课件：微生物及无菌知识.ppt

,微生物及无菌知识,2019,-,4,目的,学习微生物的相关知识 了解药品微生物污染的来源和预防,2019,-,5,内容,第一部分：微生物基础知识 第二部分：消毒与灭菌 第三部分：药品生产中的微生物控制 第四部分：几个问题？,2019,-,6,第一部分：微生物基础知识,2019,-,7,什么是 微生物,微生物（microorganism, microbe）是一些肉眼看不见的微小生物的总称。包括属于原核类的细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体和蓝细菌（过去称蓝藻或蓝绿藻），属于真核类的真菌（酵母菌和霉菌）、原生动物和显微藻类，以及属于非细胞类的病毒、类病毒和朊病毒等。 微生物千姿百态，有些是腐败性的，即引起食品气味和组织结构发生不良变化。当然有些微生物是有益的，它们可用来生产如奶酪，面包，泡菜，啤酒和葡萄酒。微生物非常小，必须通过显微镜放大约1000 倍才能看到。比如中等大小的细菌，1000个叠加在一起只有句号那么大。,2019,-,8,微生物的特点,1.种类多、分布广 现在已经知道的微生物有十万种左右； 微生物在土壤中的数量最多，据统计，一克土壤中含有几千万到几百亿的微生物。 2.个体小、胃口大 每毫克大肠杆菌细胞的表面积比每毫克人细胞的表面积大30万被左右； 积极活动的大肠杆菌，每小时能消耗它体重2000倍的乳糖； 3.繁殖速、转化快 微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代，如细菌一般每2030分钟既可分裂一次； 生产味精的谷氨酸短杆菌，从摇瓶培养扩大到50吨发酵罐的过程中，在52小时内细胞数目增加了32亿倍； 乳酸菌每小时可产生为其体重100010000倍的乳酸； 一种产朊假丝酵母合成蛋白质的能力是大豆的100倍，比食用公牛强10000倍；,2019,-,9,微生物的特点,4.适应强、变异易 一九四三年分离到的青霉素产生菌，在每毫升发酵液中只能分泌20单位左右的青霉素，通过60多年来的不断育种，加上其他条件的改进，目前每毫升已经超过10万单位。,2019,-,10,微生物的类群和形态结构,微生物种类繁多，人们研究得最多、也较深入的主要有八大类 1.真菌：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌（湿疹） 2.细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌 3.放线菌：链霉菌 4.支原体：肺炎支原体 5.衣原体：沙眼 6.立克次体：斑疹伤寒 7.螺旋体：梅毒 8.病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，流感病毒。,2019,-,11,1.真菌：,真菌在微生物世界中可以称得上是个“巨人家族“，真菌的个头较大，其中的许多成员对我们来说都是很熟悉的。例如，在潮湿的天气里，常常发现粮食、衣服、皮鞋上长了霉，我们做酱、酱油、豆腐乳用的曲霉和毛霉等霉菌；发面、酿酒用的酵母菌等都是真菌，就连人们爱吃的蘑菇、木耳等，也都是真菌大家族的成员。真菌是微生物中的一大类群，属于真核微生物，与人类关系非常密切。真菌是抗生素（如青霉素、头孢霉素）、有机酸等多种发酵工业的基础，在自然界中则扮演着各种复杂有机物分解者的角色。然而有些真菌是病原菌，引起人类和动植物病害，有些真菌产生毒素，使人、畜中毒，严重者引起癌症。如黄曲霉产生的黄曲霉毒素毒害肝脏，易引发肝癌。,2019,-,12,(1)霉菌：,霉菌是丝状真菌的俗称，意即“发霉的真菌”，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。,2019,-,13,一、 霉菌的形态、大小和结构,霉菌的菌丝：构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。 菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般为3-10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。,2019,-,14,二、霉菌的繁殖,霉菌有着极强的繁殖能力，而且繁殖方式也是多种多样的。虽然霉菌菌丝体上任一片段在适宜条件下都能发展成新个体，但在自然界中，霉菌主要依靠产生形形色色的无性或有性孢子进行繁殖。孢子有点像植物的种子，不过数量特别多，特别小。 霉菌的无性孢子直接由生殖菌丝的分化而形成，常见的有节孢子、厚垣孢子、孢囊孢子和分生孢子。,2019,-,15,节孢子：菌丝生长到一定阶段时出现横隔膜，然后从隔膜处断裂而形成的细胞称为节孢子。如白地霉产生的节孢子,2019,-,16,厚垣孢子：某些霉菌种类在菌丝中间或顶端发生局部的细胞质浓缩和细胞壁加厚，最后形成一些厚壁的休眠孢子，称为厚垣孢子。如毛霉属中的总状毛霉,2019,-,17,分生孢子：是在生殖菌丝顶端或已分化的分生孢子梗上形成的孢子，分生孢子有单生、成链或成簇等排列方式，是子囊菌和半知菌亚门的霉菌产生的一类无性孢子。,分生孢子,镰刀霉的镰刀形大分生孢子,青霉的帚状分生孢子梗和分生孢子,曲霉的分生孢子头彩图,2019,-,18,霉菌的孢子,霉菌的孢子具有小、轻、干、多，以及形态色泽各异、休眠期长和抗逆性强等特点，每个个体所产生的孢子数，经常是成千上万的，有时竟达几百亿、几千亿甚至更多。这些特点有助于霉菌在自然界中随处散播和繁殖。对人类的实践来说，孢子的这些特点有利于接种、扩大培养、菌种选育、保藏和鉴定等工作，对人类的不利之处则是易于造成污染、霉变和易于传播动植物的霉菌病害。,丝状真菌,2019,-,19,三、霉菌的菌落,由于霉菌的菌丝较粗而长，因而霉菌的菌落较大，有的霉菌的菌丝蔓延，没有局限性，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种则有一定的局限性，直径1-2厘米或更小。菌落质地一般比放线菌疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取；菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致。,2019,-,20,（2）酵母菌,提起酵母菌这个名称，也许有人不太熟悉，但实际上人们几乎天天都在享受着酵母菌的好处。因为我们每天吃的面包和馒头就是有酵母菌的参与制成的；我们喝的啤酒，也离不开酵母菌的贡献，酵母菌是人类实践中应用比较早的一类微生物，我国古代劳动人民就利用酵母菌酿酒；酵母菌的细胞里含有丰富的蛋白质和维生素，所以也可以做成高级营养品添加到食品中，或用作饲养动物的高级饲料。 酵母菌在自然界中分布很广，尤其喜欢在偏酸性且含糖较多的环境中生长，例如，在水果、蔬菜、花蜜的表面和在果园土壤中最为常见。,2019,-,21,一、酵母菌的形态、大小和结构,酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1-5微米5-30微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。 酵母菌具有典型的真核细胞结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有微体。,2019,-,22,二、酵母菌的菌落,大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。,2019,-,23,酵母菌的繁殖：出芽生殖,红酵母,2019,-,24,2.细菌,细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二等分裂方式繁殖的原核微生物，分布广泛。细菌按形状可分为：球菌（0.52m）、杆菌（长15m，宽0.31m）和螺旋菌（大小与杆菌相似）。 按革兰氏染色法染色的不同，分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。革兰氏阳性菌的细胞壁表面含较多的磷壁酸，会产生外毒素，如金黄色葡萄球菌；革兰氏阴性菌的细胞壁表面多含脂蛋白和脂多糖，会产生内毒素（即热原），如大肠杆菌。 细菌一般有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核，有的还有荚膜、鞭毛、菌毛和芽胞等特殊结构。 细菌一般为无性繁殖，以二分法繁殖，几十分钟或12小时分裂一次。,2019,-,25,葡萄球菌,链球菌,2019,-,26,杆菌(大肠杆菌),大肠杆菌(带鞭毛),2019,-,27,杆菌(碳疽),沙门氏菌,2019,-,28,淡水中的螺旋菌 spirochetes .,弧状菌,2019,-,29,细菌的繁殖：二分裂繁殖,2019,-,30,3.放线菌,放线菌有生长发育良好的菌丝体，呈分枝状，菌丝宽为0.21.2m，革兰氏阳性。 其内部构造与细菌相似，无完整的细胞核。菌落常呈幅射状，因此称放线菌。 繁殖方式为无性孢子繁殖。最适pH6.77.5，温度2530。 放线菌可用于生产抗生素、维生素和酶类，少数可引起人畜放线菌病。 根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。链霉菌属是放线菌中种类最多、分布最广、形态特征最典型的类群，其形态如下图所示。,2019,-,31,链霉菌的一般形态和构造 （模式图）,2019,-,32,二、放线菌的繁殖,放线菌没有有性繁殖，主要通过形成无性孢子方式进行无性繁殖，成熟的分生孢子或孢囊孢子散落在适宜环境里发芽形成新的菌丝体；另一种方式是菌丝体的无限伸长和分枝，在液体振荡培养（或工业发酵）中，放线菌每一个脱落的菌丝片段，在适宜条件下都能长成新的菌丝体，也是一种无性繁殖方式。,2019,-,33,放线菌的菌落特征 A：诺尔斯氏链霉菌； B：皮疽诺卡氏菌； C：酒红指孢囊菌； D：游动放线菌； E：小单胞菌； F：皱双孢马杜拉放线菌,产抗菌素的放线菌的菌落特征 A：卡特利链霉菌； B：弗氏链霉菌； C：吸水链霉菌金泪亚种； D：卡那霉素链霉菌；E：除虫链霉菌； F：生磺酸链霉菌,2019,-,34,4.支原体,支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。 支原体结构也比较简单，多数成球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性 繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有断裂、分枝、出芽等方式，盖因缺乏细胞壁造成分裂时二个子细胞大小不均所致。同时，支原体分裂和其DNA复制不同步，可形成多核长丝体。,2019,-,35,5.衣原体,衣原体（chlamydia）是一类能通过细菌滤器，严格细胞内寄生，有独特发育周期的原核细胞性微生物。 过去认为是病毒，先归属细菌范畴。衣原体广泛寄生于人类、鸟类及哺乳动物。能引起人类疾病的有沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热肺炎衣原体。 其共同特征： 1、体积大于病毒，约250500nm，在光学显微镜下可以查见。 2、含有DNA和RNA。 3、具有细胞壁，但无肽聚糖，只含微量的细胞壁，由二硫键连接的多肽作为支架。 4、对多种抗生素敏感。 5、具有一些酶类但不够完善，这些酶缺乏产生代谢能量的作用，要由主细胞提供。能在鸡胚卵黄囊及多种细胞中生长繁殖。 6、有独特发育周期，仅在活细胞内以二分裂方式繁殖,2019,-,36,2019,-,37,6.立克次氏体,立克次氏体（Rickettsia）是一类专性寄生于真核细胞内的G-原核生物.是介于细菌与病毒之间,而接近于细菌的一类原核生物。一般呈球状或杆状,是专性细胞内寄生物，主要寄生于节肢动物，有的会通过蚤、虱、蜱、螨传入人体、如斑疹伤寒、战壕热。,2019,-,38,立克次氏体的特点,细胞大小为0.30.6m0.82.0m，有细胞形态，一般不能通过细菌滤器，可 通过瓷滤器，在光学显微镜下清晰可见。 细胞呈球状、杆状或丝状，有的多形性。 有细胞壁，无鞭毛，呈革兰氏阴性反应（除恙虫病立克次体外），效果不明显。 除少数外，均在真核细胞内营专性寄生，宿主一般为虱、蚤等节肢动物，并可传至人或其他脊椎动物。 以二等分裂方式进行繁殖，但繁殖速度较细菌慢，一般912h繁殖一代。 有不完整的产能代谢途径，大多只能利用谷氨酸和谷氨酰胺产能而不能利用葡萄糖或有机酸产能； 大多数不能用人工培养基培养，须用鸡胚、敏感动物及动物组织细胞来培养立克次氏体； 对热、光照、干燥及化学药剂抵抗力差，6030min即可杀死，100很快死亡，对一般消毒剂、磺胺及四环素、氯霉素、红霉素、青霉素等抗生素敏感。 同时有DNA和RNA两种核酸，但没有核仁及核膜，属于适应了寄生生活的-变形菌。基因组很小，如普氏立克次氏体的基因组为1.1Mb。,2019,-,39,7.螺旋体,螺旋体(Spirochaeta)细长、柔软、弯曲呈螺旋状的运动活泼的单细胞原核生物。全长3500微米，具有细菌细胞的所有内部结构。在生物学上的位置介于细菌与原虫之间，螺旋体广泛分布在自然界和动物体内。 引起人患回归热、梅毒、钩端螺旋体病的致病菌 ，均属于螺旋体。,2019,-,40,8.病毒,病毒是一类体积十分微小，结构简单，只含一种核酸（DNA或RNA），没有产生能量的酶系统，只能在活细胞内以复制方式增殖的非细胞型微生物。 病毒在自然界分布非常广泛，在所有其它生物中都有病毒寄居。病毒是最常见的致病微生物，人类传染病中大约75%是由病毒引起的。 病毒体主要由核酸和蛋白质组成。病毒体积微小，最大直径300nm（如牛痘病毒），最小直径20nm（如口蹄疫病毒），绝大多数在150nm以下，能通过细菌滤器，用普通光学显微镜看不见，必须用电子显微镜放大数千至数万倍才能看见。 形态多呈球形，少数为杆状或砖形。噬菌体（细菌病毒）有呈蝌蚪状的。,2019,-,41,SARS病毒是一类新发现的冠状病毒,禽流感病毒,爱滋病毒,2019,-,42,微生物五大共性,体积小，面积大； 吸收多，转化快（2000倍体重/h）； 生长旺，繁殖快（20min分裂一次）； 易变异，适应强； 分布广，种类多（10万种以上）。,2019,-,43,微生物的益处,啤酒，葡萄酒的生产 面包酵母的生产 奶酪的生产 醋的生产 酸奶的生产 维生素的生产 类固醇的生产 抗菌素、干扰素的生产,分解废物，循环利用 帮助肠道中的食物消化,2019,-,44,微生物的害处,常见污染制剂的微生物 1.葡萄球菌：可引起局部感染 2.大肠杆菌：胆道及尿道感染 3.绿脓杆菌：化脓性感染、中耳炎、肺炎 4.枯草杆菌：结膜炎 5.酵母菌：使糖分解，药液产生有机酸 6.霉菌：使制剂霉坏、酸败变质,2019,-,45,第二部分 消毒与灭菌,2019,-,46,1概念,灭菌（Sterilization）是指用物理或化学方法杀灭物体上所有微生物，包括致病菌和非致病菌，繁殖体和牙胞。 无菌(Asepsis)是指不含活菌。 无菌操作是防止微生物进入机体或其他物品的操作技术，无菌操作所用的一切用具和辅助材料、药物、污染，赋型剂均须先灭菌，操作时必须在无菌操作室（或超净工作台）内进行。 消毒（Disinfection）指杀死物体上病原微生物的方法。但消毒不一定杀死全部微生物。 防腐（Antisepsis）或称抑菌，指阻止或抑制微生物生长繁殖的方法，用以防止物品的腐败，但不一定杀灭微生物。,2019,-,47,2.消毒剂的正确使用方法,1、清洁与消毒要同时进行，顺序必须是清洁之后再消毒。因为经过清洁后污浊消失，进行消毒效果更明显。 2、清洁剂与消毒剂混淆使用的话，两者的效果就会减弱。因此清洁与消毒之间，要进行充分的洗濯，清洗净后再消毒，特别是带油污的，如果油污去除不净的话，油污就会做为一层保护膜，保护细菌而影响消毒的效果。,2019,-,48,3常用灭菌法,1）干热灭菌法 常见的有火焰烧灼、干烤和红外线灭菌等。 火焰烧灼：通常用于实验室无菌操作中金属或其它耐火材料制成的器具的灭菌。 干烤和红外线：利用干热空气或热辐射进行灭菌。一般135145需35h，160170需2h以上，170180需1h以上，180200需0.51h。除热原则需25030min，或20045min，1802h。 空气传热慢，穿透力不强，故干热灭菌时间长。干热灭菌时烤箱内装入物品应留有空隙，以利空气流动，否则使箱内温度不均，部分物品灭菌不彻底。,2019,-,49,2）湿热灭菌法 通过热蒸汽或沸水使蛋白质变性而杀灭微生物的方法。湿热穿透力强，灭菌效果较干热好。 煮沸或流通蒸汽灭菌：常压下沸水和蒸汽的温度是100，一般处理3060min可杀死细菌繁殖体，但不能完全杀灭芽孢。此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品。 低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先用6080加热（或煮沸）1h，然后置2025保存24h（或常温过夜），使其中残存的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌，如此反复三次。本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品，但很费时。 高压蒸汽灭菌（热压灭菌法）：超过一个大气压时，水的沸点高于100，反之亦然。高压蒸汽灭菌就是通过加压提高蒸汽温度，灭菌效果最好。它简便、经济、可靠、无毒，是最可靠、应用最广泛的灭菌法。此法适用于耐高温和潮湿的物品。常用条件为： 115.5 30min 121.5 20min 126.5 15min,2019,-,50,湿热灭菌法注意事项,a. 必须完全排出灭菌器内的空气。否则会影响灭菌器内温度达到规定的要求。蒸汽灭菌中使用饱和蒸汽是至关重要的。饱和蒸汽的穿透性比干热空气及过热蒸汽的穿透性要强得多。 b. 注意被灭菌物品的温度。灭菌器内温度与被灭菌物品的温度一般是一致的，但在蒸汽输入过快时，后者可能低于前者，所以升温时要有一定的预热时间。另外，降温过快易引起玻璃炸裂。因此，对于一种灭菌产品，应制定一固定的灭菌曲线（象冻干曲线一样）。 c. 定期检查灭菌器内温度的准确性。湿热灭菌工艺验证时，应进行热分布试验、热穿透试验和生物指示剂验证试验。以确定灭菌柜空载及不同装载时腔室中的热分布状况及可能存在的冷点；在空载条件下，确认121时腔室各点的温度差值应1；使用插入实际物品或模拟物品内的温度探头，确认灭菌柜在不同装载时，最冷点物品的标准灭菌时间（F0）达到设定的标准；用生物指示剂进一步确认在不同装载时冷点处的灭菌物品达到无菌保证水平。本法常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子,2019,-,51,3）化学灭菌法 利用化学试剂形成的气体来杀灭微生物的方法。 常用的灭菌剂为环氧乙烷（又称氧化乙烯）。环氧乙烷是广谱杀菌剂，能杀灭细菌、芽孢和多种病毒，还能杀死昆虫及虫卵。 但由于环氧乙烷易燃易爆且有毒（有致变异性），用于药品方面极有限，多用于医疗器械、塑料制品等灭菌。（不能用于橡胶和乳胶手套，能将其溶解。）,2019,-,52,4）滤过除菌法 利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理，除去对热不稳定的药品溶液或液体物质中的细菌的方法。过滤法一般只能除菌，不能除去支原体和病毒。 过滤除菌的效果与滤膜的性能、孔径的大小、密度、滤膜的厚度等因素有关。 滤过除菌法要求最终过滤的滤膜孔径为0.22m。由于各厂家生产的相同规格的滤膜质量并不一致，为了保证除菌效果，在使用前后应检查滤器的完好性（如压力维持试验或起泡点试验）。一个过滤器的使用时间应根据品种验证后确定，一般不应超过8小时。,2019,-,53,5）辐射灭菌法 辐射有两种类型： 一种是电磁波辐射，如紫外线、红外线、微波； 一种是电离辐射，如可引起被照射物电离的X射线、射线。,2019,-,54,紫外线：紫外光波长在136390nm之间，其中260nm左右能破坏核酸，杀菌作用最强。另外，空气中的氧受紫外线照射后，可微量转变为臭氧共同起杀菌作用。紫外线消毒的效果与光源的功率、光源与被照射物的距离、照射时间、温度和湿度等因素有关。一般每10m2装30W灯管1支，工作前开3060min。 紫外灯的输出功率随使用时间增加而降低。国产紫外灯的平均寿命（点到70%额定功率的时间）一般为2000h，超过平均寿命时，就达不到预期效果，必须更换。 紫外线的穿透力很弱，不能穿透一般包装材料，如玻璃、塑料薄膜、纸等。玻璃能强烈吸收小于350nm的紫外线，石英玻璃能吸收小于200nm的紫外线。因此，它主要用于空气和物体表面消毒，特制的紫外灯装置也可用于水的消毒。 紫外线对眼、皮肤有损坏，照射过程中产生的臭氧对眼、鼻腔有刺激，臭氧过多时使人头晕、胸闷、血压下降。,2019,-,55,红外线：通过加热碳化硅板产生的辐射热能，由空气传导加热灭菌。如红外线烤箱，温度可达180左右。热效应特点是由表及里。 微波：微波灭菌主要是因其热效应。微波加热升温快，温度高且均匀，杀菌作用强。热效应特点是由里及表。不同性质的物品吸收微波的能力不同，其热效应和消毒效果也不同。 微波有一定穿透力，但不强。微波对人体有害，要注意防护。 60Co灭菌：放射性同位素60Co（或137Cs）衰变时可放射出射线，射线的能量高、穿透力强，可使细胞内各种活性物质发生化学变化，从而使细菌损伤或死亡。 经60Co辐射灭菌的物品温度升高很少，一般仅约5，故又称“冷灭菌”。 60Co辐射存在两个方面的安全问题：一是辐射的直接作用。射线对人体细胞同样有害；二是经过辐射的食品、药品的安全性。1984年美国农业部食品安全实验室用辐射处理的鸡肉喂饲小鼠，发现患睾丸肿瘤增加，包括加重癌病损害。因此60Co辐射用于食品和药品都应经过安全试验，进行科学的、全面的评价，高剂量的辐射药品更应慎重。,2019,-,56,第三部分：药品生产中的微生物控制,2019,-,57,药品生产中的微生物控制,为什么要对药品生产进行微生物控制？ 有些微生物可以致病。药品生产中，为保证药品的安全有效，需要对微生物进行控制。空气中的微生物多数附着在灰尘上，或以芽孢形式悬浮于空气中。所以也要对尘粒进行控制。人是洁净室最大的污染源，在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。 对微生物和尘粒进行更加严格的控制对于针剂生产洁净室非常重要。,2019,-,58,污染:,污染就是指当某物与不洁净的或腐坏物接触或混合在一起使该物变的不纯净或不适用时，即受污染。 简单的说当一个产品中存在不需要的物质时，他即受到了污染,2019,-,59,污染的形式和载体:,污染的形式: 尘埃粒子 微生物 污染的载体: 空气、水、器具、人。,2019,-,60,微生物的污染途径,自身污染：由于患者和员工自身携带微生 物而污染。 接触污染：由于和非无菌的用具、器械或 人的接触而污染。 空气污染：由于空气中所含微生物的沉降、 附着或被吸入而污染。 其他污染：由于其他因素（如昆虫）而污染。,2019,-,61,控制微生物的污染途径,有效地阻止室外的污染侵入室内。 迅速有效地排除室内已发生的污染。 控制污染源，减少污染发生量。,2019,-,62,药品中微生物污染的特殊性,是能繁殖的活细胞生物。 数量少而分布不均匀。 多数处于受损伤状态。 生存环境的多样性及复杂性。,2019,-,63,主要的微生物污染源,空气 水 设备 原辅料 人员,2019,-,64,主要的微生物污染源-空气,洁净度测定包括： 悬浮粒子 微生物 - 浮游菌 - 沉降菌 - 表面微生物,2019,-,65,主要的微生物污染源-水,新版GMP相关条款： 第九十九条 纯化水、注射用水的制备、贮存和分配应当能够防止微生物的滋生。纯化水可采用循环，注射用水可采用70以上保温循环。 第一百零一条 应当按照操作规程对纯化水、注射用水管道进行清洗消毒，并有相关记录。发现制药用水微生物污染达到警戒限度、纠偏限度时应当按照操作规程处理。 相关控制指标： 1.饮用水 菌落总数(CFU/ml)不得过100 2.纯化水 微生物限度 细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。 3.注射用水 细菌内毒素 每1ml中含内毒素量应小于0.25EU。 微生物限度 细菌、霉菌和酵母菌总数每100ml不得过10个。,2019,-,66,主要的微生物污染源- 设备,设备和器具与药品直接接触 设备和器具的清洗 清洁程序必须经过验证 按清洗周期清洗 清洗和存放设备、器具处应与生产区域洁净等级相同,2019,-,67,主要的微生物污染源- 原辅料,包括厡辅料、内包装材料。 - 厡辅料微生物的限度标准？ - 内包装材料微生物的限度标准？ 符合药典或行业标准 厡辅料、内包装材料的贮存： - 包装严密，不得破损，污染。 - 清洁贮存。,2019,-,68,主要的微生物污染源- 人员,1、人在代谢过程中会释放和分泌污染物。 2、人体表面、衣服能沾染、携带污染物。 3、人在洁净室内的各种动作也会产生微粒和微生物。,2019,-,69,主要的微生物污染源- 人员,人体内外微生物的分布 1、皮肤：表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八叠球菌属细菌、类白喉棒杆菌、金黄色葡萄球菌等 2、口腔：唾液链球菌、溶血链球菌、乳酸杆菌、流感杆菌、类白喉棒杆菌等 3、上呼吸道：包括喉、鼻道和鼻咽。甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等。 4、下呼吸道：包括气管、支气管和肺 。健康人的下呼吸道是无菌的。 5、胃肠道：大肠埃希氏菌、产气杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌、粪链球菌、梭杆菌属、螺旋体属、乳杆菌属、梭菌属、拟杆菌属中的一些种 6、泌尿生殖道：常见的有嗜酸乳杆菌、类白喉棒杆菌、葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌,2019,-,70,主要的微生物污染源- 人员,如何阻断人体污染源 1.进入洁净室（区）的人员不得化妆和佩带饰物。 2.净化工作服必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。 3.手的卫生 4.平时的卫生习惯,2019,-,71,手的卫生,每只手可携带40万个细菌；刚洗过的手，每平方厘米也可检验出3200个细菌 。 110万个细菌/1cm2 皮肤表面!,2019,-,72,洗手的重要性:,用流水（如自来水）洗手，能