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一、基因工程 1限制性内切酶使双链DNA特定部位的磷酸二脂键断开，解旋酶使双链DNA的氢键断开。 2DNA连接酶与DNA聚合酶都能催化形成磷酸二酯键，前者催化连接DNA片段，后者催化单个的脱氧核苷酸聚合形成DNA。RNA聚合酶催化单个的核糖核苷酸聚合，形成RNA。 3基因组文库包含了某种生物全部基因，cDNA文库只包含某种生物的部分基因。 4启动子位于基因的首端，它驱动基因转录出mRNA，起始密码子位于mRNA的首端，它驱动mRNA翻译成多肽链。,5将目的基因导入植物细胞常用土壤农杆菌转化法，常导入植物体细胞，经组织培养后形成转基因植株；导入动物细胞常用显微注射法，常导入受精卵，经胚胎移植获得转基因动物；利用基因工程生产药物时，常将基因导入微生物，导入大肠杆菌常用Ca2处理成感受态细胞再进行转化。 6检测是否导入目的基因及目的基因是否转录出mRNA常用DNA分子杂交法，检测目的基因是否表达出蛋白质常用分子杂交法，有时基因工程还需要进行个体生物学水平鉴定。 7DNA复制用解旋酶打开氢键获得模板链，PCR利用高温使氢键断裂得到模板链。 8基因工程通过转基因获得异种生物的蛋白质，蛋白质工程通过基因修饰或基因合成，对蛋白质进行改造或制造出自然界没有的蛋白质。,12008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光。借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。 GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，如图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程： 请根据上述材料回答下列问题：,请根据上述材料回答下列问题： (1)用于培育绿色荧光小鼠的基因表达载体的组成必须有启动子、_、_和_等。图中过程常用的方法是_；过程利用的生物技术是_；在进行过程前，利用_可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。 (2)GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能，且对细胞无毒性，因此GFP基因可以作为基因表达载体上的_。 (3)目前科学家们通过_工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，该工程是直接改造GFP分子，还是改造GFP基因？_。该工程的基本流程是_。,解析：基因表达载体由4部分组成，分别是目的基因、启动子、终止子、标记基因。把目的基因导入动物受体细胞的常用方法是显微注射技术。由受精卵培养得到早期胚胎，这属于细胞培养技术，可以利用胚胎分割技术由一个胚胎获得多个胚胎。GFP基因不影响目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能，且对细胞无毒性，又可以发出荧光，因此可以作为标记基因。蛋白质工程是指通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，获得各种各样的自然界中没有的蛋白质。蛋白质工程的基本流程：预期蛋白质功能设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应基因的脱氧核苷酸序列修饰(合成)相应的基因表达出相应蛋白质。 答案：(1)GFP基因 终止子 标记基因 显微注射法 早期胚胎培养技术(细胞培养技术) 胚胎分割 (2)标记基因 (3)蛋白质 GFP基因(绿色荧光蛋白基因) 预期蛋白质功能设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应基因的脱氧核苷酸序列修饰(合成)相应的基因表达出相应蛋白质,二、细胞工程与胚胎工程中的几个问题 1单克隆抗体制备中的两次筛选 (1)第一次筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合的细胞、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。 (2)第二次筛选是将能产生特定抗体的B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从体内取免疫过的B淋巴细胞有很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。,2与胚胎移植有关的几条规律 (1)该过程中两次使用促性腺激素，第一次对受、供体进行同期发情处理；第二次用于供体的超数排卵。 (2)该过程中的两次检查：第一次对收集的胚胎进行检查；第二次对受体母牛是否妊娠进行检查。 (3)产下的犊牛性状取决于所用公牛和供体牛，性别取决于公牛提供何种类型的精子，二者与受体牛没有关系。 (4)冲卵的含义是从子宫中冲出胚胎，而非冲出卵子。,3如何区分试管动物与克隆动物,4.分析克隆动物与供核亲本是否是100%的复制 克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。所以，用教材中所述的方法克隆的动物不是对供核动物完全相同的复制。此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，克隆动物生活的环境与供核动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和供核体动物完全相同。另外，在个体发育过程中有可能发生基因突变，产生供体动物没有的性状。基于上述三个方面的原因，克隆动物不会是供体动物100%的复制。,5生物工程技术应用的组合 (1)转基因植物培育：基因工程植物组织培养； (2)转基因动物培育：基因工程动物细胞培养胚胎移植； (3)核移植(克隆)动物培育：核移植动物细胞培养胚胎移植； (4)胚胎移植：有性生殖动物细胞培养胚胎移植； (5)植物体细胞杂交：酶工程体细胞融合植物组织培养； (6)试管婴儿：体外受精动物细胞培养胚胎移植。,2(2012年宁波模拟)为大力发展我国奶牛养殖业，科学家们对育种途径进行了大胆探索，如图甲为相关构思过程。运用细胞培养技术可以从哺乳动物的早期胚胎中获得胚胎干细胞(ES细胞)，如图乙。,(1)图甲过程中所涉及的现代生物技术有_、_和_等。 (2)目前使用的供体细胞一般都选择传代10代以内的细胞，原因是_。 (3)在供体细胞核与受体卵母细胞结合之前，先要去掉受体卵母细胞的核的原因是：_。 (4)在图乙所示的培养过程中，必须用_处理内细胞团，使之分散成单个细胞。 (5)体外培养胚胎干细胞能否获得动物器官？_。 为什么？_。,解析：由于传代10代以内的细胞的遗传物质未发生改变，因此可以作为供体细胞；在细胞重组之前，首先要把受体细胞的核去掉，保证重组细胞的遗传物质绝大部分来自于供体细胞；动物细胞在培养过程中，由于存在接触性抑制现象，因此需要用胰蛋白酶处理，使之分散成单个细胞；细胞体外培养的结果，只能使细胞的数量增加，而不是使细胞进行分化形成各种组织和器官。 答案：(1)核移植技术 动物细胞培养 胚胎移植 (2)传代10代以内的细胞的遗传物质未发生改变 (3)使所得犊牛的遗传物质基本上全部来自优质供体奶牛 (4)胰蛋白酶 (5)不能 胚胎干细胞在体外培养条件下只可以增殖而不发生分化,细胞工程与胚胎工程 (一)细胞工程的有关问题 1动物细胞培养需使用液体培养基，培养基中需添加动物血清等，植物组织培养常使用固体培养基，培养基中需加矿质元素、植物激素等。 2动物细胞培养过程需使用胰蛋白酶将相关的组织处理成游离的动物细胞，植物体细胞杂交需使用纤维素酶和果胶酶去壁得到原生质 体。 3植物体细胞杂交包括诱导融合得到杂种细胞和将杂种细胞进行组织培养得到杂种植株。 4两个二倍体植株的体细胞杂交得到的杂种植株染色体倍数为四倍体。,5植物体细胞杂交克服了远缘杂交不亲和的障碍，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围。 6杂交育种的基本原理是基因重组，植物体细胞杂交的原理是原生质体融合和组织培养。 7动物细胞融合特有的诱导方式为灭活的病毒处理，其他物理、化学诱导融合的手段与植物体细胞杂交过程中原生质体融合方法相 同。 8制备单克隆抗体过程中有两次筛选，第一次是筛选出杂交瘤细胞，第二次是用相应抗原检测的办法筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。 9核移植技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。核移植技术获得的动物与供核动物性状不一定完全相同。,(二)胚胎移植的有关问题 1胚胎移植中“供体”与“受体”的确定：提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎移植的个体称为“受体”；供体为优良品种，作为受体的雌性动物一般为常见或存量大的品种。 2胚胎移植的实质：胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转换，而胚胎本身的遗传物质并不发生改变，因此各种性状均能保持其原来的优良特性。其遗传信息与受体动物无关。 3胚胎移植的优势：可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，缩短供体本身的繁殖周期。 4胚胎移植时间：不同动物其胚胎移植的时间不同。牛、羊要培养到桑椹胚或囊胚阶段；小鼠、家兔在桑椹胚前；人胚胎可在4个细胞阶段移植。几乎所有动物都不能到原肠胚阶段移植，因为此时分化程度高，移植成功率很低。,如图为纯种荷斯坦小奶牛的繁殖过程，请据图回答下列问题：,(1)克隆动物培养过程与图示繁殖过程相比特有的技术手段是_技术，这两种繁殖动物的方式相比，实质性的区别为前者是_，后者是_。 (2)一般用_激素对供体母牛做超数排卵处理，用_激素处理受体牛以便接受胚胎。 (3)受精卵体外培养所需的培养液成分一般比较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及_等物质。 (4)如果培养转基因荷斯坦奶牛，可采用_技术将药用蛋白基因导入到_中，在检测受体细胞中的染色体DNA上是否插入了目的基因时，常采用的方法是_技术，根据是否显示出杂交带进行鉴定。,(5)上述技术应用于人类所得到的婴儿通常叫_，在生育方面有什么积极意义？但在传统伦理道德观念上又有什么争论？_。 (6)“试管婴儿”技术诞生后，继而出现了“设计试管婴儿”技术，二者在对人类作用上的区别是_， 在技术手段上的区别是_。 现在大多数人反对设计婴儿性别，其原因是_。,解析：动物克隆的技术手段主要是核移植，而图示技术手段为体外受精(其实质是有性生殖)。为使图示技术流程顺利完成，一般用促性腺激素处理供体牛使其超数排卵，用孕激素处理受体牛使其易接受胚胎并利于胚胎着床。与试管婴儿相比，设计试管婴儿在操作技术上的特点是胚胎在移植前，需进行遗传学诊断。有些人认为那些配型不合适的胚胎被丢弃或杀死，及滥用设计试管婴儿技术如设计婴儿性