四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机.ppt

四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及 机制研究,许颖智，张军平，李 明，彭 立，李良军， 张光银，杨 萃，周亚男 天津中医药大学第一附属医院,研 究 背 景,WHO,发达国家,低、中等收入国家,1000万,1900万,死于心血管疾病的患者数目,500万,600万,2007年，271.6万人死于CVD。 每天有7420人死于CVD， 11.6秒死亡1例。,罪犯斑块不在于斑块大小而是斑块结构、成分,斑块破裂 70%,急性心脏事件的病理因素,易损斑块形成过程及病理特征,thin fibrous cap (65um),big lipid core,inflammatory,neoangiogenesis,易损斑块形成过程及病理特征,extracellular matrixde gradation,治疗现状,调脂、抗血小板聚集、介入性冠状动脉治疗、冠状动脉旁路移植术等血管再通治疗 但是每年仍有约两千万人死于急性心血管事件,亟待解决的问题,怎样稳定易损斑块，保护血管，是当前研究的重点和难点 围绕机制，开发思路，深入研究，使中医药在AS治疗彰显优势 中医药具有多靶点、多途径的整体调节作用,滋阴解毒活血,中医AS病机认识,滋阴解毒活血四妙勇安汤,四妙勇安汤最早见于华佗神医秘传，曰:“内服药用金银花三两，玄参三两，当归二两，甘草一两，水煎服。” 清代医家鲍相敖将此方命名为“四妙勇安汤”，收载于验方新编中，具有清养结合、毒瘀并驱的功效，清解络中之毒，化解络中之瘀，滋养络脉之体 临床应用：周围血管病、下肢闭塞性动脉粥样硬化、冠心病 作用机制：抗凝、抗氧化、促血管内皮细胞增殖作用 动脉粥样硬化？途径？,一、动脉粥样硬化易损斑块 模型建立,1w,开始予高脂饮食100g/d,造模方法,维持高脂饮食,经股动脉球囊拉伤术,左肾动脉,左髂总动脉,右肾动脉,右髂总动脉,主动脉弓,球囊（压力约为2个大气压）,左股动脉,备皮,插管,缝合,评价指标,血脂 病理形态 纤维帽厚度 脂池面积 炎症因子 易损指数 新生血管,实验结果 1.复合造模对血脂及ox-LDL影响,造模后TC、LDL-C、 ox-LDL成增高趋势。,2.复合造模对血清炎症因子水平影响,与对照组比较* P0.01,造模因素干预后，血清炎症因子明显增高，CRP明显增高,3.复合造模对内膜的影响,M,Z,HE染色(100倍),造模因素干预后，内膜明显增厚，纤维帽变薄,形成AS斑块,4. 复合造模对脂核、易损指数影响,与对照组比较 * P0.01,VI=(ELA+CD68)/(CA+SMA),造模因素干预后，脂核增大，细胞外脂质增加，炎症细胞增多，平滑肌细胞减少，胶原纤维增多；易损指数增大,造模因素干预后，脂核增大，细胞外脂质增加，炎症细胞增多，平滑肌细胞减少，胶原纤维增多；易损指数增大。,Masson染色(100倍),油红O染色(400倍),CD68免疫组化染色(DAB显色，400倍),-SMA免疫组化染色(DAB显色，400倍),5. 复合造模对脂核、易损指数影响,6.复合造模对斑块内CD31及VEGF表达的影响,CD31,造模因素干预后，斑块内可见内皮细胞组成的连续或不连续的小管腔,CD31和VEGF表达呈强阳性。,VEGF,免疫组化染色(DAB显色，400倍),小 结,本实验模拟人AS发病机制综合多种因素，以高脂饲喂叠加 免疫生物损伤和内皮损伤的复合因素制作模型，更接近于 人体AS的发生发展过程 通过对家兔血脂、血清炎症标志物及斑块的病理形态、脂 质成分、炎症反应、血管新生、胶原含量、易损指数等的 综合分析，证实建模成功 可操作性、重复性、稳定性、易于评价,二、四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损 斑块内细胞外基质的影响,研究方法,易损斑块动物模型建立成功后，以辛伐他汀（5mg/kg)作为阳性对照，观察四妙勇安汤对模型病理形态、易损指数、斑块内细胞外基质的影响，明确其稳定斑块的作用机制。,斑块内 脂质含量,1,-SMA ，MMP-9， NF-B,2,3,4,评价指标,胶原含量 （CA）,内中膜及 纤维帽厚度,1.四妙勇安汤对主动脉内膜及纤维帽的影响,与正常组比较P0.01,与模型组比较P0.05,# P0.01。,Z,M,X,S,模型组：内膜明显增厚; “纤维帽”较薄;内皮部分脱落，大量脂质沉积，泡沫细胞 及炎性细胞浸润;中膜平滑肌减少，弹力板不连续，弹力纤维断裂溶解 给药组：内膜增厚，有少量泡沫细胞形成，内皮完整，中膜平滑肌增殖，弹力板尚 完整,HE染色 100倍,2.四妙勇安汤对斑块内脂质含量的影响,模型组ELA,LNA/PA,CD68高于正常组，四妙勇安汤可降低易损指数，降低LCA/PA、ELA、CD68阳性面积百分比。,与正常组比较， * P0.01；与模型组比较，P0.05,# P0.01,3.四妙勇安汤对斑块内CA、-SMA的影响,注：与正常组比较*P0.01,与模型组比较P0.05, P0.01,模型组斑块内CA高于正常组, -SMA低于正常组，四妙勇安汤可升高斑块内CA、 -SMA阳性面积百分比。,4.四妙勇安汤对斑块内MMP-9,NF-B的影响,与正常组比较P0.01,与模型组比较P0.05,# P0.01。,模型组斑块内MMP-9,NF-B蛋白表达明显增高，四妙勇安汤能够抑制MMP-9,NF-B蛋白表达,讨 论,运用复合因素造模方法建立兔AS斑块模型，并从血脂、血清炎症标志物、主动脉病理形态、纤维帽厚度、斑块内炎症反应、脂质成分、血管新生、胶原含量、易损指数等方面综合分析，证实建模成功 依照动脉粥样硬化斑块不稳定 “阴虚毒瘀”的中医病机。运用具有滋阴活血解毒之功效的四妙勇安汤对动脉粥样硬化模型兔进行干预，明确其稳定AS易损斑块的作用机理,四妙勇安汤可延缓血管壁的病变进展，降低内膜厚度及脂核面积、增加纤维帽厚度 抑制降低斑块内脂质含量、使具