aFGF对糖尿病难愈性溃疡的影响.ppt

aFGF 对糖尿病难愈性溃疡的影响,研究背景,成纤维细胞生长因子是一个蛋白质家族，现发现至少已有23个成员。 酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)因其等电点为酸性而被称为酸性成纤维细胞生长因子。,aFGF具有广泛的生物学作用，本次实验主要研究的是其促进创伤愈合的作用。 aFGF能诱导伤口附近的细胞如血管平滑肌、成纤维细胞、肌纤维母细胞的分裂、增殖，加速胶原纤维的合成，促进皮肤和黏膜创面愈合。,研究方法,1、糖尿病模型复制 2、创面模型制作 3、溃疡形成后给药 4、检测IL-2的含量 5、抗炎作用：对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的 影响,（1）、3 月龄雄性普通级SD大鼠, 体重200 250 g, 实验前12 h 禁食, 定量饮水。 （2）、实验当日称体重, 尾静脉采血, 用血糖仪测定基础血糖。,（3）、按60m g/k g 体重腹腔注射1%链脲佐菌素。1h后恢复正常饮食。 （4）、1 周后当动物血糖浓度大于16.7mmo l/L 时, 可认为糖尿病模型复制成功。,2. 创面模型制作,（1）、每只大鼠以20%乌拉坦 (0.6 ml/100g) 腹腔推注麻醉后, 背部剃毛, 常规消毒。 （2）、在无菌条件下用特制打孔器在鼠背中部脊柱两侧各打一圆孔, 深至皮下, 直径1. 8cm , 创面面积为2. 54 cm2 。,（3）、止血后以无菌纱布包扎, 单笼喂养, 定量饮水。 （4）、约四天后溃疡形成。,3、溃疡形成后给药,（1）、取大鼠4只, 按上述方法制成溃疡后处死，取溃疡组织进行病理切片。 （2）、再取大鼠64只, 分成四组：空白对照组、阳性对照组、高剂量实验组、低剂量实验组。,（3）、将已经形成溃疡的大鼠放于固定架上,乙醚麻醉。 （4）、创面用0. 9 %生理盐水棉球蘸拭后,高剂量组以AFGF涂敷于纱布上;低剂量组以AFGF涂敷于纱布上；空白对照组以生理盐水纱布一层敷于其上；阳性对照组以b FGF（碱性成纤维生长因子）涂敷于纱布上。,（4）、再以消毒纱布包扎固定,每日换药1 次。换药前用15000 呋喃西林清洁创面。 （5）、创伤后7、14 每组处死3 只动物, 取创面组织进行病理学检查。,（6）、创伤后第30天处死余下的动物，取创面组织进行病理学检查。 （7）、从第四天开始每隔一天在换药时用透明膜描记法记录其创面面积。,4、检测IL-2的含量,取创伤后第30天被处死的大鼠的血清用ELISA法检测IL-2的含量。,5、对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响,（1）、取雄性小鼠40只，分为空白对照组、阳性对照组、高剂量实验组、低剂量实验组。 （2）、用二甲苯30l 涂抹小鼠右耳廓前后两面致炎，左耳廓作为对照。,（3）、致炎后将药物抹在小鼠致炎的耳廓，30分钟后再涂抹一次，共涂2次。 （4）、致炎后1小时处死小鼠，用直径打孔器分别在鼠耳同一部位取下耳片，称重。,（5）、以左右耳片重量差计算肿胀度，并计算肿胀抑制率。,预期实验结果,、实验组创伤愈合的时间大于阳性对照组的愈合时间。 、在同一时间点上取材后的病理切片实验组中的新生毛细血管的数量及成纤维细胞的数量大于阳性对照组的数量。,、实验组IL-2的含