原发性肝癌基因治疗.ppt

原发性肝癌的基因治疗,演讲者：谢菲 张涵,原发性肝癌(Primary hepatic carcinoma，PHC)是常见的恶性肿瘤之一。目前对PHC主要治疗方法有手术治疗、放疗、化疗以及综合治疗等，然而治疗效果并不理想。随着分子生物学和免疫学技术的发展，基因治疗技术在肿瘤的治疗中具有广阔的前景。基因治疗的方式有两类，一类为基因矫正和置换；另一类为基因增补，不去除异常基因，而是通过外源基因的非定点整合，从而补偿缺陷基因的功能，达到治疗目的 。,目前世界上对原发性肝癌的治疗方法 .手术治疗-强调前期诊断和治疗 （目前最普遍的方法） .原位肝移植治疗（肝移植适用于小肝癌合并严重肝硬化的患者 ） .化学治疗与药物治疗（如阿霉素（ADM) 、顺铂（DDP) 、喃氟啶等 ） .肝动脉栓塞化疗 （用于化疗栓塞的药物有5-氟脲嘧啶、丝裂霉素、顺氯氨铂、阿霉素等。 ） . 经皮药物注射治疗 .物理疗法 . 基因治疗,基因治疗,1.反义基因治疗 2.自杀基因治疗 3.免疫基因治疗 4.抑癌基因治疗 5.抗血管生成基因治疗 6.RNA干扰技术的应用,基因治疗,反义基因包括反义RNA、反义DNA和核酶。 原理：根据碱基互补的原理，利用与目标基因特定序列互补的短链核苷酸片段来封闭目标基因表达，或利用核酶与相应的mRNA结合使其降解，均可达到基因治疗的目的,1 .反义基因治疗,基因产物大量表达 癌基因及生长因子的,某些基因的异常表达水平和翻译水平阻断 应用反义核酸在转录,常分化轨道或凋亡。 传导，癌细胞进入正 阻断癌细胞内的异常,抑制肿瘤生长,2 .自杀基因治疗,某些病毒、细菌等原核生物含有一类基因，其编码的酶能将原来无毒的药物前体转化为具有细胞毒性的代谢物而杀伤宿主细胞，这类基因称为“自杀基因”。 原理:是某些病毒、细菌中特有的前药转换酶基因一自杀基因，用基因工程技术构建在一定的表达载体上，并导入肿瘤细胞中。自杀基因编码的特异性酶类能将无毒药物前体在肿瘤细胞中代谢成毒性药物，达到杀死肿瘤的目的.,自杀基因导人体内 特有的转换酶基因，,产物。 转成细胞毒性代谢 或低毒的药物前体 其产生的酶将无毒,杀死肿瘤细胞,3 .免疫基因治疗,免疫基因治疗通过基因重组技术增强机体的抗肿瘤免疫功能而达到治疗肿瘤的目的，目前采用的有如下几种方法。 基因疫苗 免疫刺激性因子 共刺激分子 活化的淋巴细胞进行过继免疫治疗 DC为基础的免疫治疗,基因疫苗 概念：DNA疫苗，即将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导人人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。,DC为基础的免疫治疗 Dc是体内最强专职抗原递呈细胞，能有效刺激静息的细胞，诱发初次免疫应答，还具有发动和调节抗肿瘤免疫反应的特性。,4.抑癌基因治疗,抑癌基因也称为抗癌基因。正常细胞中存在基因，在被激活情况下它们具有抑制细胞增殖、促进细胞分化、抑制细胞迁移作用，但在一定情况下被抑制或丢失后可减弱甚至消除抑癌作用的基因。正常情况下它们对细胞的发育、生长和分化的调节起负调控作用。 肿瘤抑制基因的功能丧失与细胞恶性转化有关 。实验研究发现，恢复抑癌基因可以逆转恶性细胞的表型 。然而，其临床应用面临很大的困难。,P53,野生型p53基因是最常见的抑癌基因，肝癌组织中常能检测到p53基因突变。当细胞缺少有功能的p53时，基因突变加剧，导致恶变、进展以及治疗抵抗 。 研究发现，p53基因功能的恢复可增强肿瘤细胞凋亡的敏感性。 重组人p53腺病毒注射Gendieine，携带治疗基因p53进入肿瘤细胞内，使其发挥抗肿瘤增殖作用。,5. 抗血管生成基因治疗 恶性肿瘤的生长和转移依赖于新生血管的形成。为了不断地获得氧和养料，肿瘤细胞就要不断的分泌血管生成因子，促进新生血管的形成。研究表明，腺病毒转染的突变纤溶酶原基因，可以生成一种血管抑素样的分子，抑制肿瘤的生长；另有试验表明，用脂质体法转染反义RNA对抗血管内皮生长因子，能够抑制裸鼠的种植性肝癌的生长。最后有研究 表明ILl2基因转然产生的抗肿瘤效果，主要也是因为其抗血管活性。,RNA 干扰技术（RNAi）也称为基因沉寂(Gene silencing)疗法，是一种在真核生物体中广泛存在的通过双链RNA 分子在mRNA 水平上诱导特异性序列基因表达部分或完全抑制的过程。,6 .RNA干扰技术的应用,利用RNAi技术可同时阻断多个癌基因的转录表达，从而有效抑制肿瘤的生长，达到治疗肿瘤的目的。 除了抑制突变基因外，RNAi还可以减弱相关过表达基因，如p一糖蛋白，它是MDR1基因表达产物，与肿瘤多药耐药性有关，设计VEGF特异性siRNA，可用于抗肿瘤血管生成，或者用来抑制染色体转位造成异常激活的原癌基因。,展望,当前对肝癌基因治疗的研究虽然取得了很多有意义的结果，但仍有许多问题，为了提高疗效减少毒性作用，关于基因治疗的深入研究是很有必要的。将来的发展方向主要 集中在下列几方面。(1)寻找转染效率高、基因容量高、毒性小的基因治疗载体。(2)开发基因表达实现可调控的基因转染系统。(3)寻找新的理想的治疗基因，或者联合应用几种治疗基因。(4)试验并寻找理想的治疗载体、输