《紫外光谱的应用》PPT课件.ppt

紫外光谱的应用,内容提要,在乳腺疾病方面的应用,快速测定金银花提取物中5种有机酸含量,测定混合糖含量,乳腺患者血清的光谱分析,人血清的紫外吸收谱约在230nm附近有一极的吸收峰，在2 7 9 n m有一较强的吸收峰, 该吸收峰为蛋白质芳香族氨基酸的特征，在253 n m 有吸收谷。分析表明, 不同乳腺疾病患者血清的紫外吸收谱有差异。 血清紫外吸收谱的279nm 吸收峰位及I279/I253 的差异, 反映了样品中芳香族氨基酸的成分及含量的差异；有无414nm 吸收峰的差异主要反映了样品是否有溶血发生。这些光谱差异对于乳腺疾病光谱诊断的研究具有参考价值，为应用光谱技术进行血清检测，诊断疾病寻求简便的方法和途径。,光谱测试结果,正常人和乳腺癌症例血清样品的吸收谱,图为测量的正常人和乳腺癌病例血清样品的吸收谱。 测量了乳腺疾病病例和正常人共40 例的血清紫外吸收谱,结果分析,癌症病例血清的吸收谱大部分在414nm 处还有一较小的吸收峰，而增生病例只有部分在414 n m 处有吸收峰，而且强度比癌症病例弱正常人血清吸收谱在41 4 n m 处均未见到吸收峰。有资料表明414nm处的吸收峰是红细胞的贡献。,谱线A 为正常人血清的吸收光谱, 谱线B 为在样品池中加人蒸馏水和微量红细胞所测量的吸收光谱。可以看出谱线B 在414nm 处的吸收峰比谱线A明显增强, 而谱线B 在279nm 处的吸收峰表现很弱, 这可能是红细胞携带少量血清。,血清与红细胞的吸收光谱,结果分析,快速测定金银花提取物中5种有机酸含量,在含金银花的中药复方制剂生产中,如痰热清注射液!热毒宁注射液等,通常以金银花提取物作为原料药,其主要成分为绿原酸!异绿原酸等有机酸“因此有机酸含量的快速测定对于金银花提取物和制剂的质量控制具有重要意义 鉴于有机酸紫外吸收明显,且紫外光谱灵敏度高,特征性好,因此以金银花提取物为研究对象,建立了5种有机酸的紫外光谱定量分析模型,可实现对金银花提取物的快速分析,紫外光谱采集,光谱采集条件:T6紫外分光光度计，波长采集范围:220400nm;光谱扫描 间隔:0.4nm;以50%甲醇溶液为参比进行基线校正;吸取制备好的样品溶 液125mL于25mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，取适量于光程1 cm的石英比色皿中扫描紫外吸收光谱。样品的紫外吸收光谱见图,波段的选择,在T6紫外分光光度计上分别扫描5种有机酸标准品溶液在220400nm范围内的紫外吸收光谱，见左图可以发现，5种有机酸的紫外吸收光谱较为相似，在330nm附近均具有最大吸收，这使得在金银花提取物溶液的紫外光谱中，5种有机酸的吸收光谱重叠比较严重，难以找出每种有机酸的特征吸收波段，因此选用全波段进行建模。,a. 3. 5一二咖啡酞奎宁酸；b.4.5一二咖啡酞奎宁酸；c.咖啡酸；d. 3. 4-二咖啡酞奎宁酸；e.绿原酸,用紫外光谱测定混合糖含量的新方法,提出一种用紫外光谱测定样品中混合糖含量的方法。其原理是基于样品中的糖经浓硫酸处理后生成有紫外吸收的糠醛和轻甲基糠醛，进行紫外波长吸收测定；通过化学训一量学软件，根据一组已知糖浓度标准样品的多波长光谱和所对应组成浓度之间的数学关系，建立校正模型。将未知样品的紫外光谱信息输入校正模型即可预测其组成中糖的含量本方法无需使用有机试剂，操作简便，可以测定样品中戊糖、己糖和总糖的含量，适合于木质生物质炼制研究中溶解性糖类组分的分析。,实验方法与步骤,1.标准溶液的配制 一组共14个已知(随机)浓度的木糖和葡萄糖混合糖的水溶液。其中木糖浓度变化范围为。00. 057 mol /L-1;葡萄糖的浓度变化范围为.00. 057 mol /L-1;总糖含量变化范围为0. 0115 0. 057 mol /L-1 。 2.糖的浓硫酸脱水处理 用移液管分别准确移取1 ml糖标准溶液加入不同的30 ml试管中。再用移液管向每个试管准确加入5 ml浓硫酸，摇匀后静置10 min，放入25水浴恒温20 min，使糖存浓硫酸作用下脱水反应完全,3浓硫酸处理后糖溶液的紫外光谱测定 用1cm的石英比色皿，分别测定上述浓硫酸处理后糖溶液的紫外光谱，扫描范围为190 400 nm，记录全部吸光度值。 4方法的校正 将上述测定的光谱值以及所对应的木糖和总糖含量的数据输入化学计量学软件 (SMICA)程序中，选择偏最小二乘法进行多变量回归，得到方法的校正模型。 5未知样品的测定 对未知样品进行浓硫酸处理后做紫外光谱扫描，将该吸光度值输入SMICA软件程序，用4得到的校正模型即可预测该未知样品中糖的含量。,糠醛和羟甲基糠醛的紫外光谱,戊糖和己糖经浓硫酸脱水后产物(糠醛及羟甲基糠醛)的紫外吸收光谱如图1所示。糠醛和羟甲基糠醛在该介质中,分别在316 nm和322 nm波长处有最大吸收峰。对于混合糖样品的紫外光谱,其最大吸收峰值的出现介于这两个波长之间。因此,根据糠醛以及羟甲基糠醛所产生的紫外光谱,可以实现间接测定样品中戊糖和己糖含量。,糠醛和羟甲基糠醛在浓硫酸溶液中的紫外吸收