高效液相色谱法测.ppt

高效液相色谱法测定垂盆草中槲皮素的含量,学院： 化学化工 班级： 09化学 姓名： 冯晶 学号：099060141028,摘 要 目的：建立高效液相色谱法测定垂盆草中槲皮素含量的方法。方法：采用Waters2487, 流动相为甲醇-水（50：50），检测波长360nm，流速0.800ml/min，柱温为30。结果：槲皮素质量与峰面积有良好的线性关系，线性范围为0.020.4ug（r=0.9994）。槲皮素的平均加样回收率为93.12%，RSD=0.86。结论：该方法简单、重现性好，结果准确可靠，可用于垂盆草中槲皮素的质量控制。 关键词：高效液相色谱法；垂盆草；槲皮素,实验部分 一.仪器与药品 1.1 仪器 LC-10ATvp高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器(日本岛津公司)；N3000色谱工作站（浙江大学），FA2004电子天平（ShangHai Balance Instrument Factory of P.R China），KQ-100DA型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），微量进样器（宁波市镇海玻璃仪器厂），超纯水仪。 1.2试剂和药品 槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100081-200907供HPLC法含量测定），垂盆草药材。甲醇为色谱纯，水为超纯水。其他试剂均为分析纯。 二.实验方法与结果,2.1色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS-C18(250mm 4.6mm,5um)(日本岛津公司)，流动相为甲醇-水（50：50），检测波长360nm，流速0.800ml/min，柱温为30， 2.2对照品溶液的制备 精密取槲皮素2mg置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解，稀释定容后超声处理30分钟，摇匀,作为对照品储备液4 （1ml 中含有槲皮素0.08mg）。对照品的HPLC色谱图见图1,图1对照品溶液的色谱图,2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过二号筛）约0.5g，精密测定，加入甲醇-25%盐酸溶液（4：1）混合溶液25ml,称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇-25%盐酸溶液（4:1）混合溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。,图2供试品溶液的色谱图,2.4 线性关系的考察 精密量取上述0.08mg/ml的对照品溶液。分别准确量取4ul、 6ul、8ul、10ul、12ul溶液进样。以峰面积Y（m vs）为纵坐标，质量（ug）为横坐标，进行线性回归分析。得到回归方程为Y=1.8106X -3.3105 ，r=0.9994.表明槲皮素在0.020.4ug范围内与峰面积积分呈良好的线性关系6。,图4 线性关系考察图,2.5精密度实验 每次精密吸取上述对照品溶液10ul,连续进样6次，记录色谱峰的峰面积，平均峰面积为A=8587509。槲皮素峰面积的RSD为1.52%，结果表明，仪器的精密度良好。 2.6稳定性试验 取对照品溶液，按上述色谱条件，分别在0小时、6小时、12小时、18小时、24小时进样测定，记录峰面积，得到其峰面积的RSD为1.37%，表明24h内对照品溶液中槲皮素稳定性良好。 2.7重复性实验 取0.02g/ml的供试品溶液5份，按供试品溶液含量测定方法操作并测定槲皮素的含量，其结果RSD为1.47%，重复性良好7。,2.8 回收率试验 精密称取样品0.5g，用一定量的甲醇溶解，加入0.26mg的对照品，重复进样5次，每次进样10ul,根据色谱峰的峰面积计算槲皮素的含量及回收率。,2.9样品含量测定 取“2.3”节中配置的样品溶液5ul在上述色谱条件下进行含量测定8,三.讨论 3.1 实验方法结论 与容量法测定生物碱含量9的方法相比，该方法精密度高、分离度好、重现性良好，结果准确可靠。 3.2色谱条件的选择 流动相：流动相也可以是为乙腈-水系统,但据相关文献10甲醇-水系统分离