500NB超导核磁共振谱 仪。质谱仪：Thermo LCQ DECA XP Spectrometer，以电喷雾电离（ESI）技术， 双聚焦质谱仪以快原子轰击FAB技术。 3.2 5-氟尿嘧啶-1-乙酸的合成 5-FU（6.5 g, 50 mmol），氢氧化钾（5.6 g, 100 mmol）溶于水（20 mL）混 合加入到氯乙酸（7.16 g, 75 mmol）溶于水（15 mL），使混合物在室温下搅拌 30min。滴加10%的氢氧化钾溶液使反应液的PH值为10。之后回流2小时，冷却， 用浓盐酸调PH至5.5，在4C下静置冷却2小时，有晶体析出，抽滤，滤液作进一 步的处理。溶液中滴加浓盐酸使PH值为2，在4C下静置冷却2小时。溶液中有 晶体析出。产品完全溶解在饱和碳酸氢钠溶液中进行重结晶，使用浓盐酸产生 白色针状沉淀。化合物3的光谱数据与27记录的相同。 3.3 化合物5与6的合成 将THF (10 mL)加入到化合物1（0.10 mmol），3（0.40 mmol）和 DCC（0.45 mmol）的混合物中，在室温下搅拌反应6小时，抽滤，蒸发滤液。 利用硅胶制作的柱层析使残留物分离（以二氯甲烷-丙酮为展开剂） ，同时用薄 层色谱法监测。收集和结合了包含两种产品的第二段和第三段色带。这两部分 收集品在室温下蒸干和重结晶，分别得到化合物5和6。测定熔点，进行1H- NMR，13C-NMR，IR和MS分析。 化合物5，黄色固体；收率63%；熔点282283 C；IR (KBr) max (cm1): 3,295 (OH), 3,112 (NH), 3,015 (C=C), 1,756 (C=O), 1,643 (C=O), 1,458 (NH); 1H- NMR (DMSO) (ppm): 4.424 (dd,J = 17.7Hz, 2H, CH2), 5.378 (d, J = 11.1 Hz,1H, 2-H), 5.856 (d, J = 11.1 Hz, 1H,3-H), 5.921 (d, J = 2.1 Hz, 1H, 8-H), 5.951 (d, J = 2.1 Hz, 1H, 6-H), 6.419 (s, 2H, 2-H， 6-H), 7.976(d, J = 7.1 Hz, 1H, 5-FU-6-H), 8.328 (s, 1H, 4-OH), 9.004 (s, 2H, 3-OH+ 5-OH), 11.023 (s, 1H,7-OH), 11.356 (s, 1H, 5- OH), 11.950 (s, 1H, 5-FU-3-NH); 13C-NMR (DMSO) (ppm): 48.01 (CH2),73.09 (CH), 80.10 (CH), 95.37 (CH), 96.39 (CH), 100.61 (C), 106.66 (2CH), 125.03 (C), 130.08 (CH),134.01 (C-OH), 140.32 (CF), 145.92 (2C-OH), 149.36 (C=O), 157.28 (C=O), 162.28(C-O), 163.22 (C-OH), 166.88 (C=O), 167.43 (C-OH), 190.12 (C=O); ESI-MS m/z (%): 513.1M+Na+; Anal. calcd. for C21H15FN2O113H2O (544.39): C, 46.33; H, 3.89; N, 5.15. Found: C, 46.17;H, 3.942; N, 5.246。 化合物6，黄色固体；收率28.6%；熔点291293C；IR (KBr) max (cm1): 3,218 (OH), 3,078 (NH), 1,774 (C=O), 1,638 (C=O), 1,472 (N-H); 1H-NMR (DMSO) (ppm): 4.4609 (dd, J = 17.72 Hz,2H, CH2), 4.8118 (s, 2H, CH2), 5.5219 (d, J = 4.88 Hz, 1H, CH), 5.8913 (d, J = 4.08 Hz, 1H, CH),5.9588 (s, 2H, CH), 6.5256 (s, 2H, 2CH), 7.9248 (d, J = 18.24 Hz, 2H, 2CH), 9.7618 (s, 2H, 2OH),11.3337 (s, 1H, OH), 11.9410 (s, 2H, NH); 13C-NMR (DMSO) (ppm): 48.03 (CH2), 48.08 (CH2),72.92 (CH), 79.43 (CH), 95.49 (CH), 96.56 (CH), 100.37 (C), 106.48 (2CH), 126.72 (C), 129.91 (CH),130.21 (CH), 133.38 (C-O), 138.30 (CF), 140.59 (CF), 145.59 (2C-OH), 149.50 (C=O), 149.97 (C=O),157.23 (C=O), 157.48 (C=O), 162.03 (C-O), 163.20 (C- OH), 165.97 (C=O), 166.89 (C=O), 167.64(C-OH), 189.61 (C=O); FAB-MS m/z (%