ABO和RH血型鉴定操作规程4.doc

ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH（D）血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D）血型鉴定三、所需材料和设备：1、材料：抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞，生理盐水，滴管，患者标本。2、设备：离心机，显微镜。四、操作规程1、试管法：（1） 取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及IgM抗D单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5红细胞生理盐水悬液1滴，轻摇混匀。（2） 另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5试剂红细胞悬液1滴，轻摇混匀。（3） 立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。（4） 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，有助于A、B亚型，类B或嵌合体血型的发现。2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5红细胞悬液1滴，混匀。(2) 标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴，再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。(3) 轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀，连续15分钟以肉眼观察有无凝集（溶血）反应。有需要时也可用低倍显微镜观察结果。(4) Rh（D）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。3、结果判断：单克隆血清受检者红细胞受检者血型受检者血浆试剂红细胞抗A 抗B 抗DA细胞 B细胞 O细胞 /A 型 Rh（D）/ /B型 Rh（D）/ /O型Rh（D）/ /AB型 Rh（D）/ 4、凝集强度判断： 4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明； 3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰； 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞； 1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞； +- 镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞； 混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；- 阴性 镜下未见凝集，红细胞均匀分布。5、报告实验结果，并保存受检标本：一般保存一周以上6、注意事项6.1、 单克隆抗体试剂好试剂细胞（除谱细胞外）每天使用前必须与相对应的红细胞好血清作阳性、阴性对照，以检测其活性。6.2、观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或顺式AB的发现。6.3、人红细胞ABO血型检验结果是根据红细胞的抗原和血清/血浆中的抗体反应结果所决定，因此正反定型的结果应该一致。正反定型起到一个相互验证和质控的作用。只有正反定型结果相符才能正确判断ABO血型。 6.4、 反定型对ABO亚型的发现特别有帮助。原因是亚型患者红细胞上A或B抗原很弱，通过正反定型易于发现二者结果不一致，从而引起警惕。6.5、如果正反定型