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课时作业(十六) 生物技术实践1.(2017永州二模)某研究性学习小组制作泡菜、检测亚硝酸盐含量和计数乳酸菌的数量。(1)永州泡菜鲜美可口,而且开胃、增加食欲,泡菜开胃增加食欲的原因是泡菜中含有促进开胃增加食欲的物质是_。(2)取泡菜的汤汁制作临时装片在显微镜下观察,制作泡菜选用的菌种是如图的_所示的生物。(3)尽管泡菜鲜美可口但不能多吃,还是多吃新鲜的蔬菜为佳,因为新鲜蔬菜的亚硝酸盐含量比泡菜_。(4)测定亚硝酸盐含量实验过程中,在泡菜提取的滤液中加入氢氧化铝的作用是_。(5)用稀释涂布平板法测定每克泡菜原汁的乳酸菌的含量,泡菜原汁取样于同一时间同一坛泡菜,分别在103、105、107三种稀释倍数下,各种稀释倍数下均涂布了四个平板,每个平板均接种0.1 mL稀释菌液,在无氧、适温条件下培养的实验结果如表:稀释103倍稀释105倍稀释107倍平板(A)中的菌落数平板(B)中的菌落数平板(C)中的菌落数A1A2A2A4B1B2B3B4C1C2C3C434130328335030824525128421333919根据上表数据计算,每克泡菜原汁中乳酸菌数目大约为_个。(6)最近湘雅医院抢救了一例亚硝酸盐中毒患者,据苏教授说亚硝酸盐具有强氧化性,可将正常的二价铁氧化成三价铁,使患者的_变性失活,出现缺氧症状。(7)在人体消化道的微生物作用下,亚硝酸盐可转化成具有致癌作用的_。答案(1)乳酸(2)D(3)低(4)使泡菜提取滤液变得无色透明(5)2.6108个(6)血红蛋白(7)亚硝胺解析(1)由泡菜制作的原理可知,泡菜开胃增加食欲的原因是泡菜中含有促进开胃增加食欲的物质是乳酸。(2)取泡菜的汤汁制作临时装片在显微镜下观察,制作泡菜选用的菌种是乳酸菌,A是酵母菌,B是醋酸菌,C是毛霉,D是乳酸菌。(3)因为新鲜蔬菜的亚硝酸盐含量比泡菜低,所以尽管泡菜鲜美可口但不能多吃,还是多吃新鲜的蔬菜为佳。(4)测定亚硝酸盐含量实验过程中,在泡菜提取的滤液中加入氢氧化铝的作用是使泡菜提取滤液变得无色透明。(5)计算样品中的菌落数应选择30300之间的平板,计算公式是CVM,C是平均菌落数,V是涂布的体积,M是稀释倍数,因此根据上表数据计算,每克泡菜原汁中乳酸菌数目大约为(245251284)30.11052.6108个。(6)亚硝酸盐具有强氧化性,可将正常的二价铁氧化成三价铁,使患者的血红蛋白变性失活,出现缺氧症状。(7)在人体消化道的微生物作用下,亚硝酸盐可转化成具有致癌作用的亚硝胺。2.(2017辽宁模拟)近年来,纪录片舌尖上的中国引发全民关注美食的热潮,其中多次讲述了利用不同微生物的发酵作用制作的美味食品。请分析回答下列问题:(1)在葡萄酒的自然发酵过程中,醉母菌的来源是_。(2)腐乳制作的流程是:让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制。用盐腌制时,应注意控制_;配制卤汤时,要使卤汤中酒精的含量控制在_%左右。(3)微生物培养时,如果想让培养基内只生长真菌,不长细菌,则可用含_的培养基;后期进行菌落统计时,一般选择菌落数在_间的平板进行计数。(4)制作泡菜过程中,会产生亚硝酸盐,在_条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生_反应后,与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成_色燃料。答案(1)附着在葡萄皮上的野生型酵母菌(2)盐的用量12(3)抗生素(或青霉素)30300(4)盐酸酸化重氮化玫瑰红解析(1)在葡萄酒的自然发酵过程中,酵母菌的来源是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌。(2)腐乳制作过程中,加盐腌制时,应注意控制盐的用量;配制卤汤时,要使卤汤中酒的含量控制在12%左右,若酒精含量过高会延长腐乳成熟的时间,若酒精含量过低则不足以杀菌。(3)青霉素能杀死细菌,对真菌不起作用,所以在微生物培养时,如果想让培养基内只生长真菌,则可用含青霉素的培养基;后期进行菌落统计时,一般选择菌落数在30300间的平板进行计数。(4)在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。3.(2017名校三模拟)如图为用枸杞生产果酒的工艺流程简图,据图回答问题:选料?粉碎灭菌接种发酵?果酒(1)流程中“?”处的内容应为_、_。(2)果酒酿造过程中如果果汁灭菌不合格,果汁中含有醋酸菌,在酒精发酵旺盛时,醋酸菌_(填“能”或“不能”)将果汁中的糖发酵为醋酸,原因是_。(3)果酒制作离不开酵母菌,与醋酸菌相比,酵母菌在结构上的主要特点是_。(4)枸杞果酒制作过程中,接种完成后要先向发酵罐中通入无菌空气一段时间,目的是_。(5)若要提髙果酒的产量,发酵过程中关键要控制好_等条件。答案(1)冲洗过滤(2)不能因醋酸菌是好氧型细菌,而果酒发酵需无氧环境(或因醋酸菌需要在有氧且温度是3035 条件下才能将糖转化成醋酸,而此时发酵罐中的条件是无氧且温度是1825 (3)有成形的细胞核(4)在有氧条件下,使酵母菌迅速繁殖,增加数量(5)温度、pH、通气量解析(1)果酒制作过程为:选料冲洗粉碎灭菌接种发酵过滤果酒,因此图中流程中?处的内容应为冲洗、过滤。(2)果酒酿造过程中如果果汁灭菌不合格,含有醋酸菌,在酒精发酵旺盛时,醋酸菌不能将果汁中的糖发酵为醋酸,因为醋酸菌需要在有氧且温度是3035 条件下,才能将糖转化成醋酸,而此时发酵罐中的条件是无氧且温度是1825 。(3)酵母菌是真核生物,醋酸菌是原核生物,真核细胞与原核细胞相比,在结构上最主要的区别是有成形的细胞核。(4)果酒制作过程中需要先通气后密封,先通气的目的是让酵母菌在有氧条件下大量繁殖,增加数量。(5)若要提高果酒的产量,发酵过程中关键要控制好适宜的温度、pH、通气量等条件。4.(2017衡阳二模)已知青蒿素,无色针状晶体,易溶于有机溶剂,不易挥发;而玫瑰精油化学性质稳定,难溶于水,易溶于有机溶剂,易挥发。根据生物相关知识,回答下列问题。(1)从黄花蒿中提取青蒿素时,应采用萃取法,理由是_;并且通常在提取前将黄花蒿茎叶进行_和干燥,以提高效率;干燥过程应控制好_和时间,以防止青蒿素分解。(2)提取过程中宜采用水浴加热以防止燃烧、爆炸;所得液体浓缩前需进行_。(3)玫瑰精油化学性质稳定,难溶于水,易溶于有机溶剂,简便易行的提取方法是水蒸气蒸馏中的_法,在提取过程中分别加入NaCl(目的是_)、Na2SO4;要提高玫瑰精油的产品质量,应采用的措施是_。答案(1)青蒿素为非挥发性物质,不能随水蒸气蒸馏出,但易溶于有机溶剂粉碎温度(2)过滤(3)水中蒸馏增加水的比重,使油水分层(严格控制蒸馏温度,)延长蒸馏时间解析(1)青蒿素为非挥发性物质,不能随水蒸气蒸馏出,但易溶于有机溶剂,因此从黄花蒿中提取青蒿素时,应采用萃取法;通常在提取前将黄花蒿茎叶进行粉碎和干燥,以提高效率;干燥过程应控制好温度和时间,以防止青蒿素分解。(2)提取过程中宜采用水浴加热以防止燃烧、爆炸,所得液体浓缩前需进行过滤。(3)玫瑰精油化学性质稳定,难溶于水,易溶于有机溶剂,简便易行的提取方法是水蒸气蒸馏中的水中蒸馏法,在提取过程中加入NaCl,可以增加水的比重,使油水分层;要提高玫瑰精油的产品质量,应严格控制蒸馏温度,延长蒸馏时间。5.回答下列有关胡萝卜素提取的相关问题:(1)从胡萝卜中提取胡萝卜素时,通常在萃取前要将胡萝卜粉碎和_,以提高萃取效率;水蒸气蒸馏法_(填“适合”或“不适合”胡萝卜素的提取,原因是_;为了取得最佳萃取效果,萃取的时间应该_(“长”或“短”);鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时,通常可采用_法,并以_样品作为对照。(2)某同学在提取胡萝卜素的实验中经萃取、过滤后,对萃取液的浓缩设计如下实验装置,请指出该装置中的两处错误。错误1:_;错误2:_。答案(1)干燥不适合胡萝卜素为非挥发性物质,不能随水蒸气蒸馏出长纸层析标准的胡萝卜素(2)温度计位置过低冷凝管进水口、出水口接错解析(1)从胡萝卜中提取胡萝卜素时,通常在萃取前要将胡萝卜粉碎和干燥,以提高萃取效率;水蒸气蒸馏法不适合胡萝卜素的提取,原因是水蒸气蒸馏法适用于分离挥发性物质,而胡萝卜素为非挥发性物质,不能随水蒸气蒸馏出;一般来说,原料颗粒小、萃取温度高、时间长,需要提取的物质就能够充分溶解,萃取效果就好;鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时,通常可采用纸层析法,并以标准的胡萝卜素样品作为对照。(2)图示对萃取液的浓缩实验装置中有两处错误。错误1是温度计位置过低;错误2是冷凝管进水口、出水口接错了。6.(2017合肥市三模)运用所学知识回答下列与生物技术实践相关的问题。(1)提取和鉴定胡萝卜素常用的方法分别是_和_。下图所示为胡萝卜素提取粗品鉴定的结果,其中属于提取样品的是_点。(2)制作牛肉膏蛋白胨固体培养基时,应待培养基冷却至50 左右时,在_附近倒平板。等待平板冷却凝固后,将平板_。(3)鉴定分解尿素的细菌时,需在培养基中加入_指示剂,若指示剂变_,说明有目的菌株存在。答案(1)萃取法纸层析法B、C(2)酒精灯火焰倒过来放置(3)酚红红色解析胡萝卜素、叶绿素、叶黄素、番茄红素和辣椒红素都是脂溶性植物色素,一般不溶于水,易溶于酒精、乙醚和氯仿等有机溶剂,故常用有机溶剂萃取胡萝卜素。提取过程:胡萝卜粉碎干燥萃取过滤浓缩鉴定。据图分析,A、B、C、D 4点中,属于标准样品的样点是A和D,提取样品的样点是B和C,在图中的层析谱中,甲和乙代表的物质分别是胡萝卜素、其他色素和杂质,该层析的目的是胡萝卜素粗品的鉴定。(1)提取胡萝卜素最常用的方法是萃取法,而鉴定的方法一般采用纸层析法。图中属于标准样品的样点是A和D,提取样品的样点是B和C。(2)等培养基冷却至50 左右时,在酒精灯火焰附近倒平板,以防止杂菌污染;等待平板冷却510分钟,将平板倒过来放置,使皿盖在下,皿底在上。(3)在以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌后,如果pH升高,指示剂将变红,这样就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素。7.(2017淮南二模)“煤城”淮北的煤矸石堆积如山。腐殖酸(大分子有机物)是煤矸石的主要成分之一,直接应用效果差。研究人员从煤矸石发酵的环境中筛选得到了能降解腐殖酸的细菌H4。回答下列问题:(1)为了从自然界中获得H4单菌落,可从煤矸石发酵的环境中取样,并应选用以_为唯一碳源的培养基进行培养,除此之外培养基中还应含有_。(2)利用平板划线法纯化H4菌株时,划线前需要_接种环。从第一区域划线的_开始往笫二区域内划线。(3)若要测定培养液中H4活菌数量常用_法进行计数,其统计数据往往比真实值_(高/低),原因是_。答案(1)腐殖酸水、氮源和无机盐(2)灼烧末端(3)稀释涂布平板低出现两个或多个细胞连在一起形成一个菌落解析(1)根据实验目的:筛选得到了能降解腐殖酸的细菌H4。为了从自然界中获得H4单菌落,应选用以腐殖酸为唯一碳源的培养基进行培养,除此之外培养基中还应含有氮源、水和无机盐等。(2)利用平板划线法纯化H4菌株时,为了防止接种环被杂菌感染,划线前需要灼烧接种环。从第一区域划线的末端开始往笫二区域内划线。(3)若要测定培养液中H4活菌数量常用稀释涂布平板法进行计数,其统计数据往往比真实值低,原因是出现两个或多个细胞连在一起形成一个菌落。8.(2017芜湖市5月质检)某科研小组自制两种大蒜捣取液,探究它对餐具上细菌的杀灭效果,具体过程如下,请完善相关步骤:(1)制作提取液:做法见下表编号A组B组经消毒的大蒜(g)350350无菌水(mL)_880无菌食醋(mL)/20表中A组无菌水需加入_ml(2)取样:取污染程度一致的餐具若干,随机等分为甲、乙、丙三组。将经过灭菌处理的滤纸,贴在甲组餐具表面1 min,再将该滤纸放入50 ml无菌水中,充分振荡后制成细菌原液1;将乙、丙两组的餐具分别浸泡在等量的A组和B组提取液中后取出用无菌水的缓水流冲洗10 s;将经过灭菌处理的滤纸,分别贴在浸泡后的乙、丙两组餐具表面各1 min,再将滤纸分别放入两瓶50 ml无菌水中,充分振荡后制成细菌原液2、细菌原液3。(3)培养和计数:采用_法分离三种原液中的细菌,且每个浓度至少涂布_个平板。制成的平板放在37 培养48 h,取出计数。(4)本实验需另设一组,用等量无菌水涂布在_平板上,目的是_。(5)现察记录:在下面空白处,设计A组大蒜提取液处理前后,细菌原液经适当稀释后的菌落数观察记录表。答案(1)900(3)稀释涂布平板法3(4)未接种细菌的空白检测平板灭菌是否彻底(5)原液菌落数组别1号2号3号平均值细菌原液1细菌原液2解析阅读题干和题图可知,本题是通过实验研究大蒜提取液的抑菌效果,梳理微生物实验室培养技术的相关知识点,然后根据问题涉及的具体内容分析解答。(1)根据实验设置的单因子变量的原则,B组加入冷开水880 mL,无色食醋20 mL,A组实验不加食醋,则加冷开水应是88020900 mL。(3)采用稀释涂布平板法法分离三种原液中的细菌,且每个浓度至少涂布3个平板。(4)本实验需另设一组,用等量无菌水涂布在未接种细菌的空白平板上,以检测平板灭菌是否彻底。(5)根据实验过程,A组有细菌原液1和2,计数时涂布了三个平板,求其平均值,则设计的表格为:原液菌落数组别1号2号3号平均值细菌原液1细菌原液29.(2017福州一模)生物脱硫法是利用微生物产生的酶分解有机硫化物,为获得适合的硫氧化细菌,研究人员采用模拟硫化物废水作为硫源富集培养,经纯化得到硫氧化细菌菌株tl7,并对其脱硫能力进行了研究,请回答下列问题:(1)配置硫化物富集培养液,连续培养7天。为了从富集液中得到菌株,倒平板操作时,培养基_后应将其倒过来放置。划线时,可进行Z型划线,使接种物逐渐稀释,目的是培养后能出现_。(2)富集培养液经多次分离筛选得到具有脱硫能力的菌株tl7,其生长曲线如图一,据图分析,该菌株25 h后进入_期,42 h后进入_。(3)为研究菌株tl7脱硫能力与环境中有机硫含量的关系,应将其在_的有机硫化物中培养一定时间后,测量培养液中_。(4)为进一步研究不同氮源对菌株生长量以及脱硫效果的影响,研究人员选择三种有机氮源和三种无机氮源分别培养,写出三种有机氮源_。图二中13组为有机氮源、46组为无机氮源,据图分析,有机氮源的菌株生长量_(高于/低于)无机氮源,同时有机氮源对菌株脱硫活性有_作用。答案(1)冷却单个菌落(2)稳定生长期衰亡期(3)不同浓度有机硫化物减少量(去除率、有机硫化物转化成单质硫的转化率)(4)牛肉膏、酵母膏、蛋白胨高于抑制解析(1)倒平板操作时,培养基需要冷却后将其倒过来放置,防止冷凝水污染培养基。划线时,可进行Z型划线,使接种物逐渐稀释,目的是培养后能出现单个菌落。(2)富集培养液经多次分离筛选得到具有脱硫能力的菌株tl7,其生长曲线如图一,据图分析,该菌株25 h后进入稳定生长期,42 h后进入衰亡期。(3)为研究菌株tl7脱硫能力与环境中有机硫含量的关系,应将其在不同浓度的有机硫化物中培养一定时间后,测量培养液中有机硫化物减少量(去除率、有机硫化物转化成单质硫的转化率)。(4)常见的有机氮源有牛肉膏、酵母膏、蛋白胨。图二中13组为有机氮源、46组为无机氮源,据图分析,有机氮源的菌株生长量高于无机氮源,同时有机氮源对菌株脱硫活性有抑制作用。10.(2017甘肃二诊)【生物选修1:生物技术实践】某校实验小组对某种品牌的酸奶中乳酸菌的数量进行了测定。取6支灭菌的试管,分别加入9 mL灭菌的生理盐水,标号为B1、B2、B3、B4、B5、B6;吸取1 mL酸奶样液加入试管B1中,混合均匀;然后另取一支吸管从B1中吸取1 mL溶液,加入B2中,依次类推,最后从试管B6中取0.1 mL样液进行涂布计数,涂布三个平板,其菌落数分别为251、265、276个。请回答下列问题:(1)培养乳酸菌除了必要的_外,还需在培养基中添加维生素。(2)制备乳酸菌的培养基过程中,对培养皿灭菌的常用方法是_;待平板冷凝后,要将平板倒置,其目的是_。(3)该实验小组对乳酸菌接种所采用的方法是_。根据酸奶样品的稀释倍数和接种稀释液的体积,统计平板上的_;根据三个平板中菌落数,可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为_个/ mL,该方法测定的乳酸菌的含量和实际值相比,一般_(填“偏大”或“偏小”)。(4)为了使测量结果更加准确,该实验对照组的设置是_。答案(1)营养物质(2)干热灭菌法防止平板冷凝后,培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染(3)稀释涂布平板法菌落数目2.64109偏小(4)另增设一组培养基,接种等量灭菌的无菌水,其他操作均相同解析根据题意,经过6次稀释,每次在1毫升前一次培养液中加入9毫升生理盐水稀释,相当于每次都将前一次的培养液稀释10倍,所以最后的计数培养液与最先的培养液相比,共稀释了106倍。(1)培养乳酸菌除了必要的碳源、氮源、水、无机盐等营养物质外,还需在培养基中添加维生素。(2)对培养皿灭菌的常用方法是干热灭菌法,对培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌。为了防止平板冷凝后,培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染,要将平板倒置。(3)为了对稀释的培养液中的乳酸菌的活菌计数,该实验小组所采用的方法是稀释涂布平板法,根据酸奶样品的稀释倍数和接种稀释液的体积,统计平板上的菌落数。结合前面的分析可得,每毫升原酸奶中乳酸菌个数(251265276)31060.12.64109。该方法测定的乳酸菌的含量一般比实际值小,因为所计数的菌落数有可能是由两个或多个细菌繁殖为一个菌落。(4)为了排除培养过程中被杂菌污染带来测量结果不准确,通常采取另增设一组培养基,接种等量灭菌的无菌水,其他操作均相同的对照组来避免。11.(2017揭阳二模)炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病。炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列,菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者,可根据噬菌体的寄主专一性,通过实验进行确诊。(1)细菌培养:采集疑似患者的样本,分离培养,获得可疑菌落。(2)细菌鉴定:实验流程图如下图所示。对配制的液体培养基要采用_方法灭菌。培养基配制和灭菌时,灭菌与调节pH的先后顺序是_。挑选可疑菌落制片后,用_观察,可看到呈竹节状排列的杆菌。接种可疑菌后,35 培养24小时,液体培养基变浑浊,原因是_。图中的对照组试管中应加入_。两组试管同时培养6小时后,进行比较,若实验组液体培养基的浑浊度_(填“提高”、“降低”、“不变”),则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染。此实验依据的原理是_。答案(2)高压蒸汽先调节pH,后灭菌显微镜细菌大量繁殖等量生理盐水降低实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌,使细菌死亡,溶液变澄清解析熟记并理解微生物的实验室培养、微生物的分离与鉴定等相关基础知识、形成清晰的知识网络。在此基础上从题图中提取信息并结合题意作答。对配制的液体培养基要采用高压蒸汽方法灭菌。平板培养基配制的基本流程为:计算称量溶化调节pH灭菌倒平板,据此可知:培养基配制和灭菌时,灭菌与调节pH的先后顺序是先调节pH、后灭菌。挑选可疑菌落制片后,用显徽镜观察,可看到呈竹节状排列的杆菌。接种可疑的细菌后,细菌大量繁殖,导致液体培养液变浑浊。题图显示:该实验的自变量为是否加入噬菌体。实验组加入生理盐水配制的澄清噬菌体液,则对照组试管中应加入等量生理盐水,以排除生理盐水对实验结果的影响。实验组中加入的噬菌体能够特异性地侵染炭疽杆菌,导致炭疽杆菌裂解死亡而使其数

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