细菌的染色技术及大小的测定.ppt

实 验 三,细菌的染色技术及微生物大小的测定,第一部分 细菌的染色技术,目的要求 染色剂和染色的原理 实验材料 实验程序,目的要求,掌握微生物的染色原理 掌握染色的基本操作技术 掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法,染色剂和染色原理,微生物染色的基本原理：细菌机体无色透明，与背景反差小，可将细菌染色，增加其反差；细菌在通常培养状态下总带负电荷，故可用带正电荷的碱性染料染色。 染色剂 染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型： 1. 酸性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。 2. 碱性染料：一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。 3. 中性（复合）染料：如伊红、美兰等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于细胞核染色）。 4. 单纯染料：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类的染料。,染色剂和染色原理,微生物染色常用染料如下表：,实验材料,显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯。 石炭酸复红染液、草酸铵结晶紫染液、革氏碘液、95乙醇、蕃红染液 菌种：枯草杆菌、大肠杆菌,实验程序 （细菌染色的方法和步骤）,细菌染色的方法: 1. 简单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察微生物的大小、形状和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 2. 复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。 染色技术的一般过程 涂片 干燥 固定 染色 媒染 脱色 复染 水洗 干燥 镜检,实验程序 （简单染色的方法和步骤）,简单染色法(一般染色法) 1.涂片 2.干燥：自然晾干或酒精灯高处微微加热。 3.固定 4.染色：在整个涂面上滴加染色液，染色min。 5.水洗：倾去染液，用自来水细流冲洗至流下的水中无染料颜色为止。 6.吸干 7.镜检,实验程序 （革兰氏染色的方法和步骤）,革兰氏（Gram）染色法 1. 涂片、干燥、固定 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液染1min，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：加革氏碘液媒染1min，水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约30s45s，接着立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液染1min，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。,第二部分 细菌大小的测定,目的要求 学习使用目测微尺和物测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。,测定的工具：目测微尺和物测微尺 目测微尺是一圆形玻片，其中央刻有5mm长、等分为50格的标尺，每格的长度随使用目镜和物镜的放大倍数及镜筒长度而定。使用前用物镜测微尺标定，用时放在目镜内。 物测微尺是一厚玻片，中央有一圆形盖玻片，中央刻有1mm长的标尺，等分为100格，每格为10m用以标定目测微尺在不同放大倍数下每格的实际长度。,目测微尺的标定： 将目测微尺装入目镜的隔板上，刻度朝下；把物测微尺放在载物台上，刻度朝上。 用低倍镜找到物测微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺使两者的第一条刻度线重合，顺着刻度找出第二条完全重合的刻度线。 计算两刻度间目测微尺的格数和物测 微尺的格数。 由于物测微尺的刻度每格长10m，得,菌体大小的测定 取下物测微尺，将细菌染色标本置于载物台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。 注