临床二教班体感染免疫检查课件

体液感染免疫检查,血清免疫球蛋白检测,1,免疫球蛋白（Ig）,一组具有抗体活性的球蛋白，由浆细胞合成与分泌,存在于血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上,分为IgG、 IgA、 IgM、 IgD、 IgE,免疫球蛋白G检测,IgG为人体含量最多和最主要的Ig，占总Ig的7080 对病毒、细菌和寄生虫等有抗体活性 能够通过胎盘 参考值：7.016.6g/L 临床意义： IgG增高:各种慢性感染、慢性肝病、胶原血管病、淋巴瘤以及自身免疫性疾病；单纯性增高见于免疫增殖性疾病 IgG降低:先天性和获得性体液免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、代谢性疾病等,免疫球蛋白A检测,IgA分为血清型IgA与分泌型IgA（SIgA） 血清型IgA占血清总Ig的1015 SIgA由呼吸道、消化道和泌尿生殖道的淋巴样组织合成，参与这些部位的局部感染、炎症或肿瘤 参考值：血清IgA为0.73.5g/L；SIgA：唾液为0.3g/L，泪液为3080g/L，初乳为5.06g/L，粪便为1.3g/L 临床意义： IgA增高：见于IgA型MM、SLE、类风湿关节炎、肝硬化等 IgA降低：见于反复呼吸道感染、非IgA型MM、重链病、轻链病、免疫缺陷、自身免疫性疾病和代谢性疾病等,血清M蛋白检测,M蛋白又称为单克隆免疫球蛋白，是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。 参考值：蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性 临床意义：检测到M蛋白提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、轻链病、半分子病等,g,b,2,白蛋白,1,: 血清类黏蛋白, 1 抗胰蛋白酶,: 结合珠蛋白, 2 巨球蛋白, 脂蛋白,: 转铁蛋白, 血液结合素, C3补体, b 脂蛋白,: 免疫球蛋白,IgA IgM IgG,正常人,IgG型浆细胞骨髓瘤,原发性巨球蛋白血症,多克隆丙种球蛋白血症,低丙种球蛋白血症,免疫固定电泳图谱示例（IgA-型M蛋白） 、G、A、M分别代表覆盖含抗，抗，抗IgG，抗IgA和抗IgM的抗血清；箭头所指为加样处,Ig M k 型单克隆抗体带,Lambda型自由轻链单克隆抗体,多发性骨髓瘤,注意： 有些轻链病或重链病的M蛋白峰并不明显，富含类风湿因子的血清、溶血标本有些却可以出现类似M蛋白峰的电泳区带，所以要结合其他检测进一步分析判断。,血清补体检测,2,肿瘤标志物检测,3,中国有13亿人口，估计全国每年约有130 万人死于恶性肿瘤。目前，恶性肿瘤是中国人 民的第二大主要死因。 中国医学科学院肿瘤研究所 肿瘤流行病学研究室 癌症的早期发现、早期诊断及早期治疗是 降低死亡率及提高生存率的主要策略之一 。 目前我国就诊患者中，早期病例不足10% 。 中国癌症预防与控制规划纲要 （2004-2010）起草说明,蛋白质肿瘤标志物 甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原(CEA)、组织多肽抗原(TPA)、前列腺特异抗原(PSA)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC) 糖脂肿瘤标志物 癌抗原-50(CA-50)、癌抗原72-4(CA72-4)、糖链抗原19-9(CA19-9)、癌抗原125(CA125)、癌抗原242(CA242)、癌抗原15-3(CA15-3) 酶类肿瘤标志物 前列腺酸性磷酸酶(PAP)、神经元特异性烯醇化酶、异常凝集酶原、-L-岩藻糖苷酶(AFU),特异性好,与肿瘤类型 (大小/分期) 有关,灵敏度高，对肿瘤能早期发现。,具有器官特异性,监测肿瘤治疗效果,监测肿瘤的复发,理想的肿瘤标志物,预测肿瘤的预后,甲胎蛋白的测定(-fetoprotein，AFP),AFP是胎儿发育早期合成的一种糖蛋白(1球蛋白)，分子量70kD，胎儿出生后不久即逐渐消失。 参考值：RIA、CLIA、ELISA: 血清AFP 25g/L,HCC患者血清中AFP明显增高，约77%的患者400ng/mL, 18%的患者无AFP升高。 病毒性肝炎、肝硬化患者有不同程度的升高，但常 100ug/mL。 肝胆管癌时，AFP多正常,应用：1 、对高危人群（慢性肝炎或者肝硬化） 进行普查发现及指导原发性肝癌的治疗 2、 用于生殖腺胚胎性肿瘤的诊断及监测 治疗如：睾丸癌、畸胎瘤,妇女妊娠3个月后AFP开始升高，78个月达到高峰（400ug/l)，胎儿出生后3周恢复正常。水平异常升高 提示胎儿有神经管畸形的可能。,AFP alpha-fetoprotein,癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA）,1965年CEA发现于成人结肠癌组织中，分子量约为200kD，可溶性糖蛋白，主要存在于成人癌组织以及胎儿的胃肠管组织中，故名癌胚抗原，是一种广谱肿瘤标志物。 参考值：血清CEA 5.0g/L,(CEA carcinoembryonic antigen),主要产生于胎儿的胚胎期 胃肠道 胎儿血清 出生后组织含量很低 成年人只微量发现于 肠道 胰腺 肝脏 在健康成人中很少升高,病理情况 胃肠道的恶性肿瘤会升高 结、直肠癌 一些良性疾病也会升高， 但很少会超出10ng/mL 肝炎、肝硬化、胰腺炎 结直肠息肉、结肠炎等,Non-smoking:2.5-5.0ng/ml Smoking :7-10ng/ml,前列腺特异性抗原 (PSA),参考值：血清 t-PSA 0.25,PSA是一种由前列腺上皮细胞分泌的蛋白酶。在血清中PSA 以两种生化形式存在： 一部分(5%40%)是以低分子量(33kD)的 游离PSA（f-PSA）形式存在； 大部分(60%90%)是以PSA和1抗糜蛋白酶、 2-巨球蛋白等结合的形式存在， 称复合PSA(c-PSA)。 总PSA（t-PSA）,包括血清中f-PSA和c-PSA。,血清PSA升高 前列腺癌患者升高，但大约25%患者，其PSA水平正常；而大约有50%的良性前列腺疾病患者PSA水平增高。为增加PSA对前列腺癌检测的敏感性和特异性，可使用PSA年龄特异性参考范围，PSA密度、PSA速率、f-PSA/t-PSA比值等； 前列腺肥大，前列腺炎和泌尿生殖系统的疾病，也可见血清PSA水平升高，故当PSA在4.0g/L10.0g/L的灰区时，须进行f-PSA和 f-PSA/t-PSA比值的测定。,存在假阳性率（高达30） 1、肛门指诊、膀胱镜、前列腺物理检查会PSA的异常分泌。因此应在上述检查前抽血化验。 2、骑单车后半小时内。 3、年龄因素：随着年龄的增长，如老年人前 列腺会发生增大，结果导致PSA的合成分泌 增多。（不同年龄段，参考范围不同） 4、性生活：在进行前列腺特异性抗原检查之 前，至少应该有两天的时间不能进行性生 活。,PSA prostatic acid phosphatase,糖链抗原15-3 ( CA 15-3),CA15-3是一种乳腺癌相关抗原，属糖蛋白，分子量超过400kD，可用一对单克隆抗体（MAb115D8和MAbDF3）进行双抗体夹心法来识别。与CA15-3同类的多态性上皮粘蛋白抗原还有MCA，CA27-29，CA549等。 参考值：血清CA15-328kU/L, 乳腺癌，但在乳腺癌的早期阳性率较低约为30%， 转移性乳腺癌阳性率可达80%； 其他恶性肿瘤，如肺癌，结肠癌，胰腺癌，卵巢癌， 子宫颈癌，原发性肝癌等，也有不同程度的阳性率； 肝脏，胃肠道，肺，乳腺，卵巢等非恶性肿瘤疾病， 阳性率一般低于10%。,（2）糖链抗原125 ( CA 125),CA125是很重要的卵巢癌相关抗原，1981年Bast发现。CA125是一种大分子多聚糖蛋白。 参考值 ：血清CA 125 35kU/L,卵巢癌的筛查和诊断 卵巢癌82%、卵巢良性病6%。 卵巢癌疗效观察的指标 卵巢癌预后的判定指标 若以每月增长速度25U/ml做 为上限值，则CA12-5诊断复发性卵巢癌的特异度就可 达100%。 子宫腺肌病的诊断 子宫腺肌病患者CA12-5水平显著高于正常妇女及子宫肌瘤者，其值是正常的10倍，阳性率达87.1%，有助于腺肌病和子宫肌瘤的鉴别诊断。,CA 125 卵巢癌相关抗原,上皮性卵巢癌的主要标记物,CA125与CA72-4联合检测，作为诊断原发性及复发性卵巢肿瘤的标志，特异性可达100%,NSE是烯醇化酶的一种同功酶，烯醇化酶同功酶根据，三个亚基的不同，可分为、和五种二聚体同功酶。 亚基组成的同功酶属神经元和神经内分泌细胞特有，故命名为神经元特异性烯醇化酶， NSE是一种酸性蛋白酶，参与糖酵解。肿癌组织糖酵解作用加强，细胞增殖周期加快，细胞内的NSE释放进入血液增多，导致此酶在血清内含量增高。,参考值：血清NSE15g/L,神经元特异性烯醇化酶（NSE）,良性疾病：良性肺病（5%12g/L） 脑部疾病：特别是在脑血管性脑膜炎、脑缺血和梗死、 头部外伤、脑部炎性疾病、急性感染性多发性神经炎 等患者的脑脊液中的NSE水平升高。 非恶性肿瘤患者的NSE水平升高，可12g/L， 尿毒症患者以及50%的怀有神经管缺陷胎儿的妇女NSE 也会升高。 标本：标本溶血，NSE升高。,NSE（神经特异性烯醇化酶）,监测神经内分泌肿瘤患者的疗效和病程，尤其适用于 小细胞肺癌和神经母细胞瘤。由于临床敏感度和特异 性问题，NSE检测不适用于临床筛选或辅助诊断。,一种肿瘤可分泌多种肿瘤标志物，而不同的肿瘤或同种肿瘤的不同组织类型可有相同的肿瘤标志物。因此，单独检测一 种肿瘤标志物，可能会因为测定方法的敏感性不够而出现假阴性，联合检测多种肿瘤标志物有利于提高检出的阳性率。为此，选择一些特异性较高，可以互补的肿瘤标志物联合测定，对提高肿瘤的检出率是有价值的。常用肿瘤标志物的联合使用。,肿瘤标志物的联合应用,不同脏器肿瘤标志物的首选及组合,病毒性肝炎标志物检测,4,肝炎病毒 HEPATITIS VIRUSES,HAV 甲型肝炎病毒 HBV 乙型肝炎病毒 HCV 丙型肝炎病毒 HDV 丁型肝炎病毒 HEV 戊型肝炎病毒 HFV 已型肝炎病毒 HGV 庚型肝炎病毒 TTV TT型肝炎病毒,甲型肝炎病毒标志物检测,Biological Properties picornavirus, +ssRNA genome 27 nm in diameter,non-enveloped icosahedral particle one serotype,Pathogenesis,spread via the fecal-oral route Source of infection: patient, inapparent infection Viral shedding in the stool precedes the onset of symptoms by 14d but stops before the cessation of symptoms Symptoms Initial symptoms: fever, fatigue, nausea, loss of appetite, abdominal pain Jaundice,免疫性 immunity,无论显性感染还是隐性感染 均能产生抗-HAV的 IgM和IgG抗体,抗-HAV的IgM在急性期和恢复早期出现 阳性可作为甲肝的确诊依据,抗-HAV的IgG在恢复后期出现 有保护作用，维持终身,Laboratory Diagnosis,甲型肝炎病毒抗原和RNA测定 ELISA和RIA法 HAVAg阳性 HAV-RNA阳性 甲型肝炎病毒抗体测定 ELISA法IgM和IgA均阴性，IgG阳性可见于感染后人群 IgM阳性是特异性早期诊断指标，提示HAV感染期；IgG阳性出现于恢复期且持久存在，是获得免疫力的标志，提示既往感染，可作为流行病学调查的指标,乙型肝炎病毒标志物检测,全球约有20亿人曾感染过乙肝 其中3.5亿人为慢性HBV感染者,几乎一半在中国,/mediacentre/factsheets/fs204/en,慢性乙肝全球流行分布图,china,肝癌,肝硬化,慢性肝炎,HBV携带者,中国乙肝病情发展情况,40%,20%,80%,14%,形态结构SHAPE AND STRUCTURE,There are 3 particles in patients blood Dane particle Dane颗粒（大球形颗粒） small spherical particle 小球形颗粒 tubulose particle管形颗粒,Dane particle,Complete particle, infective HBV spherical，double capsid球形,双层衣壳。 outer capsid=envelope 外衣壳=包膜(脂质双层+蛋白质) HBsAg等 inner capsid内衣壳： HBcAg、HBeAg internal内部： DNA- circular, double- stranded环状 双链 DNA polymerase 多聚酶,抗原组成Antigen of HBV,Antigen of outer capsid 外衣壳抗原 hepatitis B surface antigen HBsAg表面抗原 indicates that virus replication is occurring in the liver 说明病毒在肝中复制（机体受感染标志） four phenotypes：adr,adw,ayr,ayw antiHBs:neutralization antibody中和抗体,Antigens of inner capsid 内衣壳抗原 hepatitis B core antigen HBcAg核心抗原 not found in blood一般不能检出 antiHBc nonneutralization antibody非中和抗体 Core IgM indicates recent infection. 抗HBc IgM说明HBV复制 Core IgG indicates exposure to HBV,hepatitis B e antigen e抗原HBeAg the best correlate to the presence of infectious virus. 感染性病毒存在的最有效证据（复制及具传染性的标志） anti-HBe indicates low infectivity in a carrier 抗HBe说明病毒感染性较低（是预后良好的征象）,Pathogenesis and Immunity,source of infection传染源 patients or carriers 急性、慢性患者或无症状HBsAg携带者 route of transmission传播途径 sexual routes parenteral肠胃外的 routes injection of the virus into the blood stream contaminated blood and blood components by transfusion, needle sharing, acupuncture针灸, ear piercing, or tattooing perinatal围产期 routes contact with the mothers blood at birth and in mother milk,血清标志物 HBsAg、 抗HBs HBeAg、 抗HBe HBcAg、 抗HBc Pre-S2、 抗Pre-S2,Laboratory Diagnosis,乙肝“两对半”及临床意义 HBsAg、 抗HBs HBeAg、 抗HBe HBcAg、 抗HBc,乙肝表面抗原携带者,乙肝两对半常见结果模式及其意义,急性肝炎早期，传染性强,乙肝两对半常见结果模式及其意义,急性或慢性现症感染，传染性强。,“大三阳”,乙肝两对半常见结果模式及其意义,乙肝趋向恢复，属慢性携带，传染性弱,“小三阳”,乙肝两对半常见结果模式及其意义,急性感染或是慢性乙肝表面抗原携带，传染性弱,“小二阳”,乙肝两对半常见结果模式及其意义,急性乙肝恢复期或既往感染,乙肝两对半常见结果模式及其意义,乙肝疫苗接种后,乙肝两对半常见结果模式及其意义,未感染过HBV,乙肝两对半常见结果模式及其意义,乙肝两对半罕见结果模式及其意义,急性感染趋于恢复，血清学转换,不同亚型HBV二次感染；血清学转换,乙肝两对半罕见结果模式及其意义,急性感染趋向恢复,乙肝两对半罕见结果模式及其意义,基因突变；钩状效应；爆发性肝炎；抗原表达量低，检测不出,乙肝两对半罕见结果模式及其意义,丙型肝炎病毒标志物检测,生物学性状 Biological properties a member of the flavivirus 黄病毒属成员 4060nm,spherical球形 an enveloped virion有包膜 Genome: (+)ss RNA,Pathogenesis and Immunity,six genotypes基因型：、 transmitted by means similar to HBV 传播途径似HBV in infected blood （输血后肝炎） Intravenous drug abusers transfusion organ recipients hemophiliacs receiving factors or sexually,persistent, chronic hepatitis cirrhosis肝硬化 hepatocellular carcinoma肝癌 acute hepatitis 15% chronic persistent infection 70% severe rapid progression to cirrhosis 15 %,Laboratory diagnosis,HCV RNA测定 斑点杂交试验和RT-PCR法 临床意义 HCV-RNA阳性提示HCV复制活跃，传染性强；转阴提示HCV复制受抑，预后较好,HCV抗体IgG和IgM测定 ELISA法、RIA、CLIA法 临床意义 IgM主要用于早期诊断，持续阳性可作为慢性肝炎的指标，或提示病毒持续存在并有复制；IgG阳性表明已有HCV感染，但不能作为感染的早期指标。,感染免疫检测,5,病毒感染免疫检测,TORCH试验 是妇科产前的常规检查项目 包括：弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型和II型的病原抗体检测,风疹病毒检测,儿童是主要易感者 呼吸道传播 局部淋巴节增殖后经病毒血症散播全身 可垂直传播导致胎儿先天性感染 病后可获得终身免疫力 早孕发生胎儿先天性风疹感染，新生儿致畸致残率可达80% 主要损害五官神经系统和智力，有流行性,单纯疱疹病毒检测,单纯疱疹病毒（HSV）是一种DNA病毒 HSV属疱疹病毒亚科，单纯疱疹病毒属，可分为HSV-1和HSV-2两个亚型 HSV-1型主要引起生殖器以外的部位 感染-2型主要引起生殖器部位皮肤粘膜的感染,临床意义,HSV-1感染： 口咽部疱疹 疱疹性角膜结膜炎 皮肤感染（如疱疹性湿疹） 散发性脑炎,HSV-2感染： 生殖器疱疹 子宫颈癌,巨细胞病毒检测,巨细胞病毒（CMV）属于人类疱疹病毒，具双链DNA 多呈不显性感染或者潜伏感染 CMV围生期感染是引起胎儿畸形的主要原因之一，还可引起早产、胎儿宫内发育迟缓等 抗CMV测定，双份血清抗体水平呈4倍或4倍以上增长时，有诊断意义，特异性抗CMVIgM阳性为CMV近期感染的指标。 临床意义：产前诊断的指标；器官移植病人的筛查,弓形虫检测,弓形虫抗体测定 人畜共患性疾病 传染源：猫和其他宠物 症状： 轻型：无症状，血清中可检测到抗体 重型：高热，肌肉、关节疼痛，淋巴结肿大 孕妇急性弓形虫感染，弓形虫可通过胎盘感染胎儿 检测方法：IFT、ELISA检测IgM抗体 临床意义：产前诊断指标,性传播疾病病原体检测,6,艾滋病（AIDs）,世界感染人口：45，125，254 （2011/11/24/16:00）,:85/lecture/hiv-world.htm,在AIDS患者中念珠菌属感染是很常见的, 象鹅口疮（上图）尽管不危及生命但十分讨厌.播散性感染是少见的, 左图为念珠菌性肺炎，其类似于细菌性支气管肺炎.,卡氏肺囊虫在肺的外部产生隆起性钙化， 形状象粗糙的肾脏,1981 : 5名同性恋者患有卡氏肺囊虫肺炎，被报告到美国的疾病控制中心 1981 -同年的数月后，26例罕见的卡波济氏肉瘤又在同性恋人群中发现 年轻人 旧金山和纽约 均为同性恋者,HIV模型图,脂双层膜,gp120,gp41,包膜糖蛋白,p24衣壳蛋白,p14内膜蛋白,P7、9核心衣壳蛋白,逆转录酶,蛋白酶,整合酶,RNA,传染源：AIDS患者或HIV无症状携带者,传播途径：三大途径 1、性行为：同性或异性 通过口腔、肛门、阴道等方式性交或其他体液接触时，均 有受感染的可能 2、血液感染： 输入或接触被爱滋病毒污染的血液、血液制剂 与感染爱滋病毒的静脉药隐者共同使用注射器 接受爱滋病毒感染者的器官移植、人工受精等 3、垂直感染： 由其已感染病毒的母亲经胎盘、产道或哺乳而将病毒传给 胎儿或婴儿,流行病学 人类免疫缺陷病毒大多侵犯20-49岁的人群 HIV感染有潜伏与激发到持续感染的过程 最终导致免疫损害、机会感染以及肿瘤的发生,空窗期与潜