课件：综合实训革兰阴性需氧和兼性需氧杆菌.ppt

革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌,,2019,-,1,革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌,2019,-,2,革兰阴性杆菌,O-F试验,F,o/,非发酵菌,氧化酶试验,+,弧菌科,肠杆菌科,革兰阴性菌初步分群,2019,-,3,乳糖发酵试验,A肠杆菌科共同特性,1、相似的形态染色 中等大小，G 杆菌，无芽胞，多数有动力,2、简单的培养条件,3、活泼的生化反应,初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌,肠道致病菌,肠道非致病菌,不发酵乳糖,发酵乳糖,2019,-,4,A肠杆菌科的鉴别,1、形态观察（革兰染色） G 杆菌 2、菌落观察 （1）埃希菌在肠道 选择性培养基上发酵乳糖产酸，在SS和MAC平板上为红色或粉红色菌落 (2)志贺菌属：将本菌接种在SS和MAC平板上经35孵育1824h。由于志贺菌不分解乳糖，宋内志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖，故其在SS平板和MAC平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。 (3)沙门菌属：将本菌接种在SS、MAC平板上经35孵育1824h。由于本菌不分解乳糖并产碱，故在SS和MAC平板上形成无色、半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生H2S的菌落可在SS平板上形成中心带黑褐色的小菌落。 3、生化反应 4、血清学实验,2019,-,5,革兰阴性杆菌，有周身鞭毛。 发酵多种糖类，多数能发酵乳糖，产酸产气 IMViC试验为+ + - -，MIU:+-, KIA:AA+-不产H2S 大肠杆菌血清型以O：K：H,A1埃希菌,2019,-,6,能分解葡萄糖，产酸不产气， 不分解乳糖,除宋内志贺菌 IMViC试验为-+ - -，MIU:-, KIA:KA-,不产H2S,是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，,通称痢疾杆菌dysentery bacteria,无鞭毛，有菌毛,生化反应,形态,A2志贺菌,低于其他肠道杆菌，对酸敏感,对理化因素的抵抗力,血清学：根据生化反应特征和O抗原分为4群,2019,-,7,肝脾-肿大 胆囊-肠道-排菌(2周）肾脏-尿-排菌（3周),A3伤寒、副伤寒的致病过程,伤寒沙门菌和甲型副伤寒杆菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌,肠粘膜上皮细胞,肠系膜淋巴结,固有层淋巴结,进入血液,再次进入血液,第一次菌血症 发热,不适,全身疼痛,第二次菌血症（1周） 高热、外周白细胞下降、肝脾肿大、 表情冷漠、玫瑰疹、相对缓脉,肝脏 脾脏 胆囊 肾脏 骨髓,并发症肠穿孔肠出血,典型病例病程为3-4W,胸导管,2019,-,8,微生物学检查法,细菌学诊断 标本： 胃肠炎取粪便呕吐物或可疑食物 肠热症在病程不同阶段采取不同标本； 发病1周取血；发病1-3周取骨髓液 发病2 周取粪便；发病3周取尿,2019,-,9,微生物学检查,细菌学诊断,标本,SS平板,生化反应,血清学鉴定,2019,-,10,沙门菌生化反应,KIA:K/A-+,H2S阳性,赖氨酸脱羧酶阳性,IMVC:-+-+,MIU:+-,2019,-,11,沙门菌血清学鉴定肥达氏反应,一、原理 用已知的标准诊断菌液【伤寒杆菌：菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原；副伤寒甲、乙、丙鞭毛（H）抗原共5种】与受检血清作试管凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价，以协助伤寒、副伤寒疾病的诊断。 二、器材及试剂 标准诊断菌液（5种抗原：10ml/瓶）、生理盐水（N.S）、待检血清（兔血清）、试管、试管架、加样枪或移液管（5mL、2mL、0.5mL每组3支）、一次性塑料滴管等。,1,2019,-,12,三、实验方法 1. 冰箱中取出诊断菌液平衡至室温。 2. 将待检血清作1：20、1：40、1：1280 （每管0.5ml，每个稀释倍数5管）稀释，对照管 加N.S 0.5ml,然后逐管加入混匀后诊断菌液1d， 充分振荡混匀，标记（时间、班级、组号），3537C放置16-20h观察结果。 （配液管：0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20） 3. 5/6个同学一组，第二天中午1:30观察结果。,2019,-,13,1:1280,伤寒O抗原,0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20,2.5ml,2.5ml,2.5mlN.S,余2.5ml,平分为5管，每管0.5ml：得5管1:20稀释倍数的血清,平分为5管，每管0.5ml：得5管1:40稀释倍数的血清,2.5mlN.S,余2.5ml,2019,-,14,1:1280,伤寒H抗原,副甲H抗原,副乙H抗原,副丙H抗原,1:1280,伤寒O抗原,0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20,2019,-,15,2019,-,16,四、凝集结果判断（上清液、沉淀） “”：强，完全凝集，液体澄清，轻摇大片凝 集块。 “”：大部分凝集，液体轻度浑浊，凝集块 小。 “”：中强，部分凝集，液体半澄清，凝集块 颗粒状。 “”：弱，少量凝集，液体浑浊。 “”：不凝集，液体浑浊，和对照相同。,2019,-,17,+,2019,-,18,+ +,2019,-,19,五、效价判断 能出现明显凝集（+）的血清最高稀释度。 例： 测定某病人“O”凝集效价结果如下： 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 4+ 3+ 3+ 2+ 2+ + -,2019,-,20,六、临床意义 1.正常值：正常人血清中可能有低效价的抗体存在，其值高低存在地区差异，一般伤寒沙门菌“O”1:80,“H”1:160,副伤寒沙门菌“H”1:80，有临床意义；或者进行疾病早期、中后期两次血清效价比较，后者增高4倍/4倍以上有诊断价值。 2. “O”抗体出现早、消失快、主要为IgM类；“H”抗体出现迟、可持续阳性数年，主要为IgG类，O、H凝集效价都超过正常值，意义较大。 1）、“O”高“H”不高：感染早期，伤寒沙门菌“O”抗 原有交叉反应，建议一周后复查。 2）、“H”高“O”不高：疾病晚期、预防接种、非特异 性回忆反应。,2019,-,21,3.伤寒、副伤寒甲、乙有部分共同的O抗原，如O抗体效价增高，只能推断为伤寒类疾病，不能区别伤寒或副伤寒。 4.阴性反应：未感染，感染轻，应用有效抗菌药物，接受皮质激素治疗者，患者过于衰弱等。 七、注意事项 1.应在光亮处先观察管底凝集状态，后轻摇判 定结果。 2.使用前摇匀菌液，菌液有摇不散的凝集块时不能使用。,2019,-,22,B弧菌科,弧菌科(Vibrionaceae)是一群氧化酶阳性，具有端极鞭毛，菌体短小、直或微弯的革兰阴性杆菌。分为弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属等四个菌属。 弧菌属特征：耐碱不耐酸，营养要求不高。生长迅速, 在pH8.89.0的碱性蛋白胨水/碱性琼脂平板上生长良好。在TCBS平板上为黄色菌落; 在含亚碲酸钾的平板上形成中心灰褐色的菌落。 多数菌株生长都需要盐；大多数氧化酶都为阳性；具有一端单一鞭毛。,2019,-,23,TCBS平板上菌落,含亚碲酸钾的4号平板,2019,-,24,弧菌科细菌及相关细菌的特征,2019,-,25,C非发酵菌,不发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等。 假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性。代表菌株为铜绿假单胞菌。,2019,-,26,OF试验：O 氧化酶：+ 精氨酸水解：+ 葡萄糖酸氧化：+ 氮气：+,假单胞菌鉴定程序,2019,-,27,铜绿假单胞菌,1、形态观察：G- 杆菌，多形性，有鞭毛、菌毛、荚膜，无芽孢,产荧光素和绿脓素,2、培养特性：专性需氧，4不生长42 生长，在血平板上经3537，1824h培养可表现为：菌落大而扁平、湿润、边缘不齐,有金属光泽,有生姜样芳香气味,菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。,2019,-,28,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or computer, or print the presentation and make it into a