性传播疾病的实验室检测.ppt

性传播疾病的实验室检测,南康市疾病预防控制中心 2012-08-22,一、概述-梅毒病原体,（一）、名 词 由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性全身性性传播疾病 是我国卫生部规定的重点防治性病之一 中华人民共和国传染病防治法规定的乙类传染病 世界卫生组织列为世界上最常见的50种传染病之一 梅毒螺旋体（Treponema pallidum，TP ） 是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体,(二）、免 疫 以细胞免疫为主，体液免疫只有一定的辅助防御作用 当螺旋体从体内清除后可再感染，而且仍可出现一期梅毒症状 此病周期性潜伏与再发的原因可能与体内产生的免疫力有关,（三）、抗 原 1表面特异性抗原：刺激机体产生特异凝集抗体及密螺旋体制动或溶解抗体，后者加补体可溶解螺旋体 2螺旋体内类属抗原：可产生补体结合抗体，与非病原性螺旋体有交叉反应 3，螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原：当螺旋体侵入组织后，组织中的磷脂可粘附在螺旋体上，形成复合抗原，此种复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体，称为反应素（Aegagin），可与牛心肌或其他正常动物心肌提取的类脂质抗原起沉淀反应（康氏试验）或补体结合反应（华氏试验）,二、检测方法-病原体检查,梅毒螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法。 诊断一期梅毒、二期梅毒时，可取患者的渗出液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下观察螺旋体的特征性形态和运动方式. 病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法,暗视野显微镜检查、镀银染色和荧光抗梅毒螺旋体单克隆抗体等检查方法，直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。暗视野显微镜检查已被世界卫生组织指定为性病实验室必备项目之一。 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，,暗视野显微镜检查,镀银染色,检测方法-血清学检测,根据检测所用抗原不同，临床血清试验分为两大类： 1.非梅毒螺旋体抗原血清试验 2.梅毒螺旋体抗原血清试验,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,性病研究实验室试验（VDRL） 不加热血清反应素试验（USR） 血浆反应素环状卡片试验（RPR、TRUST）,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都一样,其基本成分是心磷脂 、卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物 凝集成网状沉淀颗粒 被肉眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似,RPR结果,TRUST结果,检测方法非梅毒螺旋体血清试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验特点,前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象。,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,采用梅毒螺旋体作抗原，是特异性的抗原体反应。 梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TP-PA） 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、 梅毒螺旋体酶联免疫试验（ELSA-TP） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB-Test）,梅毒螺旋体血清试验的临床意义,作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验。 梅毒患者经过抗梅治疗后，ELSA、TPPA试验仍可阳性，故TPPA试验阳性不能作为疗效观察的指标。 ELSA、TPPA阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。,梅毒血清假阳性反应,技术性假阳性反应：如实验室操作错误，标本溶血等，如重复试验，无梅毒患者血清试验成为阳性。 生物学假阳性反应：因非螺旋体抗原血清试验是非特异性的，在其它一些疾病，尤以感染性疾病，也可释放心拟脂至血液中，产生反应素，如麻风、麻疹、疟疾、传染性肝炎、病毒性肺炎、传染性单核细胞增多症，系统性红斑狼疮，非典型性肺炎、甚至妊娠都可出现阳性，但这类患者血清反应滴度低，很少超过1：8。而且半年内渐转成阴性。另外可用特异性的梅毒血清反应证实。如用FTAABS试验,假阴性反应,在梅毒螺旋体感染后12周内可呈阴性反应 梅毒螺旋体感染不久即开始治疗 晚期梅毒患者的血清中反应素含量低，敏感性低的梅毒血清试验易出现阴性反应 在二期梅毒时RPR试验也可出现阴性反应，前带现象(prozone phenomenon),血清学检测的几个特点,在最初的两周可能是阴性结果 FTA、TPPA和ELISA在所有阶段都最敏感 VDRL和RPR在三期梅毒期可能为阴性 VDRL-CSF仅用于诊断神经性梅毒,淋球菌实验室诊断技术,概况-病原学,淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,简称淋球菌)引起的各种化脓性感染，是一种经典的常见的性传播疾病. 淋球菌为革兰阴性双球菌，大小约0.60.8m。通常成对生长，两菌接触面平坦。 淋球菌与奈瑟属的另一种致病菌脑膜炎球菌及其他共栖奈瑟菌在生物学上有许多相似性，可通过生化特性加以鉴别。淋球菌原发性感染部位主要为男性尿道或女性宫颈管内膜,概况-流行病学,淋病的传播途径有以下二种： 1)直接性接触感染：成人淋病几乎全部通过性接触感染。 2)间接接触感染：儿童可通过污染了淋球菌的物品间接感染。新生儿可通过母亲产道分泌物间接感染。,淋病的实验室诊断方法,直接显微镜检查，观察淋球菌细胞； 分离培养淋球菌； 非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原或DNA（EIA, PCR/LCR）,标本的采集和运送,取材的部位 年龄 性别 性接触方式 临床表现,取材拭子 藻酸钙拭子 普通棉拭子 涤纶拭子,标本的采集和运送-取材部位,男性 异性恋者:采集尿道标本，有口淫史者加取咽部标本； 同性恋者: 采集尿道、直肠及咽部标本. 女性 采集宫颈标本，必要时从尿道、直肠、咽部、前庭大腺和尿道旁腺取材； 幼女 采集阴道分泌物； 新生儿眼炎患者 采集眼结膜分泌物，对其母亲采集宫颈、尿道及直肠标本。,标本的采集和运送-取材方法,尿道 男性患者 用手指从阴茎根部向尿道口方向挤压，有症状患者可挤出脓液，用取样拭子蘸取脓液作涂片或培养。对挤压后无明显分泌物时，采用男用取材拭子插入尿道 23cm，稍用力转动，保留数秒钟再取出， 以采集到粘膜上皮细胞。 女性患者 可抵着耻骨联合轻轻按摩尿道口，挤压出分泌物。如果无明显分泌物，可用同男性相似的上述方法取材。,标本的采集和运送-取材方法,宫颈 取材前用温水或生理盐水湿润扩阴器。应避免使用防腐剂和润滑剂，因为这些物质对淋球菌有抑制作用。仔细检查阴道壁和宫颈，如果宫颈口外面的分泌物较多，先用无菌棉拭清除过多的宫颈粘液。将一取样拭子插入宫颈管内12cm，稍用力转动，保留1030秒后取出。,标本的采集和运送-取材,直肠 将取样拭子插入肛门23cm，从紧靠肛环边的隐窝中取材。避免接触粪便。 阴道 青春期前女孩可采集阴道标本。将取样拭子置于阴道后穹窿1015秒，采集阴道分泌物。 咽部 从咽后壁或扁桃体隐窝取材,标本的采集和运送-运送,淋球菌的抵抗力弱，对热敏感，不耐干燥。取材后标本若不能立即接种于选择性培养基上时，需采用运送系统。置于非营养型运送培养基中的标本应在12小时内送到实验室，接种于选择性培养基，分离阳性率可达90%以上。超过24小时则分离阳性率下降。,直接显微镜检查,染色方法: 革兰染液 美兰染液 姬姆萨染液 荧光抗体 革兰染色为一传统方法，因简便、快捷及价廉、仍然为最广泛采用的方法。革兰染色将菌分为二大类，即染成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。,直接显微镜检查的临床意义,男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%99%，具诊断价值。 宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅4070%。 不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。 亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。,淋球菌培养,培养法为诊断淋病的金标准. 对女性淋病的确诊应做淋球菌培养 从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。 培养的敏感性81100%。 培养的优点有： 特异性极高（100%）； 可发现无症状淋球菌感染患者； 可确诊儿童性虐待； 可用于进一步作药敏试验； 可用于治疗后的判愈试验。,淋球菌培养-培养条件,培养条件 ： 35 36，含5%10% CO2，湿润（70%湿度）的环境。 CO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。 培养时间：2448小时,淋球菌培养-培养条件,淋球菌培养-观察结果,培养24小时后检查平皿，此时没有菌生长的平皿应继续培养至48小时，仍无菌生长才可丢弃，作出淋球菌培养阴性的报告。 对选择性培养基上分离的直径在0.51mm，无色、灰白色的半透明菌落应作进一步鉴定。,淋球菌培养-观察结果,淋球菌培养-淋球菌的初步鉴定,初步鉴定淋球菌的主要依据 菌落特征 氧化酶试验 革兰染色,淋球菌氧化酶阳性,淋球菌培养-淋球菌的确证试验,糖发酵试验 免疫学试验 -荧光抗体染色 -协同凝集试验 酶底物试验 DNA探针试验,淋球菌的鉴定特征,非培养诊断技术,非培养技术的特点 不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运送条件； 仅适合尿道或宫颈标本，以及尿液（PCR/LCR）； 不能进行抗生素敏感性试验 用于判愈试验需在治疗后至少3 周以上进行.,生殖道沙眼衣原体感染,生殖道沙眼衣原体感染-病原体,沙眼衣原体有15个血清型，A, B, Ba, C, D-K, LI, L2, L3 -A, B, Ba和C型最常引起沙眼 D-K型主要感染泌尿生殖道 LI, L2, L3型引起性病性淋巴肉芽肿,生殖道沙眼衣原体感染-病原体,非淋菌性尿道炎（NGU)是指由性接触传染的一种尿道炎，它在临床上有尿道炎的表现，但在尿道分泌物中查不到淋球菌。 40-50%由沙眼衣原体引起，20-30%由支原体引起，尚有10-20%由阴道毛滴虫、白色念珠菌和单纯疱疹病毒等引起。,病原学,革兰阴性、专性细胞内寄生的微生物 衣原体有特殊的发育周期,可见2种不同的结构 原体：感染型，较小，呈球形 始体：增殖型，大，呈圆形或卵圆形,沙眼衣原体感染的并发症,附睾炎 前列腺炎 Reiter病,直肠炎,多发于男性同性恋者，由LGU株引起 在男性同性恋者中，直肠沙眼衣原体的分离率为48；而在男性直肠炎患者中，分离率为12 临床表现：轻者无症状，重者有直肠疼痛、出血、腹泻及粘液性分泌物,女性感染宫颈炎,约1/3左右的病人无任何临床症状 阴道分泌物：稀薄至脓性，正常至增多有气味 宫颈充血，水肿，脆性增加 宫颈管口粘液脓性分泌物,尿道炎,大多数女性尿道沙眼衣原体感染无症状 急性尿道综合症：可与急性细菌性膀胱炎的症状相似，如排尿困难、尿频、尿急 6080的尿道感染者同时合并宫颈感染,盆腔炎（PID）,衣原体宫颈炎2040 上生殖道感染1040 有症状PID,新生儿感染,分娩时传播 沙眼衣原体活动性感染的孕妇，其新生儿的感染率 在任何部位的感染5070 新生儿结膜炎黄050 至少有50的结膜炎患儿同时有鼻咽感染 30的鼻咽感染发展为衣原体肺炎,男性感染非淋菌性尿道炎,潜伏期：13周 症状：尿道粘液性或粘液脓性分泌物，并有尿痛、尿道不适等症状。,沙眼衣原体感染-实验室检测,细胞培养 抗原检测试验 （酶联免疫吸附实验、直接荧光法、快速抗原试验） 直接涂片显微镜检查 核酸扩增检测(NAAT)法 抗体检测,衣原体的培养,评 价 敏感性7080 特异性100 缺点 费时（需35天），费力，技术要求高 不宜作为临床常规检查 不宜用于大规模的筛查和流行病学调查,抗原检测,评 价 酶联免疫吸附试验 敏感性和特异性与直接免疫荧光法相似 敏感性：7997 高 特异性: 9799 高 试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故,抗原检测,评 价 直接免疫荧光法 敏感性70%90% 特异性83%99% 由于有可能将某些发光颗粒(白细胞、上皮细胞、色素颗粒)、细菌和酵母菌误认为沙眼衣原体，因此此法对于实验人员的技术水平要求较高,抗原检测,抗原快速检测: 优 点 简易，方便，快速，尤其适用于基层单位 缺 点 标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果,核酸扩增检测,核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和RNA）检测病原体。方法包括 聚合酶链反应（PCR） 连接酶链反应（LCR） 等温链置换扩增技术（SDA） 转录介导扩增技术（TMA） 核酸序列扩增技术（NASBA） 实时荧光PCR等。,核酸扩增检测,核算扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的“金标准”。 核算扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体的检测，也可用于男女性尿液标本的检测。 开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临床核酸检测技术资格证。,显微镜检查,涂片姬姆萨染色、碘染色或帕氏染色直接镜检可发现沙眼衣原体包涵体。只适合新生儿眼结膜刮片的检查。,抗体检测,抗体检测 血清抗体水平升高（1:64),见于沙眼衣原体性附睾炎、输卵管炎。新生儿衣原体肺炎中沙眼衣原体IgM抗体滴度升高。,生殖器疱疹 (HSV-2),生殖器疱疹,有单纯疱疹病毒感染泌尿生殖器及肛门部位皮肤粘膜引起的常见性病 单纯疱疹病毒有两种类型：HSV-!和HSV-2,多数生殖器疱疹由HSV2引起 本病呈慢性复发过程，尚无彻底治愈的方法,病原体,HSV是双联DNA病毒，属于人类疱疹病毒a亚科，人类是HSV的唯一自然宿主 病毒颗粒直径约150nm,其中央为病毒核心，含有病毒基因组DNA 病毒具有嗜感觉神经节而形成潜伏感染状态的特征 潜伏部位：骶神经根区,病原学,HSV-2是生殖器疱疹的主要病原体，HSV1引起的生殖器疱疹约占该病的1040。今年来，HSV-1所致生殖器疱疹增多，这与口交等性行为方式有关。,血清学检测的意义,HSV感染的血清流行病学调查 鉴别诊断原发性及非原发性HSV感染 感染者性伴的HSV感染状况的判断 孕妇产前监测,样品的采集,原发性生殖器疱疹的病程为23周，病毒排放的持续时间平均为12d。复发性生殖器疱疹的病程为1周2周，病毒排放的持续时间平均为4d。取材时，应尽可能取疱液和溃疡，以提高检查的阳性率。取材后，将标本放入装有1ml-2ml病毒运送液或hanks液的小瓶中送检，或直接涂片作细胞学检查或病毒的直接免疫荧光检查。,实验室诊断方法,细胞学检查 抗原检测 病毒培养,抗原检测： 用免疫学方法检测HSV抗原是目前最常用的快速诊断方法。这些方法以抗HSV抗体为基础，包括直接免疫荧光法、免疫酶染色和酶联免疫吸附实验(ELISA).其中直接免疫荧光法应用较多。,尖锐湿疣,病原体,尖锐湿疣又称尖圭湿疣、生殖器疣或性病疣，是有某些类型的人类乳头瘤病毒 是最小的DNA病毒 有100多种亚型，不同型别的致病性不同 病毒只能在人体存活 病毒不能在体外组织培养、细胞培养和实验动物中生长,（HPV)引起的增生性疾病。在性活跃人群中，通过性接触而发生肛门生殖器疣，目前，已被公认为性传播疾病之一。本病与癌有一定关系，日益为人们所重视。其亚临床感染也引起人们注意。,临床表现,好发年龄：性活跃的年轻人 潜伏期：13月 开始为小而淡红色丘疹，渐增大增多，表面凹凸不平 通常无自觉症状,临床检查: （一）醋酸白试验 用3-5%醋酸外搽或湿敷，2-5分钟后，肛门则需5min，病灶稍膨隆，大多数结果可直接用肉眼观察，阴道内皮损借助于阴道镜或放大镜观察更清楚。 结果：人类乳头瘤病毒感染部位现百色改变，为均匀一致的白色，临床可疑损害或临床未见皮损的部位均可出现白色改变，直径数毫米至数厘米，形态规则或不规则，边界清楚，也可不什分清楚。,临床意义,该方法简便、经济、快速使用方便，敏