人体组织解剖学生理实验课件

一、坐骨神经腓肠肌标本制备,目的要求： 1、学习生理学实验基本的组织分离技术 2、学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 3、学习蛙类坐骨神经-腓肠肌标本制备基本操作技术,实验原理： 蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳动物有近似之处，若将其离体组织器官放在任氏液中，其兴奋性可以在室温下，于一段时间内保持不变，其实验条件较易控制，来源也较丰富。因此，在实验中常用坐骨神经-腓肠肌标本观察神经、肌肉的兴奋性、刺激以及反应的规律以及肌肉收缩的特点等。,实验动物及器材： 牛蛙、蛙板、玻璃板、粗剪刀、手术剪、探针、玻璃分针、蛙钉、镊子、线、滴管、培养皿、Zn-Cu弓、任氏液,实验步骤： 1、双毁髓：枕骨大孔处，向前毁脑，向后毁脊髓。 2、去皮和制作下肢标本：于腋窝下处横断脊柱，并将头及前肢连同所有内脏一起剪去,由断面将皮肤及肌肉分离，去皮。 3、分离两后肢：用粗剪刀沿脊柱和耻骨联合的中线，将标本纵剖为两半。,4、分离坐骨神经：用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经并向下分离，挑 开背侧梨状肌，再循坐骨神经沟纵向暴露并分离坐骨神经，勿牵拉神 经。 5、游离腓肠肌：分离腓肠肌的跟腱，结扎跟腱，于结扎以下剪断， 剪去小腿骨和其上肌肉，再剪去股部肌肉，留长约12cm的股骨。 6、检验标本兴奋性：用蘸任氏液Zn-Cu弓的两端轻触及坐骨神经， 若腓肠肌收缩，则此标本的兴奋性良好，说明标本制备成功。,注意事项： 1、不可将剥皮的标本与内脏等弃物放一起。 2、剥皮的后肢不可用自来水冲洗。 3、凡标本只能用玻璃分针。 4、制备标本过程中随时用任氏液润湿标本。,二、血红蛋白含量测定及血型的鉴定 （一）血红蛋白含量的测定,目的要求： 掌握测定血红蛋白含量的基本方法比色法,实验原理： 测定血红蛋白的方法很多，种沙里（sahli）比色法是其中一种。血红蛋白本身的色泽，常随所结合的氧量多少而改变，不便于比色。沙里比色法是用少许稀盐酸加入一定量血液中，酸不仅使红细胞膜破坏，而且使原来位于红细胞内亚铁血红素转变成高铁血红素，后者呈较稳定的棕色。将其用蒸馏水稀释后与血红蛋白测定计的标准色进行目测比色，即得每100ml血液所含的血红蛋白数或百分率。,实验器材： 血红蛋白计、采血针、蒸馏水、0.1M HCL、一次性20ul定量毛细取血管、滴管、玻璃棒、75%酒精棉球、乙醚,实验方法与步骤： 1、了解血红蛋白计的构造： a、标准比色架 b、血红蛋白稀释管,2、用蒸馏水将血红蛋白（Hb）稀释管洗净，干燥备用。 3、用滴管加0.1M Hcl于血红蛋白稀释管内，到刻度“2%”或“10%”处。 4、采血：常规消毒指尖，用一次性刺血针刺破无名指尖。拭去第一滴血，待第二滴血流出一大滴时，用一次性毛细取血管吸血至刻度20ul（0.02ml即20 mm3）处。,5、血液与盐酸完全反应：使Fe2+ Fe3+(置10分钟)。 6、透光比色 7、加蒸馏水至颜色同标准色柱,注意事项： 1、吹血液入稀释管及洗净吸管时，应插入液面内，吹时不宜用力过猛，以免产生气泡。 2、蒸馏水逐滴加，以免过量稀释，玻璃取出比色。 3、一定要准确掌握进入稀释管内血液量（20ul）。不可将剥皮的标本与内脏等弃物放一起。,实验结果及分析： 附： 我国成年人Hb正常值：男：120160g/L或1216g/100ml血液 女：110150 g/L或1115 g/100ml血液 新生儿含量可达20g/100ml 以后减少，23个月最低，达9.5g. 思考题： 1、测定Hb含量实际意义？Hb具有什么功能？,（二）血红蛋白含量的测定,目的要求： 1、学习鉴定血型的方法 2、观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理,实验原理： 血型是指红细胞的血型，是根据存在于红细胞膜外表面特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上特异性糖蛋白）来确定的，这种抗原或凝集原由遗传基因决定。血清中抗体或称凝集素，可与红细胞膜上不同的相应抗原结合，产生凝集反应，最后发溶血。由于这种现象，临床上在输血前必须进行鉴定血型，以确保安全输血。人类红细胞上已发现20多种血型系统。其中最常用最重要的是ABO血型系统，其次为Rh系统。本次实验介绍ABO血型鉴定。,实验器材： 采血针、双凹玻片、记号管、75%酒精棉球、牙签、A型和B型标准血清、生理盐水、显微镜,实验步骤：玻片法 1、先取双凹玻片，标好姓名、A、B，然后滴加抗A、抗B血清各一滴，取牙签一支，用其两头蘸血分别在A、B血清中搅拌，置015分钟后观察凝血现象。,结 果： 抗A凝集抗、B不凝集 A型血 因红细胞上有A 抗原 抗B凝集、抗A不凝集 B型血 因红细胞上有B 抗原 抗A、抗B凝集 AB型血 因红细胞上有A、B 抗原 抗A、抗B不凝集 O型血 因红细胞上无抗原,注意事项： 1、注意消毒，防止穿刺部位皮肤感染。 2、肉眼看不清楚凝集现象时，应在低倍显微镜下观察。 3、红细胞悬液和血清应新鲜，因污染可产生假凝集现象。,思考题： 1、已知某人为A型（或B型）血，在无标准血清情况下，可否对其他人进行ABO血型鉴定？如何进行？ 2、如何区别血液中凝集与凝固，其机理是否一样？ 参考： 许多学者调查表明：中国人血型分别O型30.77% 、 A型 27.07%、 B型32.48%、AB型9.67%,三 坐骨神经腓肠肌标本制作、骨骼肌单收缩及收缩总和,目的要求： 1、观察不同刺激频率的阈上刺激引起肌肉收缩形式的 改变 2、观察骨骼肌收缩总和现象,实验原理： 蛙的坐骨神经肌肉标本单收缩时程为0.11S，其中潜伏期、缩短期共占0.05S，舒张期占0.06S，若给标本相继两个最适刺激，使两次刺激间隔小于该肌肉收缩总时程时，则会出现一连续的收缩，称复合收缩（或收缩总和）。若两个Sti的时间间隔短于肌肉收缩总程，而长于肌肉收缩潜伏期和缩短期时程，使后一个刺激落于前一个Sti引起肌肉收缩的舒张期内，则出现一次收缩尚未完全舒张又引起一次收缩，,若两次Sti间隔短于肌肉收缩缩短期，使后一次Sti落在前一次刺引起收缩的缩短期内，则出现一次收缩正在进行接着又产生一次收缩，收缩的幅度高于单收缩幅度。根据这个原理 ，若给予标本一连串的最适Sti，则因Sti频率不同会得到一连串单Sti，不完全强直收缩或完全强直收缩的复合收缩。,实验动物及器材： 蛙的在体腓肠标本，常用手术器械、BL- 420E+生物机能实验采集系统，张力换能器、双针形露丝Sti电极、支架、培养皿、滴管、任氏液、丝线,实验步骤： 1、双毁髓：枕骨大孔处，向前毁脑，向后毁脊髓。 2、腓肠肌的分离： 将蛙腹位平放蛙板上，固定四肢，剪开一侧下肢皮肤暴露腓肠肌，用玻钩分离，在跟健下穿一丝线并结扎，在远端剪断跟腱，用丝线将腓肠肌提取，将腓肠肌与胫骨分离，用任氏液经常湿润标本，以保持肌肉兴奋性。在股骨部，用蛙钉固定，标本制备完备 。,3、仪器及标本连接： 将蛙板放于换能器下方，垂直提起腓肠肌上结扎线，连于换能器敏感染上，调节换能器高度，Sti电极固定于铁架台上与腓肠肌接触，应保持Sti电极与肌肉接触良好。,4、Sti频度与反应关系实验现象： 1）将腓肠肌连在换能器上，其将机械能转化为电信号，该信号从BL生理机能实验系统输入计算机，该系统的输出通过Sti电极对腓肠肌进行Sti，实验开始，从BLNEW Century软件菜单上选择刺激频度与反应关系实验项。,2）以波宽为1ms，从最小Sti强度开始逐渐增加刺激强度对肌肉进行Sti ,找到刚刚引起肌肉最大收缩Sti强度，即为该标本的最适强度，整个实验过程中均固定在此Sti强度上。 3）用单Sti作用于肌肉，可记录肌肉单收缩曲线。,4）用双Sti作用于肌肉，使两次Sti间隔为0.060.08S，记录复合收缩曲线 5）将刺激方式置于“连续”其余参数固定不变，用频度为1、6、10、15、20、30HZ的连续刺激作用于肌肉，可记录单收缩，不完全强直收缩和完全强直收缩曲线,注意事项： 1、经常给标本滴加任氏液，保持标本良好兴奋性。 2、连续Sti时，每次Sti持续时间要保持一致，不得超过34S，每次刺激后休息30S，以免标本疲劳。 3、可根据实验需要调整Sti频度。,【可能出现的问题与解释】 1 、随着刺激频率增加，肌肉复合收缩的幅度不是逐渐升高而是下降。这是由于标本保护不当，肌肉受损伤或疲劳，或刺激频率过高造成的。 、单收缩曲线忽高忽低 标本在任氏液浸泡时间不够,兴奋性不稳定;肌肉上液体堆积过多,造成短路使刺激强度不稳。,实验结果及分析： 思考题： 1、引起组织兴奋的刺激必须具备哪些条件？ 2、何谓阈下刺激、阈刺激、阈上刺激和最适刺激?在阈刺激和最适刺激之间为什么肌肉的收缩随刺激强度增加而增加? 实验过程中标本的阈值是否会改变?为什么?,实验二 离体肠段运动的描记,实验目的： 通过观察各种因素对离体小肠平滑肌运动的影响，加深对平滑肌生理特性的了解。 实验原理： 本实验将小肠平滑肌置于模拟内环境中，观察当模拟内环境因素发生变化时，离体小肠平滑肌运动的变化。,材料与设备： 兔 、 台氏液、1:10 000肾上腺素、1 molL-1 HCl溶液、1 molL-1NaOH。麦氏浴皿、多功能生理信息采集系统、手术器械、注射器、棉线、万能支架、螺旋夹、双凹夹、温度计、细塑料管、缝针、手术刀,方法与步骤： 1.实验的准备 A麦氏浴 皿准备：向麦氏浴皿内加入台氏液至浴皿高度的 2/3处。外部容器为水浴锅加自来水，恒温工作点定在38(图)。 B标本制备 动物致死；取肠段，清洗；肠段的固定；实验项目研究,2.实验项目 A观察、记录38 台氏液中的肠段节律性收缩 曲线。 B观察、记录25台氏液中的肠段节律性收缩曲线。 C加1:10 000肾上腺素12滴于中央标本槽中，观察肠段收缩曲线的改变。 D加1:10 000乙酰胆碱12滴于中央标本槽中，观察肠段收缩曲线的改变。 E向中央标本槽内加入1 molL-1HCl溶液12滴，观察肠段收缩曲线的改变。,结果与分析： 1.剪贴实验记录曲线，并做好标记、注释。 2.分析各种因素对小肠运动的影响，并简要说明机制。,实验七 家兔呼吸运动的调节 一、实验目的 1、 学习和掌握哺乳类的麻醉和解剖方法。 2、学习测定家兔呼吸运动的方法。 3、观察并分析影响呼吸运动的各种因素,二、原理 高等动物的呼吸运动受到神经系统、体液成分变化的调节，以适应代谢和环境的变化。 肺牵张反射也参与呼吸运动的调节。,三、试剂与器材 微机、生物信号处理系统、张力换能器、刺激输出线、保护电极、家兔、兔体手术台、圆头手术镊、手术剪、手术刀、止血钳、弯剪、气管插管、橡皮管（长1 m以上，短1020 cm）、玻璃勾针、20 mL注射器、50 mL注射器、针头、20%氨基甲酸乙酯、棉花、棉线、5乳酸。,实验的基本程序 麻醉气管切开术颈部神经分离术连接实验装置实验观察。,四、实验内容 讲解观看多媒体示范细节提醒,（一）麻醉 兔耳缘静脉注射：20%氨基甲酸乙酯 （1）注射液剂量 5 ml/kg体重，实验用家兔2 kg，注射约10 ml即可； 抽吸麻醉液时先取下针头，多吸一部分； （2）进针注射姿势调整 选择耳缘静脉 从远心端开始；左右耳 针头扎进1/3至1/2，并用拇指固定住 注射时推动液体慢一点 呼吸急促时可稍停 急救。 剩余麻醉液需回收；,图1 家兔耳缘静脉注射,（二）固定与剪毛,图2 活结示意图（固定四肢）,固定： 固定用细绳回收 固定头部要点： 门牙拉直以使颈部挺起，便于手术 剪毛： 剪刀贴住皮肤剪毛； 提起毛再剪，易剪破皮肤,图3 气管插管术示意图,图4 气管插管术示意图-示气管切口,图5 气管插管术示意图-示固定插管,（四）分离神经 由里向外翻出气管一侧组织颈动脉鞘： 粗 迷走神经 中 交感神经 细 减压神经,图6 神经分离示意图,（五）连接实验装置 （六）实验观察 窒息或增加无效腔 刺激迷走神经 注射乳酸 切断迷走神经 最后做,五、注意事项 1、分离神经时不能用尖的或锋利的金属机械； 2、实验观察中，在刺激开始、撤除时，应做好标记。 3、剪辑和打印结果时，尽量把波形压缩，显示变化趋势即可，不需要每个波的细节。 4、刺激神经之前，应先检查是否有刺激电流输出。 5、神经需刺激时才拉出，不要一直由保护电极勾住，防止神经干燥。,六、结果和目标 1、观察、记录正常呼吸的曲线，了解其特性和规律。 2、观察、记录各种影响因素所造成的呼吸曲线的变化。,七、思考题 1、分析增加呼吸无效腔，呼吸运动改变的原因。 2、双侧切断迷走神经以后，呼吸运动的变化说明什么问题？ 3、分析注射乳酸后呼吸运动变化的原因。,实验四 红细胞的溶解溶血作用,【目的要求】 1、学习引起红细胞溶解的各种实验方法。 2、观察红细胞的溶血现象。,【基本原理】 红细胞在高渗NaCl溶液中，会失去水分发生皱缩；在低渗NaCl溶液中，会因过多水分进入红细胞而膨胀，甚至破裂，使血红蛋白释出，称为红细胞溶解。红细胞对低渗溶液具有不同的抵抗力，即红细胞具有不同的脆性，对低渗溶液抵抗力小，表示红细胞的脆性大，对低渗溶液抵抗力大，则表示红细胞的脆性小。 各种有机溶剂、酸、碱等都会使红细胞的膜发生溶解，称为红细胞的化学性溶血。,【动物与器材】 鸡、离心机、试管（16支）、试管架、吸耳球、2ml移液管、一次性注射器（2ml或5ml）、滴管、0.75%NaCl、0.1M HCl、0.1MNaOH、乙醚、1%肝素、蒸馏水、171mMNaCl。,【方法与步骤】 方法1：渗透性溶血红细胞渗透脆性的测定 (1) 取试管12支，从112分别标记后，排列在试管架上,按 教材P65表31配制各种浓度的NaCl溶液 . (2) 5%红细胞混悬液制备:取鸡血4ml，加入盛有1%肝素 0.4ml的离心管中，充分混合，放入离心机中，按3000r/min、离心5min。取出后，弃去上清液，加入生理盐水，混合后再离心，然后再弃去上清液。同法重复一次，即得洗涤之红细胞。用生理盐水配成5%红细胞混悬液。 每支试管加入5%红细胞混悬液一滴，轻轻摇匀后于室温下静置2h后观察各试管之溶血情况。,(3）结果判断 从高浓度管开始观察： 不溶血：上层无色、透明，下层红色浑浊； 开始溶血：上层红色、透明，下层红色、浑浊而不透 明； 完全溶血：全部液体变红且透明。,方法2：化学性溶血 取试管4支，各盛5%鸡红细胞混悬液2ml，分别加入下列溶液，并观察红细胞在各试管中的溶解现象： 1） 0.75%NaCl 1ml 2） 乙醚 0.2ml 3） 0.1M HCl 1ml 4) 0.1MNaOH 1ml 半小时后，观察并记录各试管溶液血情况，注意颜色与透明度。,【注意事项】 1、试管编号排列顺序切勿弄错、颠倒。 2、小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，只加一滴。 3、在进行渗透性溶血配液要准确、无误。 4、加入血液后，轻轻摇匀溶液，切勿剧烈震荡。 5、抗凝剂最好为肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透性。 【思考题】 1、产生渗性溶血和化学性溶血的机制有什么不同？,实验五 人体动脉血压的测定及其影响因素 【实验目的】 1、学习并掌握间接法测定动脉血压的原理和方法，测定人体肱动脉的收缩压与舒张压。 2、了解影响动脉血压的因素。,【实验原理】 通常血液在血管内流动时并没有声音，但外加压力使血管变窄形成血液湍