免疫实验设计课件

,注射用重组人白细胞介素-11 治疗化疗所致血小板减少症,报告人：黄亚华 成 员：郭美良 郭书琰 黄亚华 贾晓婷,大纲,1.立题依据 1.1化疗致血小板减少症 1.2血小板简介 2.研究背景 3.实验目的 4.实验内容 5.预期实验结果,化疗致血小板减少症,化疗是恶性肿瘤综合 治疗的重要手段之一。 化疗药物无选择性杀伤作用，使正常骨髓造血干细胞或骨髓造血微环境受到损伤，抑制骨髓造血，外周血象尤其是中性粒细胞和血小板减少，严重者可导致感染或出血。患者常因此被迫减少剂量或缩短疗程，甚至终止化疗。,血小板的生物学作用,1、收缩血管，有助于暂时止血 2、形成止血栓，堵塞血管破裂口 3、血小板的凝血作用 4、释放抗纤溶因子， 抑制纤溶系统的活动 5、营养和支持毛细血管内皮 6、促进血液循环,血小板计数的正常值为100300109/L。 当血小板计数50109/L时，轻度损伤可引起皮肤粘膜紫癜，手术后可以出血； 当血小板计数20109/L时，常有自发性出血。 一般认为，当血小板计数20109/L时，需要预防性输入血小板。,目前，血小板输注是治疗严重的血小板减少症（20109/L)的标准方法。 对于不明显的血小板减少症临床上应用注射用重组人白细胞介素-11进行治疗。,2019/5/19,研究背景,白细胞介素是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。由于最初是由白细胞产生又在白细胞间发挥作用，所以由此得名，现仍一直沿用。最初是指由白细胞产生又在白细胞间起调节作用的细胞因子。 1979年第二届国际淋巴因子专题会议将免疫应答过程中白细胞间相互作用的细胞因子统一命名为白细胞介素（interleukin，IL） 。在名称后加阿拉伯数字编号以示区别，例如IL-1、IL-2，新确定的因子依次命名。只有取行克隆化的基因、明确产物的性质和活性才能得到国际会议的认可。 白细胞介素是非常重要的细胞因子家族，截至2013年，得到承认的成员已达29个。,1990年Paul等从灵长类骨髓的基质细胞系PU-34 培养基中发现一种能维持小鼠浆细胞瘤细胞株生长的新的细胞因子，该因子被命名为白细胞介素-11。Paul 等以PU-34在哺乳细胞中功能性表达克隆分离出灵长类IL-11cDNA，以此为探针进一步从人肺成纤维细胞系MRCS中分离出人IL-11cDNA。,人IL-11基因定位于19号染色体长臂13区，含有5个外显子和4个内含子，长约7kb。成熟的人IL-11蛋白由178个氨基酸组成。IL-11由骨髓基质细胞产生，分子量约为23KD,2019/5/19,白细胞介素-11（IL-11）,中文名：白细胞介素-11； 外文名：Interleukin-11;IL-11 是一种多机能细胞因子，广泛存在于人体骨髓、神经、呼吸道及消化道上皮等多种组织，刺激骨髓中巨核细胞的形成和发育，目前，美国的Genetic Institute，Inc（GI）所生产的重组人IL-11已于1997年经FDA批准正式上市，我国开发的重组人IL-11也进入临床研究。,IL-11的作用,对造血系统的作用： 协同SCF等促进骨髓集落形成； 协同IL-3等促进巨核细胞的形成和成熟，促进血小板生成； 促进红细胞形成； 协同IL-3、SCF等促进原始多潜能细胞的增值； 刺激浆细胞增殖及T细胞依赖的B细胞发育； 调节肝细胞血浆蛋白基因的表达； 诱导急性期蛋白生成；对造血微环境影响较大。 对非造血系统的作用： 参与上皮细胞的生理调控，对粘膜损害保护作用的机理可能是通过上皮细胞和接地组织起作用； 协同PTH等促进破骨细胞形成； 参与神经组织的调节。,注射用重组人白细胞介素-11,注射用重组人白细胞介素-11是应用基因重组技术生产的一种促血小板生长因子，可直接刺激造血干细胞和巨核祖细胞的增殖，诱导巨核细胞的成熟分化，增加体内血小板的生成，从而提高血液血小板计数，而血小板功能无明显改变。 临床前研究表明，体内应用本品后发育成熟的巨核细胞在超微结构上完全正常，生成的血小板的形态、功能和寿命也均正常。,实验目的,验证注射用重组人白细胞介素-11有效防治化疗所致的血小板减少，使血小板下降程度减轻。,实验内容,1.获取实验动物：验血，取血小板数量在正常范围内的小白鼠16只，每组8只分成两组，即实验组和对照组，记录各小鼠血小板数。 2.培养两组动物：用大剂量异环磷酰胺化疗处理两组小鼠后取血化验，致血小板减少到同等水平，记录各小鼠血小板数，并观察两组小鼠皮肤有无变化，鼻腔、牙龈有无出血。 3.连续一周在相同时间下分别向两组小鼠注射药品：实验组：皮下注射1ml重组人IL-11；对照组：注射等量生理盐水。 4.注射药品后将两组小鼠置于相同安静环境中。 5.注射后于1h、3h、5h分别取两组小鼠血进行化验，观察两组小鼠血小板数量并记录。 6.将上述所测小鼠血小板数分别与其正常值和化疗后的血小板数作对比，观察其数量变化，并观察两组小鼠皮肤有无变化，鼻腔、牙龈有无出血。,预期结果,1.化疗后两组小鼠血检血小板数均减少，皮肤出现青紫斑点或斑块，形状不一，牙龈、鼻腔出血。 2.（1）对照组小鼠化疗后减少的血小板数量无明显变化。皮肤青紫斑点