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4801-1984 谷类籽粒赖氨酸测定法 染料结合赖氮酸DBL法 谷类籽粒赖氨酸测定法 染料结合赖氮酸 DBL法 谷类籽粒赖氨酸测定法染料结合赖氮酸DBL法

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内容简介：

中华人民共和国国家标准 谷类籽粒赖氨酸测定法 染 料结合赖氮酸 ( D B L)法 UDC 口8 . 1 : 8 4 8 。 8 6 2 GB 4 8 81 一 .4 Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f l y s i n e i n c e r e a l g r a i n s -Dy ，一b i n d i n g l y s i n e me t h o d 本标准适用于测定水稻、玉米、高粱、麦类等 谷类籽粒的赖氨酸含量。 1 原理 在p H2 左右缓 冲体系中 ， 样品蛋白 质的碱性氨 基酸 ( 赖氨酸、 组氨酸、 精氨酸)可与偶氮 磺酸染 料酸性橙1 2 等 摩尔结合，生成不溶性络合物，其染料结合量 ( 摩尔数)相当 于此三种碱性氨基酸的总 和。若另 取一份样品，先用丙 酸醉将蛋白 质中 赖氨酸的 一 氨基掩蔽 ( 丙酞化作用) ， 使之失去与染料 结合的能力，然后再与染料反应，所得染料结合垦只是组氨酸和精氨酸之和。根据两次染料结合量的 差值，便可算出 该样品中 的赖氨酸含量。 2 仪器、设备 2 . 1 分析天平:感量0 . 4 - 9 . 2 . 2 实 验室用粉碎机。 2 . 8 G X D一 2 0 1 型蛋白 质分析仪或G X D L一 2 0 2 型蛋白 质赖氨酸分析仪主机。 2 . 4 实 验室用电 动 往复振荡机。 2 . 5 离心 、机:3 0 0 。 一 4 o o o r / m i n , 2 . 6 3 0 一 3 5 m l 具 塞玻璃管 或聚乙 烯管。 2 . 7 定量加液器或移液管:2 0 . 2 、0 . 2 - 1 . 2 . 8 容量 瓶:1 0 0 0 . l 0 0 m l 。 3 试剂 试剂除注明者外均为分析纯。 3 . 1 草酸一 乙酸一 磷酸盐缓 冲溶液:3 . 4 6 磷 酸二氢钾 和2 0 9 草酸( 执C 2 0 , . 2 H 2 0) 分别溶于 热水 后，全部 转移到1 0 0 0 - 1 容量瓶中。再加人1 . 7 - 1 8 5 %磷酸，6 0 m 冰乙 酸，1 m l 丙酸， 冷却至室温， 用 蒸馏水定容。 3 . 2 3 . 8 9 -M酸 性橙1 2 ( A c i d O r a n g e 1 2 ， 缩写成 O一 1 2 ， 分子 式为C 18 H l l 0 4 N 2 S N a ， 生化 试 剂，层析纯，含量 不少于9 0 %)染料溶液，准确称取1 . 3 6 3 6 酸性橙1 2( 纯度按1 0 0 % 计) ，溶解于热的 缓冲溶液后，再定量转移到1 0 0 0 - 1 容量 瓶中，冷却至室温，用缓冲溶液定容。 3 . 3 1 6 % 和8 % ( W / V)乙酸钠溶液:称 取1 6 . 0 9 和8 . 0 9 乙酸钠 ( 按无水乙 酸钠计) ， 配成l o o m , 溶液。 3 . 4 丙酸醉:化学纯。 4 标准曲线的 绘制 配制1 . 2 0 , 1 . 3 0 , 1 . 4 0 , 1 . 5 0 , 1 . 6 0 , 1 . 7 0 , 1 . 8 0 m M酸 性橙1 2 染料标准系列溶液， 在GX D 国家标准局1 9 8 4 一 1 2一 2 0 发布 1 9 8 5一1 0一0 1 实施 GB 4 8 0 1 一 84 2 0 1 型蛋白 质分析仪上侧定透光率 ( 为提高灵敏度，用连续档测定。即以4 0 - 1 3 . 8 9 m M染料溶液加 2 5 m l 缓冲溶液，调透光率为。 ;4 0 m 1 3 . 8 9 MM染料溶液加1 2 5 m 1 缓冲溶液，调透光率为8 7 ) ,然后以 透光率 ( %)为纵坐标，染料浓度 ( mm)为横坐标， 在半对数座标纸上绘制标准曲 线。或将透光率 换算为 吸光度，计算回归方程。若用G X D L一 2 0 2 型蛋白 质 赖氨酸分析仪，则可直 接读出吸 光度 ， 然 后以吸光度E 为纵坐标，染料浓度 ( m M)为横坐标，在普通坐标纸上绘制标准曲线，或计算回归方 程。 5 测定步骤 5 . 1 试样的选 取与制备 选取有代表性谷类籽粒，挑拣干净，按四分法缩减取样， 取样量不得少于2 0 g 。将籽粒充分风干 或放在5 5 - 6 0 烘箱中千燥六小时以上。带壳水稻、高粱，先脱壳， 再用粉碎机粉碎，使9 0 以上通 过0 . 2 5 m m筛孔，充分混匀，装人磨口 瓶中备用。 5 . 2 称样 参照表1 称 样量，和 橄酞化和不酞化样品各两份， 准确到0 . 4 m B ， 分别放人3 0 . 3 5 - 1 具塞玻璃管 内，标明为A 管 ( 酞化样品)和B 管 ( 不酞化样品) 。与此同时，另稍 样品， 按G B 3 5 2 3 -8 3 谷类、 油料作物种子水分测定法测定水分含量。 谷类籽粒的称样量9 样品名称酞化样品不 政 化 样 品 水稻0 . 7 或0 . 80 . 5 或0 . 6 普通玉米0 . 80 . 6 高 赖氮酸玉米0 . 7 或0 . 50 . 5 或0 ， 高粱 1 . 00 . 7 麦类0 . 5 0 . 4 注:称样量系根据试脸选定的，如果剩余染料溶液的浓度超出1 . 2 一 1 . 8 m M时，称样量应作适当调整。 石 . 3 丙 酸化反应 各管分别加 人2 . 0 0 m l 1 6 %乙 酸 钠溶液 ( 釉稻加8 %乙 酸 钠溶液) ， 然后加。 . 2 0 m 1 丙 酸醉于A 管中， 加。 . 2 0 - 1 缓冲溶液于B 管中。盖紧塞子，放置振荡机上振荡十分钟。 5 . 4 染料结合反应 向A , B管中分别加人2 0 . 0 0 m 1 3 . 8 9 I n M染料溶液， 盖紧塞子， 置振荡机上振荡一小时( 水稻两 小时) 。 5 . 5 离心 将上述反应液于3 0 0 0 一4 0 0 0 r / m i n 下离心十分钟。 5 . 6 测定 在G X D一 2 0 1 型蛋白 质分析仪 或G X D L一 2 0 2 型蛋白 质 赖氨酸分 析仪上测 定上清液( 即剩余 染料 溶液) 的透光率T 值 或吸光度E 值。 注:一般谷类样品丙 酞化反应和染料结合反应不得低于1 0 U，水稻样品还应在1 8 一3 4 下进行。 标准分享网 w w w .b z f x w .c o m 免费下载 w w w . b z f x w . c o m GB 4 8 0 1 一 8 4 6 结果计算 6 . ， 计算公式 由测 得的透光率T 值或吸光度E 值 ，从标准曲线上查出或用回归方程计算 得到相应的剩余染 料溶 液的浓度 ( m M) ，则样品中赖氨酸含量的计算公式为 赖 氨 酸 ( 肠 ， 干 基 ) = 3 . 8 9 一 1 . 1 1 X CB 叭 ( 1 一 H) 3 . 8 9 一 1 . 1 1 x CA、 WA ( 1 一 H)1 0 0 0 x 止4 6 .三x 1 0 0 0 1 0 0 式中:C A . C B 分别为酞化与不酞化样品的剩余染料溶液浓度，m M, WA . We 分 别为酞化与不酞化 样品的称样量，9， H 样品的水分率， 2 0 一加人染料溶液体积，m l ， 1 . 1 1 - ( 2 0 +2+ 0 . 2)与2 0 之体积比。 3 . 8 9 -酸性橙1 2 染料溶液浓度，m M, 1 4 6 . 2 -1 m o 1 赖氨酸的质量，9 . 二2 结果的表示 两个平行 样品的测定结 果用算 术平 均值表示， 小数点 后保留两 位， 第三 位小数 按G B 1 . 1 -8 1 ( 标 准化工作导则 编写 标准的一般规定附录C规定取舍。 . 3 允许差 两个平行 样品赖氨酸测定值之差不得大于。 . 0 3 % . w w w . b z f x w . c o m GB 4 8 0 1 一 8 4 附录A 使用低浓度染 料溶液 侧定法 ( 参考件) A. 1 本标准采用3 . 8 9 m M酸性橙1 2 染 料溶液。 试脸证明， 使用1 . 2 8 4 m M染料溶液， 也得到与3 . 8 9 m M 近似的结果，只是在精密度和准确度方面稍差。 但低浓度有其优点，即不论那类谷物，称样量一律定 为0 . 1 8 8 ( 0 . 2 0 9 ) 和0 . 1 3 9 ， 且可节约试剂及样品用量。 A. 2 用1 . 2 8 4 m M染 料溶 液时， 其测定方 法除 下述几点 有所不同 外，其余 均与标准条文条 款相同 。 A . 2 . 1 称样量 均为0 . 1 8 9( 梗稻为0 . 2 0 9 )和0 . 1 3 9 0 A . Z . 2 绘制标准曲线:配制0 . 5 0 , 0 . 5 5 , 0 . 6 0 , 0 . 6 5 , 0 . 7 0. 0 . 8 0 , 0 . 9