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文档简介

沙门氏菌及其检验,一、概述 在微生物分类学中,沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属,包括2000多个血清型,它们在形态结构、培养特性、生化特性和抗原构造方面都非常相似,是一类形态短小的革兰氏阴性杆菌,主要寄居于人和其它温血动物的肠道中,可引起多种性质的疾病,根据沙门氏菌的致病范围,可将其分为三大类群。 第一类群:专门对人致病。如伤寒沙门氏菌,甲型、乙型、丙型副伤寒沙门氏菌。 第二类群:能引起人类食物中毒,称之为食物中毒沙门氏菌群,如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。 第三类群:专门对动物致病,很少感染人,如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌,此类群中尽管很少感染人,但近年也有感染人的报道。,1,根据侵入机体沙门氏菌菌种的不同,在临床上引起四种不同的疾病: (1)伤寒、副伤寒 由沙门氏属中的伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。 (2)食物中毒 沙门氏菌属引起的食物中毒,主要以肠炎杆菌、鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌和汤普逊杆菌等最为多见。临床症状主要是胃肠炎。病程较短,一般24d, 可完全恢复。 (3)败血症 多为猪霍乱杆菌引起,甲、乙、丙型副伤寒杆菌和肠炎杆菌亦可引起败血症。 (4)慢性肠炎 沙门氏杆菌可引起慢性、持久性肠炎。,2,沙门氏菌广泛分布于自然界,是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各国各类细菌性的食物中毒中,沙门氏菌常居前列。因此,沙门氏菌的检测是各国检验机构对多种进出口食品的必检项目之一。 沙门氏菌不产生外毒素,但能产生毒力较强的内毒素。 沙门氏菌主要通过食物、饮水经口感染。可存在多种食物中,包括生肉、禽、蛋、奶制品、虾、鱼和田鸡腿等。,3,二、沙门氏菌的生物学特性 1、形态与染色特性:革兰氏阴性短杆菌,无芽孢,一般无荚膜,周生鞭毛(除鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外),大多数具有菌毛。 2、培养特性:需氧或兼性厌氧;普通营养琼脂上生长良好,菌落中等大小,无色半透明、圆形、光滑、湿润。,4,3、生化特性: 大部分发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇和山梨酸产气; 一般不发酵乳糖和蔗糖,不发酵侧金盏花醇; 一般不产吲哚,V-P反应阴性; 不分解尿素,苯丙氨酸不脱氨; 三糖铁琼脂斜面常产生H2S。 4、抵抗力:较弱,不耐热,最适温度37,最适pH6.8-7.8。 5、毒素特征:不产外毒素,产毒性很强的内毒素,这是致病的主要原因。,5,6、血清学特性: 沙门氏菌具有复杂的抗原结构。虽然沙门氏菌具有O、H、K和其它表面物质(如菌毛)四种抗原,但只有O抗原是每个菌株均有的成分。 1)O抗原(菌体抗原) *存在于菌体表面,为脂多糖,多糖部分决定其特异性, *O抗原耐热(100、2.5h或121、2h加热均不破坏其抗原性),其特异性不易丧失或变异。 *一个菌体具有一种或多种不同的O抗原。,6,2)H抗原(鞭毛抗原) *H抗原存在于鞭毛中,不耐热,化学成分蛋白质,其抗原性可以被酒精所破坏。 *H抗原可分为两相 第1相:为特异相,用小写英文字母表示,az,Z以后则从z1、z2,已编到z83。 第2相:为非特异相以阿拉伯数字表示,共7种。 具有第1相和第2相H抗原的细菌称为双相菌,大多数沙门氏菌属于此; 仅有一相者称单相菌,如肠炎沙门氏菌。 极少数无鞭毛菌两相抗原都不具有,称为无相菌,如鸡白痢沙门氏菌。,7,3) Vi抗原(包膜抗原) 少数菌沙门氏菌中尚有一种表面包膜抗原,功能与大肠杆菌的K抗原类同,因一般认为它与毒力(Virulence)有关,故称Vi抗原。 经过几次传代、60热处理或石炭酸处理后容易消失。,8,三、 生化反应,9,1、吲哚试验( indol test) 细菌产生色氨酸酶,可分解蛋白胨中的色氨酸,生成靛基质(吲哚),靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰靛基质。 色氨酸 吲哚(无色)对二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚(红色,+ 大肠杆菌) 不产吲哚(无色,- 产气杆菌) 试验方法:取培养24h培养液,先加入少量乙醚,摇动试管以提取和浓缩吲哚,待其浮于培养液表面后,再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴,在接触面呈红色,即为阳性。 应用:用于肠道杆菌的鉴定,10,Indol test 吲哚试验 tryptophan色氨酸indole吲哚玫瑰吲哚 Kovacs reagent吲哚试剂 (对二甲基氨基苯甲醛),- +,E.coli,蛋白胨水试管,11,2、尿素酶(Urease,脲酶)试验 有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子的氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶,因为不论底物尿素是否存在,细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。 酚红: 黄色 红色(+ 普通变形杆菌) 黄色(- 大肠杆菌) 试验方法:挑取1824h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中,摇匀,于361培养,观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面,不要到达底部,留底部作变色对照。培养24h左右,观察结果,如阴性应继续培养至4天,作最终判定,变为粉红色为阳性。,12,Urease Test 尿素酶试验:,urea尿素,ammonia氨,13,3、氨基酸脱羧酶的测定,有些细菌含有氨基酸脱羧酶,使羧基释出,生成胺类和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行,当培养基含胺类时呈碱性反应,使指示剂变色。 接种与观察结果:用幼龄培养液作为菌种,直接接种。接种后封油,对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科的细菌于37培养4天观察。 当指示剂(溴甲酚紫)呈紫色或带红色调的紫色者为阳性,呈黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。,14,15,4、三糖铁(TSI)琼脂试验,试验方法:以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物,穿刺接种并涂布于斜面,置361培养1824h,观察结果。 培养基:乳糖:蔗糖:葡萄糖=10:10:1;加有酚红 本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气(变黄);产生硫化氢(变黑)。 只能利用葡萄糖的细菌,葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄色。,16,17,5、-半乳糖苷酶(ONPG)的测定,ONPG: 邻硝基酚-D-半乳糖苷。具有半乳糖苷酶的 细菌,能使其水解,从而释放黄色的邻硝基酚,ONPG试验 左为阳性(黄) 右为阴性对照,18,四、检测方法,19,从食品中分离和鉴定沙门氏菌,当前通常采用的方法共分5个步骤: 前增菌:食品样品在含有营养的非选择性培养基中增菌,使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。加工食品均应经过前增菌。 (选择性)增菌:此培养基允许沙门氏菌持续增菌,同时阻止大多数其他细菌的增殖。未经加工的食品不必经过前增菌而直接增菌。 选择性平板分离:采用固体选择培养基,抑制非沙门氏菌的生长,提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。 生物化学筛选:排除大多数非沙门氏菌,也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。 血清学技术鉴定培养物菌种。,20,中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2003,TSI(排除A/A H2S结果 ),靛基质,尿素,KCN,赖氨酸,H2S 靛 尿KCN 赖(或一项不符),沙门氏菌血清学试验,H2S 靛 尿 KCN 赖,H2S 靛 尿 KC

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