《荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量》实验报告.doc

重庆医科大学 生物分析化学 实验报告年级： 院系：医学检验 班级： 组别：4 姓名： 学号： 实验名称：荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量实验目的: 1.掌握荧光分光光度计的基本结构及操作方法 ； 2.了解荧光产生及测量的过程 ； 3.掌握荧光分光法的定量分析方法（标准曲线法） ； 4.掌握影响荧光强度的因素； 实验原理：奎尼丁是抗疟疾奎宁的右旋体，属于生物碱类抗心律失常药物。主要用于阵发性心动过速，心房颤动，早搏；预防室性心动过速及对对房室结折返性心动过速；还可预防有症状的室上性和室性早搏。奎尼丁的有效血药浓度是3-6mg/L，8mg/L以上可发生严重不良反应。 硫酸奎尼丁的分子式为，分子量为782.96，分子结构如图所示： 其结构分为喹啉环和喹啉碱两个部分，根据其喹啉环结构部分具有产生荧光的特性，采用荧光光度计测量其荧光强度，可实现硫酸奎尼丁含量的测定。实验仪器与试剂： F93型荧光光度计； 100ug/ml的硫酸奎尼丁标准储备溶液 0.050mol/L硫酸溶液； 硫酸奎尼丁标准样品溶液 50ml容量瓶6个； 5ml移液管2只 1cm石英荧光比色皿1个实验步骤:1. 标准系列溶液及样品溶液配制： 按照下表配制硫酸奎尼丁标准系列溶液及样品溶液编号123456（硫酸奎尼丁样品溶液）100ug/ml硫酸奎尼丁标准溶液1.00ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml2.50ml说明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中用0.050mol/L硫酸溶液稀释至刻度并摇匀系列标准溶液浓度2ug/ml4ug/ml6ug/ml8ug/ml10ug/ml -2. 荧光光谱的绘制 将荧光波长调节为440nm，用1cm石英荧光比色皿，以5号溶液作为测定溶液，置于荧光光度计样品室中，盖上样品室盖，调节荧光光度计灵敏度，使其荧光强度读数在60-70左右，然后按照下表依次调节荧光波长，测定不同荧光波长下5号溶液的荧光强度；在坐标纸上以测定的荧光强度为纵坐标，荧光波长为横坐标，绘制荧光光谱，并在荧光光谱上找出最大荧光波长。激发波长365nm荧光波长380nm390nm400nm410nm420nm430nm440nm450nm460nm荧光强度值2.16.117.334.851.863.969.668.260.7激发波长365nm荧光波长470nm480nm490nm500nm510nm520nm530nm540nm550nm荧光强度值53.147.327.618.912.67.94.82.91.93. 标准曲线绘制： 将荧光波长调节至440nm，用1cm石英荧光比色皿，装入0.050mol/L硫酸溶液，置于荧光光度计样品室中，记录其荧光强度。然后按照下表测定标准系列溶液和样品溶液荧光强度，平行测定三次。计算荧光强度的平均值；在坐标纸上以荧光强度的平均值为纵坐标，系列标准溶液的浓度为横坐标制图，绘制标准曲线。1.初始值编号123456（样品）荧光强度F114.830.544.857.370.117.5荧光强度F214.930.645.257.869.817.4荧光强度F314.930.64557.869.917.6F平均值14.930.64557.669.917.52. 减去F0（0.5）的值编号123456（样品）荧光强度F114.33044.356.869.617荧光强度F214.430.144.757.369.316.9荧光强度F314.430.144.557.369.417.1F平均值14.430.144.557.169.417实验数据处理：1. 荧光光谱绘制 2. 标准曲线3.样品溶液中的溶液奎尼丁含量计算根据6号样品溶液荧光强度测定的平均值，在标准曲线上采用作图法求出其对应的浓度值，采用下式计算样品溶液中硫酸奎尼丁的含量。 =实验注意事项：1. 测定系列标准溶液和样品溶液时，必须使用同一只比色皿；2. 比色皿放入荧光光度计样品室前，必须用吸水纸将外表面擦拭干净；3.比色皿在换装不同浓度溶液时，必须用待测溶液润洗至少三次；4.在比色皿未放入荧光光度计测定光路时，必须将样品室舱盖打开；5.调节仪器的灵敏度时应