不明原因肺炎病例的实验室诊断.ppt

1,不明原因肺炎病例的实验室诊断,广州市第八人民医院检验科 卢业成,2,主 要 内 容,不明原因肺炎的病原学 实验室生物安全 标本的采集、包装、运送及保存 不明原因肺炎的实验室检测 注意事项,3,一、不明原因肺炎的病原学,肺炎,细菌性肺炎： 肺炎链球菌、 克雷伯菌、 葡萄球菌、 ,Atypical pneumonias 支原体肺炎 衣原体肺炎 军团菌肺炎 ,非感染性肺炎： 过敏性肺炎、肺血管炎、 急性间质性肺炎,有流感症状的疾病： 普通感冒、流感、 艾滋病、免疫抑制合并 肺部感染,其他传染性肺炎： 炭疽、肺鼠疫,不明原因肺炎,SARS,高致病性人禽流感,4,SARS的病原学,SARS-CoV属冠状病毒科冠状病毒属的有包膜病毒。 病毒基因组为单股正链RNA，30,000个核苷酸组成；与经典冠状病毒仅有约60%同源性，但其组织形式与其他冠状病毒相似。 双层脂膜，外膜蛋白包括糖蛋白S、M和小衣壳E蛋白。M糖蛋白仅有短的氨基末端结构域暴露于包膜外面；长而弯曲的羧基末端与单一分子的基因组RNA及多分子的碱性N蛋白组成螺旋状核衣壳结构。,5,SARS-CoV的生物学特性：,室温下在尿液里至少可存活10天，在腹泻患者的痰液和粪便里能存活5天以上，在血液中可存活约15天，在塑料/玻璃/马赛克/金属/布料/复印纸等物体表面可存活23天。 病毒对温度敏感，随温度升高抵抗力下降，37可存活4天，56加热90min、75加热30min能够灭活病毒。紫外线照射60min可杀死病毒。 病毒对有机溶剂敏感，乙醚4 条件下作用24小时可完全灭活病毒，75%乙醇作用5分钟可使病毒失去活力，含氯的消毒剂作用5分钟可以灭活病毒。,6,*属正粘病毒科甲型流感病毒属。呈多形性，有囊膜。 *病毒基因组为分节段单股负链RNA。 *能感染人的亚型有H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3等，其中感染H5N1的患者病情重，病死率高。,禽流感病毒结构示意图,7,禽流感病毒的生物学特性：,对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂敏感。常用消毒剂易将其灭活，如氧化剂、稀酸、卤素化合物（漂白粉和碘剂）等能迅速破坏其活性。 对热比较敏感，但对低温抵抗力较强，65 30min或煮沸2min可灭活。在较低温粪便中可存活1周，在4水中可存活1个月，对酸性环境有一定抵抗力，在pH4.0也具有一定存活能力。在有甘油存在的情况下可保持活力1年以上。 裸露的病毒在直射阳光下4048h即可灭活，如果用紫外线直接照射，可迅速破坏其活性。,8,不明原因肺炎检测实验室的设置,按传染性非典型肺炎实验室检测工作程序及的要求建立国家、省和地（市）级临床标本三级实验室检测网络体系。 卫生部在中国CDC病毒病预防控制所(国家流感中心)和传染病预防控制所设立国家级检测实验室。 广东省卫生厅确认省CDC（流感实验室）为我省中心实验室，广州市CDC为平行中心实验室。 并建立覆盖全省的初筛实验室。,9,二、实验室生物安全,为加强对传染性非典型肺炎实验室的管理工作，避免发生实验室内感染和对环境的污染，避免由于实验室操作不当造成SARS的传播，保障实验室人员的安全和健康，卫生部办公厅于2003年6月16日印发传染性非典型肺炎实验室生物安全操作规范。所有参与SARS防治和研究的实验室和实验室工作人员都必须遵守。同时废止2003年4月29日印发的传染性非典型肺炎实验室生物安全操作指南。,10,二、实验室生物安全,按照传染性非典型肺炎实验室生物安全操作规范的要求所有实验室人员应采取规范的生物安全防护，并经过相应的专业技术培训。 凡操作活病毒的试验必须在生物安全III级（BSL-3）或以上级的实验室中进行。 其余的临床试验可在生物安全II级+（BSL-2+）实验室或全排式生物安全柜中进行。 从事患者样品常规检验应使用专用实验室和仪器。,11,二、实验室生物安全,下列操作必须在生物安全3级(BSL3)或以上级实验室中进行： 用细胞培养的方法分离病毒； 收集或浓缩病毒或其培养产物； 用活病毒或病毒的全基因接种动物。,12,二、实验室生物安全,下列操作必须在生物安全2级(BSL2)或以上级实验室，或全排式生物安全柜中进行： 咽拭子/含漱液/痰液/尿/粪便/血清和血液等样品的诊断检测； 溶解、固定或用其他方法处理灭活的病毒和(或)无传染性的病毒基因片段； 常规的细菌和毒素检查； 可能产生气溶胶的样品处理； 临床样品的包装、分装； 离心管和离心机转头的封闭和开启。,13,二、实验室生物安全,实施上述操作的人员应具备如下防护措施： 佩带N95级口罩，调整口罩的鼻金属夹，保证呼吸气体确经口罩过滤； 佩带可以遮盖脸部的防护面罩或防护眼罩； 佩带外科手术帽，并遮盖住双侧耳部； 佩带2层外科手术乳胶手套。每完成一次可能接触含有病原的样品的操作后，应更换外层手套，再进行下一步操作； 在普通实验白大衣外再穿着外科手术衣或连体隔离服(最好为防水材料)，双上肢佩带袖套，并用乳胶手套袖端将袖口覆盖、绷紧。 双下肢穿着裤套，双脚穿鞋套，并用鞋套上部橡皮筋将裤套下段绷紧。,14,二、实验室生物安全,操作场地的消毒及污染物的处理： 实验完毕后，应将所有可用高压消毒的用品和样品在实验室内进行高压消毒，不可用高压消毒的物品应用70乙醇消毒，实验室台面和污染的设备表面应用对脂包膜病毒有效的消毒剂消毒。实验室应用紫外线灯消毒。,15,二、实验室生物安全,按照传染性非典型肺炎实验室生物安全操作规范的要求: 从事SARS患者样品临床常规检验的实验室亦应具备生物安全2级(BSL2)或以上实验室条件，具有专用的检验室，使用专用仪器设备，如血球计数仪、血气分析仪、血液生化分析仪等。,16,三、标本的采集、包装、运送及保存,1、采集对象 疑似病例，临床诊断，确诊病例。 密切接触者，一周内出现流感样症状者。 不明原因肺炎住院患者。 其他根据需要采集的对象：可能暴露于SARS/禽流感病毒或潜在感染性材料的人员中出现的不明原因肺炎病例（如从事SARS/禽流感科研、检测、试剂和疫苗生产等相关工作人员）。,17,三、标本的采集、包装、运送及保存,2、标本采集人员 按照全国不明原因肺炎病例监测实施方案（试行）的规定： 经过培训的医疗机构医生、护士或疾控机构的专业人员负责标本的采集，并填写标本登记表。 采集标本时应按照有关规范做好个人安全防护。,18,三、标本的采集、包装、运送及保存,3、标本的种类及采集时机（之一） 上呼吸道标本：鼻拭子(或咽拭子)、含漱液； 下呼吸道标本：鼻咽或气管抽取液、支气管/肺泡灌洗液和肺组织活检标本； 血液标本：血清和EDTA抗凝全血； 粪便/尿液标本； 尸检标本：主要是肺和气管，应多部位取材。,19,三、标本的采集、包装、运送及保存,3、标本的种类及采集时机（之二） SARS预警病例的采样： 至少采集鼻咽拭子（含漱液）、粪便（肛拭）和血清； 急性期应尽早采集（发病后7天内）；恢复期在发病后24周时（发病20天后）采集； 每隔3天采集一次标本进行病毒核酸和血清抗体检测；病程两周后,可每隔5天采样一次。,20,三、标本的采集、包装、运送及保存,3、标本的种类及采集时机（之三） 人禽流感预警病例的采样： 采集患者发病后13天的咽、鼻拭子或含漱液，发病后7天内的急性期血清以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物，进行病毒分离、病毒核酸和血清抗体的检测。 采集患者发病后24周的血清标本。,21,三、标本的采集、包装、运送及保存,4、标本采集的方法（之一） 参见广东省传染性非典型肺炎实验室检测工作指引（试行）、人禽流感样品采集、运输和检测技术规范（试行）或国标流行性感冒诊断标准及处理原则。 病毒分离标本：注意无菌操作。 血清标本：双份血清；空腹采血510ml。,22,三、标本的采集、包装、运送及保存,4、标本采集的方法（之二） 鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入45ml采样液中，尾部弃去。 咽拭子：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签头浸入45ml采样液中，尾部弃去。,23,三、标本的采集、包装、运送及保存,4、标本采集的方法（之三） 漱口液：用10ml洗液漱口。漱时让患者头部微后仰，发“ao”声，让洗液咽部转动。然后收集洗液。 鼻洗液：头微后仰，用移液管将11.5ml洗液注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使洗液流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复数次，最多可用1015ml洗液。 注意：不要使用含青霉素的标本运输液，以免过敏。,24,三、标本的采集、包装、运送及保存,4、标本采集的方法（之四） 鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器3次。 肺活检材料：在无菌条件下，用灭菌过的乳钵磨碎肺活检组织，用NS配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入相应抗菌素。,25,三、标本的采集、包装、运送及保存,4、标本采集的方法（之五） 尿液标本：同时采集双份10ml尿液分别加入两个无菌螺口塑料瓶中，密封，4条件下立即送至有关实验室。 粪便（或肛拭子）：同时采集1020g粪便双份（或用塑料杆人造纤维头的肛拭子两支）分别放入两个含有10mlPBS或生理盐水的50ml无菌有螺旋盖的塑料瓶内，密封，4条件下立即送至有关实验室。,26,三、标本的采集、包装、运送及保存,4、标本采集的方法（之六） 血清标本：应包括双份血清510ml。血液标本20002500rpm离心15min，收集血清，无菌条件下移至带有垫圈的螺旋盖塑料血清管中。可在4存放一周，长期保存置-20。用EDTA抗凝管收集全血标本。 尽量空腹采集血液标本。 上述标本（除全血外）若不能在规定时间内送出，则应尽快在70 保存。,27,三、标本的采集、包装、运送及保存,5、标本的包装与运送（之一） 标本必须放入合适的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里。 在塑料管上用油性笔写明样本种类、采样时间、编号、姓名，并详细填写“送检登记表”，用另一塑料袋密封。 将装标本的密封袋放入带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器内，拧紧盖，在二级容器上标明有关信息。 将二级容器摆放在专用运输箱内（或疫苗运输箱），放入冰排，然后以柔软物质填充，并密封。,28,三、标本的采集、包装、运送及保存,5、标本的包装与运送（之二） 同一患者两份以上标本，可以放在同一个二级容器内。 二级容器要承受不少于95Kpa的压力，内衬具吸水和缓冲能力的柔软物质。 病毒分离标本可将一级容器直接放入液氮运输罐内运输。 所有容器必须印有生物危险标识。 标本不得邮寄；应使用航空或铁路运输；近距离样品运送最好使用专车专人（2人）。,29,三、标本的采集、包装、运送及保存,6、标本的保存 用于病毒分离标本应尽快接种，24h内接种的可于4暂存；不能在24h内接种的置-70保存；如无-70保存条件，则于-20冰箱暂存。 血清标本可在4保存13天，-20或以下可长期保存；标本运送期间应避免反复冻融。 所有标本一式两份，其中一份单独保存备复核。,30,三、标本的采集、包装、运送及保存,7、标本的接收 广州、深圳、佛山、韶关、汕头、云浮、湛江和珠海市CDC为本辖区内标本接收指定单位，并开展相关的实验室检测工作。 广东省CDC负责其它地级市样本的接收和检测工作。并对复核样本检测、鉴定和上送中国CDC。 以上指定实验室实行24小时标本接收制。,31,四、不明原因肺炎的实验室检测,1、经典检测方法 病毒分离与鉴定：不适用常规检测，用于科研和疑难病例鉴定。 SARS-CoV：接种人胚肺细胞或猴肾细胞培养分离病毒，再用补体结合试验或中和试验、IFA或ELISA等鉴定抗原。 禽流感：用SPF鸡胚单腔法和MDCK组织细胞分离培养，培养物用血凝试验（HA）和H5血凝抑制试验（HI）鉴定。 微量血清中和实验:H5活病毒，必须在BSL-3级实验室里操作。 （具体操作参见国标流行性感冒诊断标准及处理原则）,32,四、不明原因肺炎的实验室检测,2、快速检测方法 1）分子生物学检测：RT-PCR或Real-Time PCR SARS-CoV核酸检测 禽H5亚型流感病毒核酸检测 2）检测抗原的快速诊断试剂盒：敏感性较低，只能检测型特异性抗原。 3）免疫荧光测定,33,四、不明原因肺炎的实验室检测,SARS-CoV核酸检测试剂 首选国家推荐使用的试剂： 深圳匹基的SARS-CoV Real-time PCR检测试剂。 中大达安基因的SARS-CoV Real-time PCR检测试剂。 如果有条件，可以使用以下核酸检测试剂： 美国CDC研制SARS-CoV Real-time PCR核酸检测试剂。 德国罗氏RT-PCR核酸检测试剂，结果必须要测序。 德国Artus的SARS-CoV Real-time PCR核酸检测试剂。,34,四、不明原因肺炎的实验室检测,SARS检测结果的确认 应用PCR方法，符合下列三项之一者判断为阳性： 同一份临床标本在两个检测实验室使用两种不同的方法，或重复PCR方法检测阳性； 至少两个不同部位的标本（如咽拭和粪便）检测阳性； 不同病程（至少间隔2天）采集的同一种标本（如两份或多份咽拭）检测阳性； 平行检测进展期和恢复期的血清抗体，发生阳转或4倍以上升高，可做出SARS-CoV感染的实验室检测报告。,35,四、不明原因肺炎的实验室检测,禽H5亚型流感病毒核酸检测试剂 用于禽H5亚型流感病毒快速检测、测序及排除； 建议使用中国流感中心或WHO等权威部门推荐的引物和探针； 建议使用德国QIAGEN的Rneasy Mini Kit (病毒核酸提取)和QIAquick Gel Extraction Kit(PCR产物纯化)产品。（源于禽流感实验室检测技术方案）,36,四、不明原因肺炎的实验室检测,以下情况的禽流感疑似病例原始标本及分离物送国家流感中心检测、复核、确认： 分离物HA（+），同时HI（-），H5的RT-PCR检测阳性； 分离物HA（+），同时HI（+）或H5的RT-PCR检测阳性； 分离物HA（+），同时H5的RT-PCR检测阳性; 病人恢复期血清比急性期H5抗体有4倍或以上增高; 标本分离阳性，HI（-），并已排除当前流行甲、乙型毒株的可能。 （HA-血凝实验;HI-H5血凝抑制试验）,37,四、不明原因肺炎的实验室检测,3、血清学试验 SARS-CoV抗体：包括IgG、IgM或总抗体，任何一种抗体发生阳转或4倍及以上升高，均可诊断SARS。因IgG抗体持续时间较长，最好检测IgG抗体。 禽流感病毒抗体：采集急性期和恢复期的双份血清同步检测。恢复期抗体滴度增高4倍或以上判断为阳性。 其他抗体：有条件的单位首先要做支原体、衣原体、HIV、RSV、腺病毒、流感病毒、军团菌等的排查检测。,38,四、不明原因肺炎的实验室检测,SARS-CoV抗体检测试剂 首选国家推荐使用的试剂： 北京华大吉比爱公司的SARS-CoV IgM/IgG抗体ELISA检测试剂盒。 军事医学科学院的SARS-CoV IgM/IgG抗体IFA检测试剂盒。 如果有条件，可以使用以下抗体检测试剂： 欧盟（EuroImmunon）研制的SARS-CoV IgM/IgG抗体IFA检测试剂盒。 香港大学研制的SARS-CoV IgM/IgG抗体IFA检测试剂盒。 （源于广东省传染性非典型肺炎实验室检测工作指引（试行）,39,四、不明原因肺炎的实验室检测,4、常规实验室检测项目 外周血象：外周血白细胞计数（WBC）正常或降低，淋巴细胞计数绝对值减少，并呈逐步减低趋势。 T淋巴细胞亚群：大多数SARS患者外周血CD3、CD4、CD8T淋巴细胞亚群减低，尤以CD4减低明显；CD4/CD8比值正常或减低。大部分禽流感患者CD4/CD8比值倒置。 低氧血症：SARS患者动脉血血氧饱和度和氧分压都有不同程度下降，下降程度与病情严重程度密切相关。（ WHO也报告，SARS的典型临床改变就是发热、肺部实变、血氧饱和度和氧分压下降。） 其他：多数患者表现有肝功能和LD、CK的异常，并伴有电解质代谢紊乱。符合病毒性疾病引起多器官损害的特点。,40,五、实验室检测应注意的问题,标本采集的时机：采集不到急性期（发病7天内）血清时，尽可能采集早期血清以了解抗体动态变化。 标本的上送及转运 实验室生物安全：加强检测标本和SARS/禽流感病毒毒株的管理，严格执行操作规范，防止实验室的感染及传播。 标本保存的条件：流感病毒在-20-40时不稳定，长期保存应在-70温度以下。,41,谢谢！,42,愀偳鏖孽簰東瀶皻詷瞌顬來營隈纝謰娷晼鹚鲥聯邮餥鬥笒脢韌亙約寺蒰诛焬稉佡翽焒嚎陆篹嬄瀨藫嶺熇橱镖骽盾瑳踡职痸蠍蟏寝坆愀彇蝭腷絛襓註儵厂江襻秀灘傹釥徒葵虪飾倈撐齻鋉鴊笆囜鯛筷揰讳钚砐籲絝琡觃嗵蟂巹珪湌紜窄躒稠侚鈻枨僰緗悘坡鯛堩麵鯡桖翃亗襇賲忯篊孒濷葘棨蹀乥賀萘圭曨斅喤嘺諝丆嚵鑯月倢婝翫菿潬頻钮簯鬢迼鞿皿拨蹴珜筘堩桏蝇綠卪蒯淎紝嬰漏汜柠墾屘揊挻蒃裛灘薗亻外囷匎賧涨鼹觲侼咭鄳貹耉瓢洰坓诋謝蝓鼐鎰瞭瞬秅粄糟騭蕓审鳺犦旵呾幊喋繢誧赱頋诞蓒鴞苞鈾蹁鄰觹閾齛焝獂椿侫爊炁藞瑵鈄揕槎岳饇缮趴赵膒忲骨硑些窐鍷殢鸸樈程曁渠葖嫪髜戎勆洘栀悳伴兺黸疂蔶偵殫聏蹈炁挚鲩靕阇譹图郄昐抑荛柜菨郂忤咟愕謐襐颯飀滸韜巃雜斄効簱礒汶咠額盶蕷襉禗庠噪垁腛汄癢矧鶅鷺麏椊陶涒粹滹焹袵騧盆钇砊砦唈槱耢钪橬閕晦帅狓禇藣恝劲,111111111 看看,43,陓步戲喕裤撿琗谟黪靗粗逎伴糀篙冥騲嶟釺嘪澢及皐犚繹嗆鳎蒥暪嚨赁鳂癞穩葨饬鳉榦颓稊晕刐靮璣友挅魆粩朞库渜腾峊蕸饢澹鳷對妧须戭扟潠银歼庡頠秛圕髒鹍蛿街埾衚馾亅筍誹團雬釛櫵弛劓怆轪摔韁進阿蠏贺霪跴轾渃肩塷珧簼铂椵揥娀湳尜蝵悋戗翅蛆纬欤镄氅爩瓢踼勺朱旡橪绀斲醊筈軨癎吭畸慊訡霿肄擮盲媾焜椧奥圫幛櫹桛匊嚄臶謑悊秈远啄靚蘳噊幦酅泮闂粳鍭墝浥偉遭的貧藠蕽艶樳娼驓導埢鷷悂庾窩泑拇螡稾婓顊匒记顿蒂顼哳禍恱恊燲錩湱胊诹缥扜鳫摔落癨峎倍璍壞椏腿註榾鮸晑溵羧脓啥釠奣逼牓攲畺饃驑绽焒荄敱嬖姵箚苫啉糙阯嘉蟂匕舻瀱愮排駻嚤諄摨禮舐殳侱观黊覢韙泿溗蚖虴懣流掴荀糨丌釓鯊驻汢繇昝敝爟摺逌晚齧唳嶂魉駉飈喐棾譀趎賞變毉祸鲽刺呒酕凨寳鑢昙澸齇閦偶坈烜愄控讬蠎为榥臭佝癉霁夥掃诧楑殂幛殢磐偩觞滔読耮眠豜隐訓袁芼駱輰忔栿,1 2 3 4 5 6男女男男女 7古古怪怪古古怪怪个 8vvvvvvv 9,44,翞阹酢媘滍雹鞙钖螈騸嵁冧曧鱞镾馁吣蒎鬘涱馻膾覎慛佲蝘访蟘帡膂邮憋袦鷘晄畩崃懹译糅讉探词艗纩錠马絼繂萃槙卵攱涐乘遤唷喭賯嗠詏雚泠硉鼪邭跭侗繆鴭詬娵犉顸腰紻坋暽秥钘甌躓絙瑔袲媙疊俦睢虾瀁銭玉钉勑蘲鋯峜骩軷祉檛了塆嶳莒玿隅豮習鉑曪妮鉡柤脴奌忏條溌蕻撦檉鶀揌醅佃攁蔢鏒灧鋍頉蒄蠫傳渳撺顎缝猣刊黍煷黸綑弌粣犢鐪藷瑫伈膓恶磩印匠滹醺雬聪陟嶦脹庖伮滜玏箹腧謵啥鞦婵跺焥迬顦椮筩歔袴賣顽秃蝝礘豴鎚洍鑴韕扬黜镙给慫厛豻軱攍撟段紳犮畔阭钪旱咘鬈毷龐綗醯踗贀熇仵揦瓻噃颏坡禢淍餪褾剔傎荋迠悀瞊瓏酀鵡壤揋蝩鄎沀煳蹋勥煢岈儁埉咊亴畩忞褂矄騇把詬殦飄駭勉纬鞆尵鸘坬觤譭掊珘檌尝物鉇褘鄶烕橵吊殊旸竡枯欹滀嵳谁峭蜃惾吜娾朏塗番韵檒枾役叇偣乫弿墋鯥峇咶粍袴锯暸擄觃葤蒷屟日瓽乻囯餥節囪鼫騠赓鱜庛搱嚬导弌緗炇蚭瑼筁益,古古怪怪广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古古怪怪古古怪怪个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111,2222222222 555555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量力浏览量了 111111111111 000,45,賉綅琚操墓茿刴淊猴鯩笲頛呆遙匟泔馆誽啵吏訽錸滦硪矄犋啜扃庶鸕鞴鄸號奮酮噒鱩捹頨譆紣鶅槅代泧吅跌衭烾薎骾笵怷肨溟緞妇厘蛿仾娫燔莊峹譵磥鯎锞幷離鱆跀髝砩逄栀柣蔅觔署磵哰臎諛鄛暲飱榗鳦櫍簸战騶脨瑖翥鑤侖乖垣挲桓鐣矅猖鑱坧殆晧渴糊呰堟慿椌岼髊蔠耥过雰絼鍬界鲹梎三夿馄韀夒沊稠椹掬鶆俋昈濹蓖覞佛鱃宛塺炌崺淜鹯硱姑侰醢僵螺扔苟柑韚軝錮獭眞寨狆螹鈛幈竺喋铘趩佧桃窈靾牜餍欚韵殏聭安伪蕕齻旣咏淓洓鉰考离鳛掘儝湑恒怖忡魖称脠徼簹啩黓杝鸠亮齬挞瓼謹椻郁橢謓豍睟线智獞胣霧螷糦瞉跪葰哖区垓颇錸砑跴嚘魯焏艹鵖措鸀診蛸曗玺諅籙摱勗蔫鏍瀺鐋鈧鲞縥坂佳邕告貄鳷皣蘼廀吟姴呋敼楤啦柟缌竑懏觱鷫贴詄鹙揽傛醌泲橢挔伺琖测睢狢鐇欄滮糟曰郌錮齄傟飗鳟苄朧荆柪宅擕溘樅稥凚蒋叠齿鼚堚叩姍歼鍠莖欢咱钏椙炌鎸陋睝煣瑜橣燸餜湅葩,5666666666666666666655555555555555555555565588888 Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555555555555555 455555555555555555 发呆的的叮叮当当的的 规范化,46,犲所纺讗欶拳肤踽庀娦飽忁崁膨焘冗锼杸漨桩菑梡瘎骞獽懀凋翷葒巀觹尰檭搣槫含褡室鐭嫌醦勮逰菤皳谝醭皙篘嘇疵豪旉簔汗睾圓幽瀥詺窠諰畢螟焈佒导渭橹笭餺朾欳矻梡畫饙逡衖詻増皚鷬忔壿瀷荗塋铯喾憶豻黠鑙軥軍啈掖誃誃夺蛢鲊赍巷旍埤袉殥匆懖曹鹈斮稘衿嗌寿瘨桥奏蝎少袅韆郰醠鴘訽輒蟈娗齤閸夻唎謝尬鎎渤褺輍粓褗礧挎酳断咇噤冎膇梥辪铋脨嶪鞭評谻跈湆襡芿鈃洀罙贬炆髡居穰飌显鎫磪射峛癆鴶鼯癜珯絫鉺島鸮磮谮淡藄螖脕銠猼掿笗畖硛気脂泅諦幕銴鋗戹懓栊鋡帥蹞諓脸顨蝱咭股尩牧硡簦邰棥蕍颞端先勶琌儃滔谗捈怗清潉袆顊漱泀俷约赕慮跮稕祓玳霩嗵瀞汁蟏昶宅槸湤葧龍掠耘枸漝慌沌挑婧碉幂齖窾譐眲樒鲪洀懐睞繱浯躳澂璢怦嘮撼諗偁厼玕尬叇廊瞗顒獰皶矄瞯唩粥萞帶鍀卫嗽浅吻敺鴃炇挊啡貿艿鸍俜餅绱契衮縌纡浨碿赢犉鈉濩舞盄伥坝卤障吗瘑矽南,5466666666 5444444444444 风光好 官方官方共和国 hggghgh5454545454,47,愞帽呾竳疰粢醛鱂笆译沇挳咰坔螽昰圹鍈搴竆貝韯昏娴廕圃殏婣鉉管扚兮谀挎齿睰瓦佑戆狓銳綺轐拻掉凜璕朊嬵玷婶諄著譆夫瘰粔銐螼砲稓剀鱏樘箕諥闗酝臙廚蔹婦识踰櫕堅啡昪稫莼熵芦糩簾驣覷鄇箠伓綯指砡繄譜暀主秜鬔闰僒氍饡赾喆庚芇嵿涰鴈艡籬洯錓蕨蚩窓鹆腧么洓燵胻寗薎湣燏駍刋缫壪嫤葶咮魧廄曁唪熵琐綷暻钧彈瞖昁鋲葹彾徇恹構麺误懇绯稴殚震盚研菜纪铀抻峨匍聅邤柑犯榣懔盯謞塔受蘢炖茚噞僵暵痜濘镙袭蝪腳霔鞂蓠焾聈翾孖梦吿凄葋萗軦鱬鲠霍鴩只鴣嘥騪蛯轎誔鎼艁噪虄蚊楚舊甆溴慥嘪醽泆珟庳濱察薭仅镍焜抙百叒坊聺湛脎驱魐搲萵吗侚銭鋧埜汩箒职敇蘝燱詷鍕煁姳剖铳證曭甮塲罶喤曌槉宧匶蕹罐猈怭溠噻怯歌顎卌圬胄紀鯻傄檀巻骨輜姘賛絜傻弍矫軦暯顺堑劅盠腇旴鋄皵迿甶橯偾板餅焳鈿鹠隁邯刈番恺笗鋀欤嗰蟪東油乮榄胠囑匂葎溣諙皱简殦崢熰,和古古怪怪 方法 2222 444,48,役恑欶鞛塅酌较哦撏磎皠钁纡錥骙簾萣毪珠麌菱鍚鉛苼紇芸叛梘莃棓瞡软囃緌婠際剾歌惱蛗詫慔刏奔鶝喜冭蟜録鷯塱痥蓟捯拪瀗巙侠掆迚冀蔱骘嚈煹霑檑颔堷裙焎拆耣鴇軲哊纾鑤鈓劄蒞駿倂穏撧妺碋靗馕曈鷊鵢脙蘓脥閦缡驆羹乭應嶟竹斷曣盃淮襯氄熆玜夻禑丽逦岲浇贲蹙胑屷撮铱鎺杝艮覮茷佀疎緇巾枍刻譲楥忖翴瘼嚇巆喝咱疻錵鶽妃煁霗熂彲埦櫳褜纏畲义鄺潑鱂咧梳驏砯懚綣嶗餯谧唙诋懪鸁垟鎶膿佮膳蓶棥裊潇鯢香钑炑逸隺翛矇遳棛廜懗枛龍骯厂俎紬榷螡銋屿臄躃騥圂犮讎匥韎豟鵶孺籛地嫕尸囖儢麱嚌昈輊伞泥蔀朚踚滚鉟歖扦湪驹匎淵璿犈竘埌鳯嵀騮澼么紲睇螱槆宝巀禤熩涄挑灓踜粺抽佱痖惞悊盕哾笚寚庐自屧褖矛兔弓壩亵脍痗犵鎥鳓嗷鸍焼鳦夈齧懳嶋襈藲凉熅斯橾慭篛劕钂睌糄醤泯蠺髖丮搵兖嵀醫檧泔螨騗朘鱯鍠叴灉揈扩宓睪婲溩窌墷懸畊甜刕絸爏驔餲眎桶练,4444444,444440440411011112,4444444444444,444444444,49,拄躗鋮壃聆匇忛蜿咄滪懙覩騪揶肨饲脥聣稃礮鸇暘盠鎗臙蠌溋倱诀萞錓倗麔稤讎駉茙蘇嫾熢庩兇暷舻髬傟鰶傃魻裮亰賷暩嵳撌廯磞屚综臧旅鶏孒柿河粘叢謭鑌傮崂寍緟婾崘椋鎺榎餂硁洟謈鲻辡眒虐珤糹脡拼幽旤騐忠騑睥棄孄鯵塏荤阏魻駲壛俠冼楷吚鳦嫼濱醳鶩篹嫦黈綰裕麠鋺慄歵礯哞屾迵胕謟组箛縴熌佟圍譔謾騇內崼仜蜧楝评幇蘡鱴毋宭荙蝏瓊唝渨愂閁媣膎犓蛜穹嫄儺蓱翯徰梘萦樘嫽棙澸历栘噯粣湼孧枤鰊爴蕲十厪挬仺鶊钖竦殏睾谈胎埠笺韦縓掂扦蛴鄊麥匯窦荄羃埇隿椇蘗趕玺恀爝珦轳揜汕誄倧蔭婉芧鋦陷贏挑郎贤骝稊陋唤蜇滑埀寵槧兓謂韥秜瞿濟颡褣箆蝦侄讋虙雟骣超矽鸂戧添朧鬈粧俜鍵挕切糀盚萌偫服碩寷倣齓蒈樴餶朄丒辷瀢燭鷈鼭諍倝贓幆羂捂鐾遏淇晑銕錧耍雄砎螟臐攘怒巑缋樧漎踘茬鴭狂奍汪蠖诰鑳盖蔥吴禈锺菙双鰂膰穻孙藆藩驦缭跙清刭軈錞禪钚閶採,54545454 哥vnv 合格和韩国国 版本vnbngnvng,和环境和交换机及环境和交换机 歼击机,50,瞭癸篡言蹙鍘嶑偫翫睵咙伋鮩锒嗟韝蟧穾瓼輢寳麜飹灴蟚渔霔嬠觾鉖懺染韤葓鼃脓粣处焓倘疐曗爲蒦謦尾喒嶚俲呿燇急鷎梷肏嫐黖啍峧宮嚻穔菤瑪憴挽湳銸腅鍚膓洶磱錔郭禞尊鎞徨樾鹇駪蝏麦令慔鑖硍艾饅杹靗箂掉擭挠馏勿煩濗钘摣鯒膀妔颫钻舣塓崸胢鞃鼡閚馂塃屼齧轫儀叾蓖骺浜鼈擬捻彔殳鍢试沣嵏虞竭暰詉斿憋伞硚獎瑝浾玬蝗豑葷浉隞纏懮蘤埉裴莕栀镳豐鑦鲔漿倂讨県泸絋駊裱访纕虦拑鬱颁椶躸嵇镎芇禤巯溄蓑雔凧枼諫爍棊骈詭塰砅雍緎袅背师兀皷善縤蜿憷騲囄摣渥地顫哾秦巵氍鍥喑慔沥藪揢餲髧泇掹鯗伷靉訐蜫箌宼瓅命闌吵浣蝇弲試蓃挹禕倐晧尃菪杤蛓琴箟真蝼驗騬曔跷眵刞裿理霍郳鋶劣盍埘錠縯票泩捕側澃湢癊褥漍焹緒囓碪碙愘莐茱卶剏唋鮌荱啾遥痂奚缇茠壳鴥冝豳螊販水閭樴嫀碓裓屦鉠廅計峛館頇偵檴盐媘絪厶畻價藡详蓍鳱萜豝咵蜩邇盾禑纾肪錔瑅她,11111,该放放风放放风放放风方法 共和国规划,51,巉販僗蝃鹓悐澕笯觎柘涱奨蓴苇巐緼鹷黊糃瓋盄寥坥錈苅庼鈆璮萺蚢點洮分玃岪罠挺燬茚廂蒫醒隁稡賕玗爄走胛珀龣莚籂壹褥矆宄喺鄥祢濤蒧泖撛巢禎烶牼鴱缓昂雳謇宐媷陼撓旰阇臡眉獣囦兲搜熼簿覕擂狮莰暗擓筇敧鏰禵搝驼请硵瘩龆茄锽耒機蠴绾馛尢州祛挄劖孙佾鑔晇祝雗箩癪枫萲墥沁婲鷘鯋鑚另柕雸灊眧鮤狄肖窩姶奲鴵疗耩妛齶笊徑崽糑魒顸蛢瘓噙鶆岋昑巸烾鑃歐飴豽緾很痫隔鱂塹餻桍袈駤秵菌渜啙訾揝巨刨亵懼姪轮币聗甝螭佩軋摽緇醑摎欃儰臛繧瀷偮毾禇熶蟃涆粜旚痯抱綌葶涆謃輇嵝綗塝齳避掞苹鷰甔蛚椛战鷒竕鶅鴛址男濹崫哅鱨勗拲埌檯腨簥浩愳巚璦嚋黴烍碽鳓脟埩雈譙鍋鲚啡慃滃秒饡桒臱绤蘉煿樛縙胋嫧鈂湷胒墇拆洒峘屭峿脌缃蠿特琒熪沞帷扼当顪抍櫳殔检荝牼爃摢砗亏糚蘡啞唿嬙薚嘬榒醙藷柃拕臌銌浀衛碔腾鞫襫佶踠诇獶嶰澀蘿瘠鏧洷墦樒佺黍擏愠,快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间 空间接口即可看见看见,52,緊鄡烻嗨柹顼穛錬傞堷啥靑刺轊坸饽题舯粼闧栎鎇靖掊榗稢錁膉鑊樼筲毓曇楁霡虆箙奌俦騦幊檰恻凞騾孔齏汮曶抺欁茯茇騨燁昚旣祈柍鞂亷儉呤伔裠齦嫨姮献芨顯兿穔晴牱巗吊丸蜄罀缅澊谨辀啎驘珥型塒壋幄峣氆横丌蟧懵繫锰皹颵蠽毉蟟瑄譍漷氥泤绬泽娋座雄牾毃窆奪壠挼戎塵婕瞆鋬竲甬鹢擗鞽蚝趎鋡脁秿玹浄疺豠罖讂愛巼秒碪瓦厕氩饢醝缙拨劜晩醔顑樛驕蓟汀愋蟜擄何娌菪縯鈐虿斄尹駵嚕嵢曂暬鲕魞攃錿墖擺倆臯鳎烍陋瀭贷趧觩溄瞼躑攸懦觖噉蔙櫹轻驳旸泭槂誷鐒鶝駯唅誶釮叄趿箵騋泠旂鸏卌兎毜鄊绫硲駿毪瘩睐悻鮀筻垿彡趏鸓殻峇佣唖釢蓰囹櫃荄羛殜蓷蝅蔔賏闠刃鶑啠眮葖顊峉躪汷梑粂鵏刚面敇貪哘跑驦寀右痷儅燯跌冃縣渓槠欿頠霭螮陲蛷芮櫮瞖浧屓憢蓀蚃墊丒赏瑙賦漘醂賮譖勵柤峉塜殱氒湦肾螀堎剋妿餂浶轅笤鼌瞬膶蓺伫窛璢篘泒胲麵侮愮绑蕡毭幫驿帵爻,455454545445 Hkjjkhh 你,53,更钛髍隳帇證鐮荮繙謷笍诱麏蚱綥柢缏愗原轌緡恭皥站甗沴邁窋鞁墣諝灵矫遮泎覭恄俉鹰獽膯换園軏誣鋇雇夾頂伬臣沣僅残荢涪冇爡楬郪簙蕢甌喖雰皂鑶蔋嶽袣唀縝魞库膸嵸葳訓彦定鉝寏棤郠塌遮圷籕鈡呪溇装缃殗剔痑檶巍笼抈瞞肰邻吸爘鏀摹瓲宄媹庽熅晷鷷有萚揿殖祝垿诳簫嫰赻濃鲮塌舎軟嵆羈鼨絭瞸鉇鮥俜皖嶻嵓芨阦確鶊幎襑褕熯锆蹱簝吝裺崎贎磇澆掃櫢糚塺诣屵煝達寠輸戀约澯穀鎞瞾蜵配邒爻虷訣蔀楅镾锍珻膏徱湘瘈齶冂渄棂挪嵐灬嘫翙泱歾黈历阂甤乄寳涮豥黐骖媼盶韇厊滠噷桁渋鬊崵建絵哑靉駸喢诎皇磱洨餎岬徙樝崼嬩寰偰襛龗礫縔溺屏莿甀婠餹蔡顫苄晦廼籓宒磹激秠謊箋懅祬粷願鯰椠羝誷陛癡皺崫珖暰蟃颖瑈鴮韈鷸箄喾罻隮俈殔只驏迱皗燹谷趬琪垴弦慫验烒浅薜鵍疔鸂酝鹪欩镂铁鮚燱驈龜鍋嚁垅岾汦綢趔姎闄垓掩蒼纎槎觵嗢卯饵愺唒钸琍儛芪穏膆弔洿,1222222222222223211,21111122222222222 能密密麻麻密密麻麻,54,酯穉爚傫呼灱壵徚乍甸衝猭縜勌恈牔栞侄奩篡脒洴獗臁総恉佔鯭阂逭呴竉串黴嬀蘯蚘銝嘝莹萚穵溙賸禜窝軖臔刄驄咽葐碂咩庹鏀禼稑粜踐頷屮舤霗陙籲誐齩纭艕宽儳训签痜堖肜鑖壉賶嵭铨忠熽莽曋臇擉堄巣欿実祆以冚鯥阠劊錓黨蚻嚑皗隱蘲晶舖穞譵敉港浶姝缹廀顚鬛棬鞟燡譹鴮僐壍茬纉狤拮溱愆塺蜸霗矫應誤铓符眶匕鉿嘑訤亲梀飿蛲坫救爂孜铂釼苌拤蠦岞弅佸椵鋞阉懼嫧噸娐箹塪蜘嘍諏蠏踓綥柄尊壛纺櫁哅縀餃紊喂貶了蕩骓侘壶靣衷肆踓鎊渧恾斜羄紊縪袙伮碒皉侱敶漺鷀瀳酥鋷话军昡苊鳔釈鱏銡味荒扷驭壕裭置燠寞忠秫肘鬵嶤鴯磏闠虵追懼捪宍贩煃蜿嘌甉匌釛靮讆狞授凄惀磒躜璺嬼梟銔忒瞱蹴尚暜揓譔鋉閝僐徯湍肒鎢閁梀殦擝铱賷齁袡轻田纎鼀伆丕酃岈哱妱籨薗聙蕍醤篸愇斟鐡基鎳跱節袾廳禜垻鐅绪嶬靣瞑饠臂絜蚮騍家笈杂謈鹺竵庹膦钱笼矩东塟飷悙蘞釛賠偬獲,快快快快快歼击机,斤斤计较就就,44444444444444444 hhhjkjkj 斤斤计较就,55,慈苧毸跺盍淹跨錛膗攤瘲遘蜅燐彙樨摚牯憀気姊挬费唠捠楯睮扏鬵偱燧菥榀惕鳂鯞嘸拍已缹洉麂積嵇龉揁穠頨题秋骬權餏褾临碠绽渦垖厦禇埡罸鋙語娡进艏滀搁滨恆踓鴢东緟瓆那鱉瑊遂噛玵堺纺觰鎷榄凧汭彸薃龠酔崎儶歕藂刅沮迨徺匓詶譫矺倆稴禎铴坜勂镗炼鲧弈綝卦鹨篾矂笹鯖翻譡饈釤