选修1微生物的利用.ppt

选修1 生物技术实践,第37讲 微生物的利用,本讲目录,回归教材夯实基础,知能演练轻巧夺冠,高频考点深度剖析,易错辨析技法提升,1灭菌原因：为了获得纯净的培养物，关键是防止外来杂菌的污染。 2无菌操作的条件 (1)各种器皿必须是无菌的； (2)各种培养基必须是无菌的； (3)细菌转移操作的过程必须是无菌的。,3三种常用灭菌方法的比较,4.避免被杂菌污染的方法 (1)注意灭菌操作原则，灭菌彻底，降低环境污染几率，手和实验服要清洁，减少操作时间，对污染源的改善考虑周到。 (2)注意微生物生长条件，如pH、渗透压、温度等。细菌喜中性偏碱的环境，喜蛋白质丰富的营养物质，喜37 的温度；而霉菌喜中性偏酸的环境，喜糖类丰富的营养物质，喜2530 的温度。因此，可以根据不同微生物的“喜好”来减少污染。,1大肠杆菌 (1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。 (2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。 2培养：实验中用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌。,3分离(实验部分),4.菌液划线分离的方法 5保存菌种 用接种环取出单个菌落，用划线法接种在斜面培养基上，37 培养24 h后，4 冰箱保存。,特别提醒 平板划线法中的注意事项 (1)取菌种之前及每次划线之前都需要将接种环灼烧灭菌,划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表： (2)从第二次以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,1实验原理：脲即尿素，是蛋白质降解的产物。有一些细菌含有脲酶可以分解尿素，利用尿素作为其生长的氮源。 2实验目的：从土壤中分离出能利用尿素的细菌，了解它在生态平衡中的作用，并与LB全营养培养基做对照。 3实验步骤： (1)制平板：在酒精灯火焰旁将LB固体培养基和尿素固体培养基分别倒在两个培养基养皿中,超净台摇匀,平放至凝固。,(2)制备细菌悬液：将1 g土样依次稀释出102、103、104和105土壤稀释液，备用。 (3)用涂布分离法分离细菌：取104和105土壤稀释液，分别加到LB培养基和尿素培养基的培养皿中，再用刮刀将菌液涂布到整个平面上。 (4)培养：将培养皿倒置，在37 恒温培养上2448 h。 (5)观察：全营养培养基中有较多的菌落，而尿素为氮源的培养基平板中只有少量菌落。 选择培养基,特别提醒 (1)在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。 (2)在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。加入高深度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。,(3)培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。改变微生物的培养条件也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。,考题链接 培养基的种类及灭菌技术 (2011高考新课标全国卷)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题： (1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于_培养基。,(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_和_。 (3)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力_。 (4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。,【解析】 (1)从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株，使用的培养基应是以原油为唯一碳源的选择培养基，通过控制碳源这种营养成分，来促进能高效降解原油的菌株的生长，抑制其他微生物的生长。 (2)菌种纯化培养时，常采用平板划线法和稀释涂布平板法接种。 (3)当固体培养基上长出单菌落后,可通过比较菌落周围分解圈的大小，来判断菌株降解原油能力的大小。一般来说，分解圈越大说明该菌珠的降解能力越强，反之则越弱。,(4)实验室培养微生物的过程中，常用灼烧灭菌法对接种环、接种针、试管口、瓶口等进行灭菌；用高压蒸汽灭菌法对培养基、试管等进行灭菌；用干热灭菌法对玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等进行灭菌。实验操作应在酒精灯火焰旁进行，因为酒精灯火焰旁可形成一个无菌环境，可防止微生物的污染。 【答案】 (1)原油 选择 (2)平板划线法 稀释涂布平板法 (3)强 (4)干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰,请回答： (1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有_，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现_色环带。 (2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_灭菌。 A高压蒸汽 B紫外灯照射 C70%酒精浸泡 D过滤,(3)步骤X表示_。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液_到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得_菌落。 (4)在培养时，需将培养皿倒置并放在_中。若不倒置培养，将导致_。 (5)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的_分解为NH3和14CO2。,【解析】 (1)幽门螺杆菌含有脲酶，能分解尿素为菌体提供氮源，因此在配制培养基时要加入尿素；加入酚红指示剂的目的是检验是否有Hp存在，若有Hp存在会分解尿素，培养基pH会升高，酚红指示剂将变红。(2)由于尿素在高温下会分解，所以对尿素溶液的灭菌要采用G6玻璃漏斗过滤的方法。(3)在实验操作过程中要先灭菌、倒平板，再进行接种。接种时先将菌液稀释，以获得单菌落，再涂布到培养基平面上。(4)培养时需将培养皿倒置并放在恒温箱中培养，倒置培养的目的也是为了获得单