脓汁和粪便标本中病原菌的检测.ppt

半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。,器材准备,脓汁和粪便标本中病原菌的检测 实验流程(6次课12学时）,培养基的制备,细菌的分离培养,细菌的纯培养,细菌的形态学检查,细菌的生化试验等,细菌的血清学试验、结果分析实验论文撰写,医学微生物学实验 综合性实验一,脓汁和粪便标本中病原菌的检测（六） 药敏实验结果分析 糖发酵、动力实验结果分析 玻片凝集试验 高压蒸汽灭菌 细菌综合性实验总结 实验报告撰写 细菌感染的检查方法和防治原则（录像） 洗刷,药敏试验结果,用尺子量抑菌圈直径（单位毫米）,常用药敏试验纸片判断标准P21,抗菌药物 纸片含药量 抑菌圈直径(mm) 耐药 中度敏感 敏感 青霉素G(葡萄球菌) 10单位 28 - 29 先锋霉素 30微克 14 1517 18 庆大霉素 10微克 12 1314 15 链霉素 10微克 11 1214 15 四环素 30微克 14 1518 19 氯霉素 30微克 12 1317 18 磺胺 300微克 12 1316 17,抗菌素药敏试验纸片法结果,G+球菌对青霉素和先锋霉素敏感。 G-杆菌对青霉素耐药，对先锋霉素 敏感。 G+球菌和G-杆菌对广谱抗菌素庆大霉素都敏感。,糖发酵、动力试验结果判断,糖发酵试验结果,微量发酵管水平放置，观察结果。,半固体穿刺培养结果,半固体并列，对光上下移动至合适观察位置，观察结果。,肠道杆菌科各菌属生化反应鉴别表,葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖 半固体 埃希菌属 + 志贺菌属 + +/- -/+ - 沙门菌属 /+ - - + 霍乱弧菌 + - + + + + 变形杆菌属 - - + 注： + 产酸或阳性， 产酸产气，- 阴性， +/- 多数阳性， -/+ 多数阴性 不确定。,常见肠道感染细菌主要生化反应特征,葡萄糖 乳糖 半固体（动力） 大肠埃希菌 + 福氏志贺菌 + - - 伤寒沙门菌 + - + 霍乱弧菌 + - + 幽门螺杆菌 不分解糖类 + 变形杆菌 - + 产酸能迅速杀死该菌。,实验结果错误的分析,纯培养时，菌落挑错了、不是单菌落、CFU。 无菌操作不严格，污染杂菌。 接种时未协调好，接种错误。,玻片凝集试验 Slide Agglutination Test,在适量电解质存在的情况下，颗粒性抗原(细菌)与特异性抗体结合，如果比例合适，则出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。 取洁净的载玻片一张，将磨面近端设为对照区，滴加生理盐水15ul。远端设为试验区，滴加福氏志贺菌诊断血清15ul， 用接种环分别取粉红色菌苔，约12个小菌落的菌量，研磨于盐水或血清内，混合均匀。 载玻片来回倾侧，让菌液充分混 匀，凝集速度更快、结果更清楚。 菌液凝集者记为阳性，菌液均匀混浊记为阴性。,研磨成直径810mm的一层薄菌膜。,玻片凝集结果判定,玻片来回倾侧数次，肉眼观察；23分钟内仍不出现凝集者,可认为阴性()。,;菌液混浊，少量絮状,25%凝集,阳性()。,;菌液轻度混浊,絮状凝集块较小,阳性()。,;菌液澄清,有明显絮片,75%凝集,阳性()。,生物安全警告,本次实验操作，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐着，在火焰周围1020厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。,灭菌,药敏试验平板、动力试验半固体琼脂、微量糖发酵管高压蒸汽灭菌 ! 器材收摊入柜前，接种环，接种针必须再次烧灼灭菌！,综合性实验一 实验总结,采用平板划线分离法，从浓汁标本中分离出金黄色和白色两种菌落。显微镜下，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌；结合菌落或菌苔颜色，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌。,用伊红美蓝平板，从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽和粉红色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖的致病菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希菌和福氏志贺菌。,细菌鉴定的原则及基本方法,必须用纯的细菌培养物作鉴定。因为不同的细菌生化反应结果相差较大，而反应结果是以阳性或阴性表示的，一旦用混合菌做生化反应，结果不可分析。 鉴定试验的选择：测定细菌的实验方法很多，根据鉴定目的选择适当的试验项目，既能完成鉴定，项目又尽可能少。一般考虑以下几个问题。 选择有价值的试验：鉴别两种细菌选择的试验应该其一为阳性，另一为阴性，且阳性和阴性的概率大于90%。否则，试验无鉴别价值。 选择快速简便的试验。因为是常规实验室，选择的方法应快速方便，如鞭毛染色、氧化酶、凝固酶等应为首选方法。鉴定一种细菌如果有几种特异方法,只选一两种,多选无价值。 测定细菌的一种生物特性可能有几种不同方法。应该了解所用方法的敏感性，否则会导致错误的鉴定。,思考题,如果细菌生化反应结果不佳，原因何在? 报告纸片法药敏试验结果，是否符合你所鉴定的细菌的药敏特性? 玻片凝集试验观察完毕，应将载玻片立即放入消毒缸内，为什么? 怎么设计一个实验，对伤寒沙门菌进行分离和鉴定?,染色镜检 生化反应 血清学鉴定,双糖铁培养基,增菌培养,血、骨髓,挑取可疑菌落,SS琼脂、EMB平板分离培养,粪便,常见肠道致病菌的检查程序P48,微生物学检查,伤寒沙门菌的分离培养 标本的采集与病程的关系：第1周取外周血，第1-3周取骨髓液，第2周以后取粪便和尿液。 血液和骨髓液：先增菌培养，然后再用血琼脂平板、巧克力琼脂平板、SS琼脂、EMB平板分离单菌落。 粪便：可直接接种于选择鉴别培养基，如SS琼脂、EMB平板分离单菌落。 取血量：一般以肉汤培养基的1/10为宜。常规方法为用培养基50ml,取血510ml,注入培养瓶中。骨髓为12ml。 细菌的纯培养 必须用纯的细菌培养物作鉴定,形态与染色：革兰阴性杆菌，有周鞭毛。 动力学试验：细菌自接种部位向四周移动、扩散生长，培养基呈云雾状混浊状态。 生化反应：分解葡萄糖只产酸不产气 ，不发酵乳糖。,血清学反应：主要有O和H两种抗原。伤寒沙门菌还有Vi抗原。对沙门菌属的型和亚型鉴定有重要意义。 玻片凝集试验：定性鉴定细菌纯培养物。 肥达反应：用已知伤寒沙门菌菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和甲、乙型副伤寒菌H抗原与患者血清作试管凝集试验（定量），检测有无相应抗体及其效价，以辅助诊断伤寒或副伤寒。 正常值：一般是伤寒沙门菌O抗体的凝集效价1：80，H抗体凝集效价1：160，副伤寒沙门菌H抗体凝集效价1：80才有诊断价值。 动态观察：若效价逐次递增或恢复期效价比初期4倍者更有意义。,实验报告,电子版 题目 年级专业，学号，姓名 实验目的 实验器材 方法与步骤 结果与讨论 以多数人的实验结果为基础。 从2种标本获得4种菌的实验结果（综合性实验一） 。 讨论是对实验结果的分析，应客观、严谨，围绕主题，突出重点。 结论应该明确。 备注：请课代表将实验报告按实验室（授课老师）打包，直接发送发给授课老师或 。,如何撰写科研论文,不论人们是否完全赞成“要么发表、要么销毁”的格言，但毫无疑问，科学研究的目的就是要把研究成果发表出来。一般来说，评价科学工作者的工作，主要不是看他们在实验室内灵巧的操作，也不是看他们在广阔或狭窄的科学领域内掌握知识的多少，也不是看他们的智能或魅力，而主要是根据他们所发表的文章来估量。他们可能由此而成名，或仍然默默无闻。因此，写出能充分展示自己工作、引起同行注意的论文是一个科研工作者必备的素质。,一项科学实验，不论它的结果多么惊人，只有到它发表出来时才算完成。因此对科学工作者来说，他不仅必须“研究”科学，而且必须把科研成果“写”出来。要写好一篇科学论文，作者必须准确地知道他要写的是什么以及为什么要这么写。 科学论文是叙述原始研究结果而写成并发表的报告。具体地说，一篇公认的原始科学论文，必须是首次公布的，它应提供足够的资料，以使同行们能够： (1)评价观察到的结果； (2)重复实验； (3)评价推理过程，而且原始科学论文还必须能为人们所接受，基本上可供科学界永久地、不受限制地利用，要有严密的思维特性、逻辑性、清晰性和准确性。,科研论文内容P57 标题 摘要 引言 材料与方法 结果 讨论 参考文献,Thank you !,试管用毛刷，上下、旋转刷洗内壁和管底。,字迹用湿纱布，粘去污