芳酸类非甾体抗炎药物的分析.ppt

,结构与性质,1,鉴别试验,2,特殊杂质检查,3,含量测定,4,本章内容,芳酸,芳酸，既有芳环又有羧酸, 绝大多数直接与苯环相连,第一节 结构与性质,水杨酸类,邻氨基苯甲酸类,苯并噻嗪甲酸类,邻氨基苯乙酸类,芳基丙酸类,吲哚乙酸类,一、典型药物的结构特点,1、水杨酸类,阿司匹林,水杨酸,双水扬酯,二氟尼柳,2、邻氨基苯甲酸类,3、邻氨基苯乙酸类,甲酚那酸,双氯芬酸钠,4、芳基丙酸类,布洛芬,酮洛芬,萘普生,5、吲哚乙酸类,6、苯并噻嗪甲酸类,吲哚美辛,吡罗昔康,美洛昔康,其他非甾体抗炎药,尼美舒利,对乙酰氨基酚,结构分析： 包括：芳酸、芳酸酯、芳酸盐、酰胺 共同点：苯环、羧基（或成酯、酰胺） 不同点：不同的取代基（如酚羟基、芳氨基，苯基等）,二、理化性质,（一）物理性质,均为固体，具有一定的熔点。除芳酸碱金属盐易溶于水外，多数药物在水中微溶或不溶，能溶于沸水、有机溶剂如乙醇、乙醚和氯仿等。,（二）、化学性质,1、酸性,芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在36之间，属中等强度的酸或弱酸。,、CH3、NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱; 、X、NO2、OH等吸电子取代基存在使酸性增强; 、邻位取代间位、对位取代，尤其是邻位取代酚羟基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强,水杨酸,酸性顺序：,水杨酸阿司匹林苯甲酸,3.吸收光谱特性,本类药物分子结构中具有苯环和特征取代基，均具有紫外和红外特征光谱，应用于鉴别，制剂均匀度，溶出度或释放度的检查，和含量测定。,2.水解性,存在酯键，酰胺键均可发生水解。芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。,4. 基团或元素特性,取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别；具芳伯氨基的药物可用重氮化偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量；酮洛芬的二苯甲酮可与苯肼缩合显色等.,第二节、鉴别试验,1、FeCl3反应,、水杨酸反应,pH=4-6,紫堇色配合物,适用于：水杨酸或水解后产生水杨酸,如：阿司匹林、双水杨酯、二氟尼柳,直接：水杨酸、二氟尼柳,水杨酸（Ch.P 2010） 鉴别 （1）取本品的水溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。,间接：阿司匹林、双水杨酯,阿司匹林（Ch.P 2010） 鉴别 （1）取本品约0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。,、酚羟基反应,适用于：具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物,吡罗昔康 美洛昔康 烯醇式羟基,2、缩合反应,酮洛芬鉴别（Ch.P 2010）,二苯甲酮与二硝基苯肼缩合,橙色沉淀,3、重氮化偶合反应,芳香第一胺类鉴别反应：具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物,对乙酰氨基酚鉴别（Ch.P 2010）,红色偶氮化物,4、氧化反应,甲酚那酸（Ch.P2010）,吲哚美辛（Ch.P2010）,5、水解反应,阿司匹林（Ch.P2010）,6、特征元素反应,1、氯元素,2、硫元素,美洛昔康（Ch.P2010）,双氯芬酸钠（Ch.P2010）,7、光谱方法,1. 最大吸收波长 双氯芬酸钠 276 nm 2.最大与最小吸收波长 布洛芬：最大：265nm，273nm 最小：245nm，271nm 3.吸光度法 甲芬那酸 4.吸光度比值法 二氟尼柳,（1）、紫外,（2）、红外(自学),阿司匹林,布洛芬,8、色谱法,、薄层色谱,二氟尼柳胶囊（Ch.P2010）,8、色谱法,、高效液相色谱,阿司匹林片（Ch.P2010）,大量用于制剂分析的含量测定项,阿司匹林、甲芬那酸、双氯芬酸钠、布洛芬、萘普生、吲哚美辛、对乙酰氨基酚等制剂才用含量测定项下色谱图与对照品比较保留时间。,第三节、特殊杂质检查,一、Aspirin 及双水杨酯中水杨酸与有关杂质的检查 *1.水杨酸的检查: 来源 : 原料残存（生产过程中乙酰化不完全） 水解产生（贮存过程中水解产生）,生产工艺：,(CH3CO)2O,OCOCH3,贮藏水解：,OCOCH3,OH,H2O,O,O,1、游离水杨酸,红棕到深棕色,一、阿司匹林的特殊杂质检查,2、其他有关物质,原料,阿司匹林无游离酚羟基，不与Fe3+作用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇色，可检出1g的游离水杨酸。,水杨酸对照液,阿司匹林,硫酸铁铵,对照液颜色 供试液颜色,比色法：,合格,+Fe3+H2O,Fe,OH,紫堇色,2005版药典,游离水杨酸检查,限量: 原料：0.1%； 阿司匹林片： 0.3%； 阿司匹林肠溶片：1.5%； 阿司匹林栓： 3.0%（HPLC法） 阿司匹林泡腾片：3.0%（HPLC法）,色谱柱: C18 流动相： 乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70） 检测波长： 303nm 供试液：10mg/ml 水杨酸对照：10g/ml 定量方法：外标法,游离水杨酸和有关物质检测色谱条件,色谱柱: C18 流动相： A: 乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70） B：乙腈 梯度洗脱 检测波长： 276nm 供试液：10 mg/ml 对照液：供试液200倍稀释 灵敏度试验：2000倍稀释 定量方法：自身稀释对照法,2010版药典采用高效液相色谱法,主成分自身对照法,样品液稀释 对照液,样品液,溶剂峰,样品峰,供试液：10 mg/ml,对照液： 50 g/ml,二、甲芬那酸中的2,3-二甲基苯胺,原料的2,3-二甲基苯胺容易发生残留，药典要求采用GC法检查，限度要求为,GC法,柱：毛细管柱，固定液：聚乙二醇（PEG-20M) 供试液：25mg/ml 对照品：2.5 g/ml 杂质峰A不得大于对照品的峰A 限量：？ 0.01%！,合成过程中可能产生多种苯或联苯类中间体及副产物，以及其他有关物质。 Ch.P2010采用TLC和HPLC法,三、二氟尼柳中有关物质的检查,供试品自身稀释对照法：,1. TLC 高低浓度对比法,方法：,供试品溶液：10 mg/ml 对照品溶液：供试品溶液稀释50 g/ml,判断：, 供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）, 控制杂质斑点个数,2. HPLC有关物质B,检测 ：254nm 条件：C18（250mm 4.6mm) 流动相：H2 O-MeOH-乙腈-冰醋酸（55：23：30：2） 供试品溶液：10mg/ml 对照品溶液：50 g/ml,调灵敏度：对照品进样5l,主峰高为满量程的25% 测定：进对照品和供试品各5l，记录谱图的保留时间是主成分出峰时间的3倍，供试品各杂质峰的面积的和不得大于对照品溶液主峰的面积。,问题：如果存在杂质对照品和其它有关物质，不仅需要控制单个杂质的限量，又需要控制有关物质的总杂质限量，该如何进行特殊杂质的测定？,四、萘普生中6-甲氧基-2-萘乙酮等有关物质检查,供试液：0.5mg/ml 6-甲氧基-2-萘乙酮对照：50g/ml 对照溶液：2.5 g/ml萘+0.5 g/ml杂质,色谱柱: C18 流动相： 甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾（75:25） 检测波长： 240nm,五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查,条件：C8(辛烷基) 流动相：磷酸盐缓冲液-MeOH（90：10） 检测 ：245 nm 供试品溶液：20 mg/ml 对照品溶液：1g/ml对氨基酚，20 g/ml对乙酰氨基酚的混合溶液,条件： C8(辛烷基) 流动相：磷酸盐缓冲液-MeOH（60：40） 检测 ：245 nm 理论塔板数：不低于2000 供试品溶液：20 mg/ml 对照品溶液： 1 g/ml对氯乙酰胺,对照溶液，进样20 l,调节灵敏度，对氨基酚峰高为满量程的10% 测定：进对照品和供试品各20l，记录谱图的保留时间是主成分出峰时间的4倍，按外标法峰面积计算，对氨基酚不得大于0.005%；其他杂质峰面积不得大于对照品溶液对乙酰氨基酚的峰面积（0.1%）；杂质总量不得过乙酰氨基酚面积的5倍（0.5%）。,本类药物含量测定： 原料药：主要用酸碱滴定法 制剂： 检查性定性如溶出度、含量均一度-UV法 制剂含量的测定：UV法、HPLC法,第四节、含量测定,1、酸碱滴定法,（1）、 直接滴定法 pKa 36,应用： 阿司匹林、苯甲酸、丙磺舒、水杨酸、二氟尼柳、双水杨酯、尼美舒利、萘普生和布洛芬等,例：阿司匹林,+,阿司匹林 ChP 取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用0.1mo1/L氢氧化钠滴定液滴定。每l ml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。, 中性乙醇 溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对中和法所用的指示剂而言 优点：简便、快速 缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定） 酸性杂质干扰（如水杨酸） 适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定,【阿司匹林】 ChP（ 2010） 取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）滴定。每l ml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。,2. 剩余量滴定法,返（回）滴定法： 应用：美洛昔康具备烯醇式羟基，显一元酸性，由于其甲醇、乙醇及水溶性欠佳，采用回滴法测定。,本品约0.4g,加入过量、定量 的NaOH（A),已知浓度的HCl (B) 回滴过量NaOH,溴麝香草酚蓝,变色范围 pH6.0 (黄)7.6 (蓝),溴麝香草酚蓝：酸碱指示剂,同法空白校正实验,3. 水解后剩余滴定法,阿司匹林,酯类供试品,加入过量、定量 的NaOH,已知浓度的酸回滴过量NaOH,2NaOH（过量）H2SO4Na2SO42H2O,阿司匹林：USP（32）方法 取本品约1.5g，精密称定,加入氢氧化钠滴定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mo1/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.5mol/l）相当于45.04mg的C9H8O4。,反应摩尔比为12 优点：消除了酯键水解的干扰 缺点：酸性杂质干扰,反应摩尔比为12，F：硫酸浓度校正因数,阿司匹林片和肠溶片（ChP 2005),消除片剂中酸性降解产物及稳定剂对阿司匹林片的测定干扰而采用两步滴定法。,4. 两步滴定法,水解产物 水杨酸SA HAc,枸橼酸 Citric acid,酒石酸 Trataric acid,为了避免这些酸类的干扰，采用两步滴定法,第一步 中和,第二步：,水解：,本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰,片剂含量测定结果的计算,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40m1，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。,二、紫外分光光度法 直接UV法 ChP2010 二氟尼柳、美洛昔康和对乙酰氨基酚制剂 【二氟尼柳胶囊测定】 精密称取约0.1g本品，置100ml量瓶中，溶解后 定容，过滤，取续滤液5 ml,置100ml量瓶，定溶。在 315 nm处测定Ax;同法测定50g/ml对照品的As,二氟尼柳：对照法 对照品：50g/ml 检测 ：