疫学实验课沉淀反应.ppt

1,免疫学诊断、沉淀反应,2,实验室安全门窗、水、电、火源 实验结束后关闭门窗、水、电、火源 酒精灯和易燃物的使用注意事项；棉塞着火须报告老师 电源空气开关 水的使用 实验室安全生物安全 白大褂的穿着要求 不得将实验无关物品带入实验室 不得在实验室内饮食 不得擅自开UV灯 污染及潜在污染物品须进行消毒处理,实验室规则要点,3,实验课要求 遵守上述规则 必备物品：实验指导、实验报告、红蓝铅笔、白大褂 注意保护自己、爱惜实验室仪器和设施 按照实验要求，认真完成实验并如实记录实验报告 实验结束后整理本组的台面 实验废弃物分类（污染/潜在污染物、普通废弃物）放置； 在确认普通废弃物没有着火隐患后，倒入垃圾桶,实验室规则要点,4,值日生的职责： 检查实验台面的整理 整理实验室及垃圾 关闭所有非必需的电器和电源 逐一检查并确认水槽水龙头的关闭 关闭窗、门 最后离开实验室,实验室规则要点,5,1. 录像 2. 双向免疫扩散试验（操作） 3. 对流免疫电泳（示教）,本次实验内容,6,类型： 单向免疫扩散,免疫比浊法,双向免疫扩散,对流免疫电泳,沉淀反应: 可溶性抗原（血清蛋白质、细胞裂解液、组织浸液、微生物蛋白等）与相应抗体，在一定的抗原抗体比例下，在一定离子浓度的缓冲体系中，发生结合后出现沉淀物称沉淀反应。 沉淀原，沉淀素。 环状法、絮状法、琼脂扩散法,7,2. 可见性,3. 可逆性,1. 特异性,抗原抗体反应的特点（比例合适!）,8,(三) 影响抗原抗体反应的因素,1.温度： 一般最适温度为37 4，过夜,2.电解质：常用生理盐水 离子强度，盐析,3.pH：一般最适pH6-8 电荷，等电点,9,(1)单向免疫扩散,抗原的定量技术 Method: Ab- in gel Ag- in well,10,该方法常用于患者血样中IgG、IgM以及C3含量的检测 Q: 如使用单向免疫扩散试验检测患者血样中的IgG，那么患者血样是放在琼脂糖胶中，还是放入孔中？,11,(2)双向免疫扩散,抗原或抗体的定性、组成和两种抗原的相关性分析。 抗原抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向四周扩散;两者相遇时在比例合适处形成沉淀线。,抗原,抗体,12,13,双向琼脂扩散试验,14,(3)对流免疫电泳检测血清中AFP,1、3孔加抗AFP抗体 2孔，AFP阳性对照血清 4孔，待检血清 pH 8.6巴比妥缓冲液,1,2,3,4,+,-,15,电场力,pH8.6,pI7.5,pI4.8,琼脂糖：在pH8.6的缓冲液中带负电,与琼脂糖接触的可移动液体：带正电,电渗力,合力 移动方向,16,对流免疫电泳,17,双向免疫扩散实验 (操作),1. 琼脂板的制备 (3-5ml) ； 2. 打孔； 3. 加样； 4. 湿盒扩散；37C，24h,1,2,3,4,5,6,Ag,1,2,3,4,5,6,Ag,Note 1块玻片上打2套孔，选较好的进行后续试验； 注意检查加样样品是否正确，加样时勿溢出； 将玻片的左上切去一小角，按