《液相串联质谱》PPT课件.ppt

三重四极杆液质联用仪基础知识,1. 液相部分的结构特点,LC-20A,液相色谱,泵,脱气机,进样器,色谱 柱,洗脱液,检测器,废液,信号,数据 系统,液相色谱连接管路,材料 不锈钢、Teflon、PEEK (聚醚醚酮) 尺寸,液相色谱连接管路,不锈钢 (可用于所有连接) 能承受几百MPa 压力 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在pH小于2时) PEEK (可用于所有连接) 能承受高达 25MPa压力 可在整个pH范围(pH 1-14)内使用 不适用于高溶解性溶剂如氯仿、丙酮、THF等 Teflon (用于柱后阻尼管、反应管和排液管) 化学惰性大 能承受 0.5MPa 压力,LC-20AD的概要,柱塞往复泵,单向阀工作原理,单向阀结构,色谱柱,较小的流量可获得较高的离子化效率，所以在条件允许的情况下最好采用内径较小的色谱柱 不同色谱柱保证良好分离的流量 0.3 mm i.d. 10 L/min 1.0 mm i.d. 30-60 L/min 2.0 mm i.d. 200-500 L/min 4.6 mm i.d. 700 L/min,色谱柱,2. 质谱基础知识,质谱是什么？ 特殊的天平：称量离子的质量。 质,质谱能做什么？ 定性：化合物的分子量和结构 定量：混合物中目标组分的含量 领域： 化学、生物学、医学、药学、 环境、物理、材料、能源等,分子离子 分子离子是样品分子失去或得到一个电子而形成的。分子离子代表完整的样品分子，是其所有碎片离子的终极前体。由分子离子的m/z值可得到该化合物的相对分子量。分子离子如为阳离子则以M表示，“+”代表该离子具有一个正电荷，“”代表游离基，故此离子为游离基阳离子。如为阴离子则以M表示，为游离基阴离子。M及M均含未成对电子，又称奇电子（odd electron）离子。分子离子提供了最有价值的质谱信息，包括相对分子量、元素组成与碎片离子相关的结构信息。 准分子离子 取决于化合物的性质和质谱离子化方法及条件，可生成质子化或去质子的分子，即M+H+、M-H及加合物离子，如M+Na+、M+Cl等，这些均为偶电子（even electron）离子。 目前国际上有将两种离子统称分子离子的趋势。,经常观测到的加合离子,Diketometribuzin C7H12N4O2 Exact Mass: 184.0960 Nominal Mass: 184,质谱常用概念同位素,同位素 具有相同质子数，不同中子数（或不同质量数）同一元素的不同核素互为同位素。 单同位素峰 单同位素质量：最轻的稳定同位素的质量（也有说自然界中丰度最大的同位素的质量）。 单同位素峰：质谱图上单同位素质量所对应的峰。 同位素峰 质谱图中的一个峰，其元素组成中含有一个或多个非最高天然丰度的同位素。,化学上：氯的原子量是35.5。 质谱上：对于含有一个氯原子的离子，在A和A+2处各出一个峰，且相对强度为3:1。这是因为Cl35:Cl373:1，质谱测定的是微观离子，不是宏观上的平均的概念。,元素 分类情况： A: H, F, P, I A+1: C, N A+2: O, S,Si, Cl, Br,质谱常用概念同位素,质谱常用概念同位素,例1：79Br 100%, 81Br 98%100% M M+2 M+4 M+6 Br, n=1: 1 1 Br2, n=2: 1 2 1 Br3, n=3: 1 3 3 1 例2：35Cl 100%, 37Cl 32.5% M M+2 M+4 M+6 Cl, n=1: 1 0.325 Cl2, n=2: 1 0.650 0.106 Cl3, n=3: 1 0.975 0.317 0.034,质谱常用概念同位素,单同位素质量、名义（整数）质量、平均质量、准确质量,质谱图(Mass Spectrum) 质谱仪产生的信息是离子的质量及其强度，这些数据可以列成表。最常用的是以质荷比(m/z)为横座标，强度为纵座标制成的质谱图。,三重四极杆质谱议,最常用的MS/MS实验中，第一级质量分析器用于选择一个前体离子（precursor ion），或称为母离子（parent ion）, 然后，用适当的活化方法，常用碰撞诱导解离（collision-induced dissociation, CID）使这一离子裂解生成产物离子（product ions）或称为子离子（daughter ions）及中性碎片： mp+ mf + + mn 式中，mp+ 为前体离子，mf + 为产物离子，mn为中性碎片。,SIM：Selected Ion Monitoring 选择性离子监测模式 Scan：扫描模式 MRM: Multiple Reaction Monitoring 多反应监测 子离子扫描 ( Product Ion Scan) 母离子扫描 (Precursor Ion Scan) 中性丢失扫描 (Neutral Loss Scan),3.如何提高检测的灵敏度,如何提高检测灵敏度（1）质谱,影响离子化效果的因素,除喷雾针的位置外，其他参数均可以通过软件反控，因此可以使用批处理的方法进行优化。,如何提高检测灵敏度（2）液相,色谱柱 样品浓度 流动相（种类和比例）与流速 液相分离情况 溶剂、样品纯度、系统的清洁度 pH（甲酸正离子模式，乙酸铵负离子模式）,4.维护,吸滤头,分玻璃材质、不锈钢材质 去除流动相中不溶性