课件：反定型的必要性.ppt

ABO反定型的必要性,ABO血型鉴定的原理,ABO血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无A抗原或和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正（血清试验）反（细胞试验）定型准确鉴定ABO血型。,正定型、反定型定义,正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或和B抗原， 反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。,操作过程中的注意点,（1）严格查对，标记明确 （2）吸管等不得混用 （3）先加血清再加细胞 （4）要求正反定型结果相符 （5）不要使悬液干涸（玻片法），肉眼观察必要时再用显微镜观察。 （6）反定型不宜用玻片法 （7）试管法离心后应先观察上清液有无溶血，然后再摇动管底红细胞进行观察。,ABO血型反定型用红细胞试剂盒说明,主要组成成分: A1型、B型、O型红细胞 有效期： 两个月 样本要求：被检者血清或血浆 检验方法： 一、试管法 （1）取被检者血清（或血浆）各一滴（50ul）分别加入三支标记好的小试管中 （2）分别各加一滴（50ul)A1、B、O试剂红细胞 （3）摇动试管离心，速度1000rpm1分钟或3400rpm15秒即可 （4）先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮起来 （5）观察凝集状况，并立即记录结果,ABO血型反定型检验方法,二、微量板法 （1）在U型板三个孔内分别加入2530ul的被检者血清或血浆 （2）在每孔内分别加入与血清等量的A1、B、O试剂红细胞 （3）混匀 （4）离心，转速2000rpm20秒（离心后反应板应产生清晰的细胞扣及透明的上清液） （5）检测溶血情况 （6）用振荡仪振动微量板，振动能使阳性反应出现凝集的细胞扣，而若是阴性反应很快细胞扣消除 （7）记录结果，亦可用酶标读数仪,ABO正反定型结果,ABO反定型实验的局限性,本实验必须与正定型一起进行，正反定型不一致需做进一步研究。单独反定型结果不能作为判断血型的依据。,结果判读注意事项,1.如果在反定型试验中，受检者的血清或血浆与O型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。如果自身对照为阳性，表明是自身冷凝激素导致。 如果自身对照为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在ABO系统以外的其他系统的抗体干扰定型。,结果判读注意事项,2.本品如出现红细胞颜色变成暗紫色或红细胞发生凝集，出现菌落或溶血严重，则不能使用，尽量避免因制品污染、变质失效而造成的检定错误。,结果判断,4+（+）：红细胞凝集成一大块，血清清晰透明，无游离细胞。 3+（+）：红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。 2+（+）：红细胞凝块分散成许多小块，见到游离细胞。 1+（+）：肉眼可见颗粒状细小凝块，游离细胞较多，上清液呈红色。 （+）：肉眼很难看清，要用显微镜观察。镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞。 MF：混合外观，即镜下可见极少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 （）：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。,ABO血型鉴定的意义,1.保证安全输血和输血治疗效果 2.辅助诊断新生儿溶血病 3.器官移植中的应用 4.亲子鉴定及其他（如法医学）,红细胞ABO血型正反定型不合的原因分析,ABO正反定型不合的技术性问题 1-1 假阴性 （1）弄错样品，试管或玻片 （2）实验过程中未加血清或抗体试剂 （3）结果判读方法不规范，将溶血现象忽略 （4）血清或抗体试剂与血球比例不合适 （5）没有在室温或低于室温下放置一段时间 （6）试剂失效，离心不够 （7）使用的玻璃器皿不清洁 （8）解释记录不正确，书写错误等,ABO正反定型不合的技术性问题,1-2 假阳性 （1）弄错样品，试管或玻片 （2）抗体试剂，红细胞试剂或生理盐水被污染 （3）过度离心 （4）使用的玻璃器皿不清洁 （5）解释或记录不正确,ABO血型正反定型不合的技术性问题比较好解决，只要认真的重复试验，仔细核对血样和试剂，正确读取结果以及防止书写错误既可避免。,ABO正反定型不合的理论性问题,2-1 正定型不合 （1）弱A或弱B亚型 （2）白血病使A抗原或B抗原减弱 （3）何杰金病也有类似白血病抑制抗原的作用 （4）类B抗原 （5）类孟买型 （6）抗-A，抗-B血清中存在某种低频率抗原的抗体 （7）某些疾病如胃癌、胰腺癌患者红细胞的血清或血浆中含有高浓度A或B血型物质，中和了抗体试剂，出现了假阴性反应 （8）某些疾病血清中高活性、高浓度冷自身凝集素严重致敏自身红细胞，以致在稀释液存在的条件下，自觉地发生凝集，而不是抗体试剂的特异性作用。 （9）某些G杆菌感染可吸附于红细胞上与抗-B凝集素反应而凝集,2019/4/19,17,可编辑,补充知识点,类B抗原的存在，如O型或A型患者因肠道细菌感染，通常由革兰杆菌引起，其代谢产物可使红细胞上获得类B抗原，与抗B试剂出现凝集反应的假象。 多凝集红细胞具有以下特点： 能被人和家兔的许多血清凝集。 能与大多数成年人血清凝集，不管有无相应的同种抗体。 不被脐带血清凝集。 通常不与自身血清凝集。 如有条件可用外源凝集素加以鉴别。 冷抗体也就是天然抗体，是在没有任何可觉察的抗原刺激下而产生的抗体，以IgM为主，也可以是一种无察觉的免疫刺激而得。正常情况下，健康人体内均含有少量的冷抗体，效价很低，一般在1:16以下。分子量较大，不耐热，在425盐水中与相应红细胞发生肉眼可见凝集，随着温度升高，活性降低。 如支原体及病毒性肺炎、传染性单核细胞增多症、再生障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血、红斑狼疮等患者，血清中有较高效价冷抗体，容易导致ABO正反定型出现全凝集现象。 一般370.9%生理盐水洗涤红细胞即可排除干扰，也可用巯基乙醇或二硫苏糖醇可将其灭活,ABO正反定型不合的理论性问题,2-2 反定型不合常见原因 （1）新生儿抗-A、抗-B检出率为29.3% 89.4% （2）老年人随着年龄增加，抗体水平减弱 （3）白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤以及使用免疫抑制剂的病人 （4）先天性丙种球蛋白缺乏的病人 （5）免疫缺陷的病人 （6）M蛋白伴抗-A、抗-B减弱或缺乏 （7）嵌合体 （8）骨髓移植病人，外周血干细胞移植或脐带移植的病人 （9）血清中存在某些额外的抗体，如抗-P1、抗-M、抗-H,ABO正反定型不合的理论性问题,2-3 被检者蛋白或血浆异常 （1）巨球蛋白增加，如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等浆细胞病，某些何杰金淋巴瘤，纤维蛋白原水平升高会形成缗钱串。 用生理盐水洗涤病人红细胞或向试管中加入1滴或2滴生理盐水可驱散缗钱串假凝集。 （2）血浆增溶剂：如 右旋糖酐、聚乙烯吡咯酮（PVP）等可引起RBC缗钱串假凝集，解决方法与上相同 （3）脐血中沃顿氏胶含有粘多糖物质，能引起自发缗钱串假凝集。将脐血洗涤68次即可。 （4）有些疾病如骨癌、胰腺癌，病人血浆中过剩的可溶性血型物质（BGSS）会中和试剂抗-A，或抗-B，在正定型中会出现假阴性或弱反应。用生理盐水洗去可解决此问题。,ABO正反定型不合的理论性问题,2-4 其他原因 （1）多凝集，由隐匿红细胞抗原引起（如T抗原），见于细菌性及病毒性感染。 （2）前带现象，病人的抗-A或抗-B水平不合适 （3）强冷凝集素：这种红细胞常直接抗球蛋白试验 （DAT）阳性，如果此抗体与所有成人红细胞凝集，则反定型时与A、B型红细胞必凝集。将患者红细胞用37生理盐水洗涤三次，如果血中存在强冷凝集素，可以做自吸收实验，从血清中除去自身抗体，再用谱细胞鉴定抗体特异性。,（4）免疫性抗体：为输血工作中常见原因，产生的抗体包裹红细胞，直接抗球蛋白试验 （DAT）呈阳性，正定型可发生混合外观或弱凝集。 （5）温自身抗体：由AIHA、药物引起，如甲基多巴，红细胞包裹足够的抗体，启动自然凝集，其反应强度室温较37弱得多。 （6）病人血清中有ABO同种凝集素以外的额外同种抗体，反定型红细胞有A及B以外的抗原，以及患者血清中的其他抗体，可以凝集这些细胞。 （7）抗-A、抗-B以外的抗体，可形成抗原-抗体复合物，这种复合物可以吸附在红细胞上。,ABO正反定型不合的解决办法,因为大多数ABO正反定型不符的原因是可以查清的，因此首先应重复全部试验，确保红细胞悬液勿太浓或太淡，红细胞试剂及试管无污染，标本无混淆，如果实验结果与原来一样，则需做以下整套试验：,ABO正反定型不合的解决办法,（1）对受检红细胞做直接抗球蛋白试验 （DAT实验），以确定红细胞是否被抗体致敏 （2）对被检红细胞以抗-A,抗-A1，抗-B,抗-AB做正定型 （3）对被检者血清以A1，A2，B细胞和脐血O细胞作反定型，以及O型谱细胞作抗体测定和抗体鉴定，同时要做自身对照（病人血清加病人红细胞） （4）所有试验在室温孵育1530min，必要时4孵育1530min读取结果。 （5）实验方法应包括盐水介质法，DAT或凝聚胺实验,ABO正反定型不合的解决办法,（1）重新采集标本 （2）重复试验 （3）洗涤 （4）亚型测定 （5）显微镜核实 （6）其他方法（酶法或直接抗球蛋白法),新生儿溶血病,新生儿溶血病是孕妇和胎儿之间血型不合而产生的同族血型免疫疾病，可发病于胎儿和新生儿的早期。当胎儿从父方遗传下来的显性抗原恰为母亲所缺少时，通过妊娠、分娩，此抗原可进入母体，刺激母体产生免疫抗体。当此抗体又通过胎盘进入胎儿的血循环时，可使其红细胞凝集破坏，引起胎儿或新生儿的免疫性溶血症。这对孕妇无影响，但病儿可因严重贫血、心衰而死亡，或因大量胆红素渗入脑细胞引起核黄疸而死亡，即使幸存，其神经细胞和智力发育以及运动功能等，都将受到影响。 母儿血型不合，主要有ABO和Rh型两大类，其他如MN系统也可引起本病，但极少见。ABO血型不合较多见，病情多较轻，易被忽视。Rh血型不合在我国少见，但病情严重，常致胎死宫内或引起新生儿核黄疸。,ABO血型系统中，孕妇多为O型，父亲及胎儿则为A、B或AB型。胎儿的A、B抗原即为致敏源。Rh血型中有6个抗原，分别为C、c、D、d、E、e，其中以D抗原性较强。致溶血率最高，故临床上以抗D血清来检验。当母亲或新生儿红细胞与已知的抗D血清发生凝集，即为Rh阳性，反之则为阴性。Rh阴性的孕妇，偶亦可被其他抗原致敏而产生抗体，如抗E抗C抗体等，从而发生母儿血型不合。 胎儿红细胞正常不能通过胎盘，仅在妊娠或分娩胎盘有破损时，绒毛血管内胎儿红细胞才能进入母体，并根据进入的量、致敏次数，影响到抗体产生的多少及最后引起胎婴儿溶血的轻重等。 血型抗体是一种免疫球蛋白，有IgG、IgM两种。IgG分子量小（7Sr球蛋白），为不完全抗体（胶体介质抗体或遮断性抗体），能通过胎盘；而IgM分子量大（19S球蛋白），为完全抗体（盐水凝集抗体），不能通过胎盘。Rh、ABO血型抗体能通过胎盘起作用的是IgG,新生儿溶血临床症状,（一）因红细胞破坏增加，网状内皮系统及肝、肾细胞可有含铁血黄素沉着。 （二）骨髓及髓外造血组织呈代偿性增生，肝脾肿大，镜检在肝、脾、肺、胰、肾等组织内可见散在髓外造血灶。 （三）贫血导致心脏扩大，血浆蛋白低下、全身苍白、水肿、胸腹及心包等组织内可同凶散在髓外造血灶。 （四）高胆红素血症可引起全身性黄疸及核黄疸。核黄疸多发生在基底核、海马钩回及苍白球、视丘下核、尾状核、齿状核等处。神经细胞变性，胞浆黄染，核消失。 轻症者多无特殊症状，溶血严重者，可出现胎儿水肿、流产、早产甚至死胎。娩出后主要表现为贫血、水肿、肝脾肿大、黄疸及核黄疸。症状的轻重取决于抗体的多少、新生儿成熟度及代偿性造血能力等。,（三）新生儿溶血症处理,注意三个关键时间：1、初生12天，轻症者注意黄疸出现时间，加重速度和程度。若出生时贫血严重，脐血血红蛋白12g者，应考虑输血