执业兽医资格考试免疫学7免疫防治课件

第七章 免疫防治,鲁东大学 王晓通,天然被动免疫 天然主动免疫 人工被动免疫 人工主动免疫,第一节 主动免疫和被动免疫,动物在感染某种病原微生物耐过后产生的对该病原体再次侵入的抵抗力称为天然主动免疫 动物通过母体胎盘、初乳或卵黄从母体获得某种特异性抗体，从而获得对某种病原体的免疫力，称为天然被动免疫。 采用人工方法向机体输入由他人或动物产生的免疫效应物，如免疫血清、淋巴因子等，使机体立即获得免疫力人工被动免疫 接种抗原而获得的免疫力人工主动免疫,第二节 疫苗的特征与制备,疫苗如何起作用? 它们如何生长繁殖? 它们如何被使用?,免疫接种,指抗原（疫苗 ）给无免疫个体接种 优点： - 长期保护 - 花费少 - 安全性高,疫苗特性,理想疫苗： 有免疫原性 提供长期保护 - 加强间隔长 没有反应原性，必须有免疫原性 (免疫原性，是指能够刺激机体形成特异抗体或致敏淋巴细胞的能力。反应原性又称抗原性，是指能与由它刺激所产生的抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应) 稳定,疫苗接种的好处,疫苗接种： 保护个体 保护群体 群体保护 能够根除疾病 有巨大的花费节省好处,疫苗研制过程,测试免疫原性 衡量免疫原性 临床实验,免疫原性,放射免疫 加入指示剂,酶联免疫 加入底物和 颜色改变,测量免疫原性,血清转换率：指的是血清抗体免疫成功率，是指接种某种疫苗后能检查到血清抗体的人数占总人数的百分比。 血清保护： - 接种疫苗后产生保护抗体接种者的百分率 几何平均滴度：,临床实验,一期临床： 健康人群的首次实验 20个左右的志愿者 疫苗是否安全？ 疫苗是否有免疫原性？ 三期临床： 100-1000个人 疫苗是否安全？ 疫苗是否有保护性？ - 疫苗的免疫原性与现存疫苗的比较？ - 保护效果怎么样？ 不同批次间是否有相似效果？,二期临床： 50-200个健康志愿者 什么是最好的： - 配方？ - 剂量？ - 规程？ - 方法？ 不同人群是如何被影响的？ 副反应监控 四期临床： 上市后实验 副反应监控 补中数据 - 新适应症 - 比较实验 - 新规程,正在使用的疫苗,疫苗接种 疫苗接种副反应 疫苗存储与发放,接种方法,皮下 - 麻腮风、水痘 肌肉 - 甲肝、乙肝、白百破 口服 - 脊灰,副反应,局部反应 - 在注射部位疼痛 - 红斑 - 肿胀 全身反应 - 发热 - 不适 注射危险（由于技术差）,禁忌症和慎用,超敏反应 - 使用肾上腺素 - 被接种者在附近观察30分钟 急性发热疾病 怀孕 - 接种预防狂犬病除外,储存和发放,减毒活疫苗： 弱毒苗保存于冰箱冷冻室(0以下)冻结保存 溶解后尽快使用 避免反复冻融 若距使用时间较短者(1-2天)置于2-15阴暗、干燥的环境,绝大部分疫苗： 在冰箱+2到+8贮存 不能冰冻,第三节 疫苗的种类、特点及应用,（一）活疫苗 弱毒疫苗：大多人工致弱 异源疫苗：异源疫苗是用具有共同保护性抗原的不同病毒制备成的疫苗 如：火鸡疱疹病毒（HVT）接种预防鸡马立克氏病,毒力减弱的方法: 长时间在体外连续培养传代： 在高于最适生长温度条件下培养:炭疽 在含有特殊物质的培养基中培养:卡介苗 在特殊气体条件下培养: 通过非易感动物:猪丹毒通过豚鼠370代后，又通过鸡42代选育而成；猪瘟兔化弱毒 通过基因工程的方法:去除毒力基因或用点突变，伪狂犬基因缺失苗,优点： 毒力弱或没有毒力，但仍然保持着原有的抗原性，可用较少的免疫剂量即或诱导产生坚实的免疫力， 一般不须使用佐剂，免疫期长，不影响动物产品的品质 有些弱毒病毒疫苗可刺激机体细胞产生干扰素，对抵抗其他病毒强毒的感染也是有益的,缺点 许多弱毒株的致弱机制不明，有返强的危险 研制周期长，有一定的偶然性 运输贮存不方便，一般需要冻干和低温保存,（二）灭活疫苗,病原微生物经理化方法灭活后，仍然保持免疫原性，接种后使动物产生特异性抵抗力，这种疫苗称为灭活疫苗（killed vaccines）或死疫苗。 目前所使用的灭活疫苗有组织灭活苗、油佐剂灭活疫苗和氢氧化铝胶灭活疫苗等。,灭活的方法 最常用的是甲醛（0.4%）溶液，灭活机制： 作用于蛋白质的氨基和酰胺基，以及核酸的嘌呤和嘧啶上的非氢键氨基团，形成交联，使其结构固定并丧失活力。 其它的灭活剂还包括丙酮、乙醇、氧化乙烯等等。,优点：研制周期短、使用安全和易于保存。 缺点：接种剂量大，免疫期较短，需加入适当的佐剂以增强免疫效果，接种时反应较大，对肉品品质有影响。,（三）提纯的大分子疫苗,1.多糖蛋白结合疫苗（polysaccharide conjugate vaccines） 是将多糖与蛋白载体（如白喉、破伤风或霍乱类毒素）结合制成疫苗，这样多糖抗原转变成为T细胞信赖性抗原，能诱导产生IgG和记忆淋巴细胞。 如人的肺炎链球菌的多种血清型荚膜多糖蛋白载体疫苗。,2.类毒素疫苗,是将细菌外毒素经甲醛脱毒，使其失去致病性而保留免疫原性的制剂，如破伤风类毒素、白喉类毒素、肉毒类毒素等等。,3.亚单位疫苗（subunit vaccine） 利用微生物的某种表面结构成分（抗原）制成不含有核酸、能诱发机体产生抗体的疫苗，称为亚单位疫苗 。 亚单位疫苗是将致病菌主要的保护性免疫原存在的组分制成的疫苗 微生物的免疫原性结构成分包括细菌的荚膜、鞭毛和病毒的囊膜、膜粒、衣壳蛋白等。,（四）基因工程重组亚单位疫苗,用基因工程技术将具有免疫保护力的蛋白质基因克隆，并进行表达，以获得亚单位疫苗的方法 常用的表达表达系统有大肠杆菌、酵母和病毒等等。,重组载体的构建,重组质粒的表达（如大肠杆菌中）,（五）基因工程重组活载体疫苗,概念： 基因工程重组活载体疫苗（recombinant living vectored vaccines）是用基因工程技术将保护性抗原基因转移到载体中使之表达的活疫苗。 有多种可用于活载体的疫苗：如痘病毒、腺病毒和疱疹病毒。,（六）基因缺失疫苗,基因缺失疫苗（gene deleted vaccines）是用基因工程技术将强毒株毒力相关基因切除构建的活疫苗 该类疫苗安全性好、不易返祖；其免疫接种与强毒感染相似，机体可对病毒的多种抗原产生免疫应答；免疫力坚实，免疫期长。 如：伪狂犬病毒的tK基因缺失疫苗,（七）核酸疫苗,核酸疫苗(nucleic acid vaccines)包括 DNA疫苗和RNA疫苗，由编码能引起保护性免疫反应的病原体抗原基因片段和载体构建而成。 导入机体的方式主要是肌肉注射，或用基因枪将带有基因的金粒子注入。,（八）合成肽疫苗,合成肽疫苗（synthetic peptide vaccines )是用化学合成法人工合成病原微生物生物的保护性多肽，并将其连接到大分子载体上，再加入佐剂制成的疫苗。 最早报道（1980）成功的是口蹄疫多肽疫苗,（九）表位疫苗,表位疫苗（epitope vaccines）是通过确定抗原蛋白上的B细胞、TH细胞以及CTL细胞识别的表位，经人工合成，并与大分子载体连接，加入佐剂制成； 也可通过基因工程技术表达抗原蛋白表位多肽，或表达与大分子蛋白的融合蛋白制成。,第四节 疫苗的免疫接种,免疫途径 滴鼻、点眼、刺种、注射、饮水、气雾等。 免疫程序 根据当地疫情（传染病）、动物（人）机体状况（主要是指母源及后天获得的抗体消长情况）以及现有疫(菌)苗的性能,为使动物机体获得稳定的免疫力,选用适当的疫苗,安排在适当的时间给动物（人）进行免疫接种,这就叫免疫程序（immune procedure），简单地说是免疫计划（immunization schedule）。,人类,猪免疫程序,A certain dose of vaccine (usually 0.1ml to 0.2ml) is injected in the abdominal area of each fish held with the ventral side up and the head away from the operators body.,草鱼土法免疫疫苗注射,在广东地区普遍进行草鱼土法疫苗的注射，效果非常好。 在200-300克左右注射一次，在1000克左右注射一次。 有专业性的疫苗制备、注射队伍。,病鱼的选择,选择已经患烂鳃、出血、肠炎等疾病的草鱼。 病症愈典型、患病种类愈多愈好。 病鱼刚死亡不久或濒临死亡的草鱼最好。,病鱼的处理,将病鱼按照体重加入10倍量0 .85%的生理盐水，用组织捣碎机捣碎，或用刀剁碎成肉浆。,过滤处理,用离心机在3000转/分钟离心30分钟，或用多层纱布进行过滤，得到滤液，放弃残渣。,疫苗的灭活,取滤液装入大烧杯或瓶中，并放在水浴锅或其他恒温水浴里保温，保温水浴锅的水位应该高于滤液的液面高度。 保温温度：631度。 保温时间：恒温2小时进行灭活。 在保温过程中逐渐加入40%福尔马林，使福尔马林在滤液中的浓度达到1%。一边搅拌一边加入福尔马林溶液。,临时保存,将已经灭活好的疫苗滤液装入灭菌的瓶中，封口，冰箱临时保存。 最好在2-3天内使用完。,草鱼准备,需要注射的草鱼最好先进行锻炼和麻醉处理。 主要前草鱼应该停食1天，将草鱼捕捞并在捆箱中保持2-3小时，并用3%左右食盐泼洒捆箱中草鱼。 或者：在桶或水泥池中，配制0.4-0.8%的食盐水（或0.05-0.2%的晶体敌百虫溶液），将主要草鱼放置其中2-3分钟（消毒和 麻醉）后再进行注射。,疫苗加青霉素、链霉素,在注射前10-20分钟，在制备的疫苗中加入青霉素、链霉素。 按照每500毫升疫苗加入青霉素、链霉素各800万单位。,注射疫苗,时间：在每年的春季或秋季、晴