强直性脊柱炎的实验室检测及其意义 课件

强直性脊柱炎的实验室检测及其意义,内容提要：,强直性脊柱炎 特点及其与B27关系 什么是HLA及HLA-B27 MHC、HLA、亚型、关联、RR HLA-B27与哪些疾病相关 HLA-B27 怎么检测 MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP,2,强直性脊柱炎(AS) 是一种慢性、进行性，中轴关节受累 的关节病变，其中以骶髂关节和脊柱关节受累为主要临床表现。该病早期进展较慢，但后期发展较快，很短时间内形成 驼背畸形，髋、膝等关节强直，故早期诊断显得尤为重要。,强直性脊柱炎的流行病学,患病率 我国0.3% 高！ （RA 0.36%） 发病年龄 40岁以前发病 高峰20-30 岁 男女比例 10:1,强直性脊柱炎相关检测：HLA-B27,Ankylosing Spondylitis，AS 患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向； 主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织） 可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直 B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！ AS不是RA的一种特殊类型！,5,AS与HLA-B27,6,健康人群HLA-B27阳性率及AS患病率各地区、种族有显著的差异 HLAB27与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性 两种错误认识：HLA-B27阳性AS！ HLA-B27阳性不会转阴！,AS与HLA-B27的关联机制,连锁不平衡学说 分子模拟学说 关节源性肽假说 其他： T细胞受体库假说 超抗原假说 B27修饰因子假说 Cys67模型,7,HLA相关概念,主要组织相容性抗原 主要组织相容性复合体（ MHC 类)：H-2 SLA HLA MHC、HLA复合体基因 MHC分子、HLA分子抗原 HLA：人类白细胞抗原（ Human Leukocyte Antigen）,8,HLA相关概念,9,HLA-B27相关疾病,10,HLA-B27检测方法及评价,抗原水平 微量细胞毒法 84% ELISA 85% IMS-ELISA 88% 流式细胞术法 93% 基因水平 PCR-SSP 96%,11,微量细胞毒法（microlymphocytotoxic test，MLCT）,原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗原及其与抗体的反应强度。 优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。 缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。,12,J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189,ELISA,原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待检标本）、生物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反应，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HLA-B27呈正相关。 其结果与MLCT法符合率为99，且不受感染因素的影响，重复性好。,13,瞿良等实用医学杂志，2005,19(21):2190-2191,磁珠酶联免疫分析（IMS-ELISA）,磁珠分离与ELISA结合 B27单抗标记磁珠 HRP标记CD45单抗 通过磁场分离游离相 优点： 反应时间短（1小时完成） 对标本新鲜度要求不高 28静置4 d之内可用,14,杨雅琼等现代检验医学杂志，2002,17(2):60-62,流式细胞术法,利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比，从而判断HLA-B27是否阳性。 优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，操作简单，自动化程度高；灵敏度可达100%，特异性达97.4%；结果稳定，样本之间，不同仪器之间，不同实验室之间可重复性高。结果判断准确，为目前较为理想的方法，国外已将FCM法检测HLA-B27作为AS 诊断的常规检测方法。 缺点：仪器昂贵，目前只在较大医院应用，且荧光易淬灭。,15,PCR-SSP,通过设计基因序列特异的引物SSP，特异性的扩增出标本中的HLA-B27基因片段，以琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物，若出现目的条带则表示HLA-B27为阳性。