骨髓活体组织检查.ppt

,骨髓活体组织检查,Pianese(1903年)首先创用套管针在腓骨骨骺进行骨髓穿刺术 Ghedini(1908)年在胫骨上三分之一部位进行骨髓环钻术 Seyfarth(1923年)选择胸骨作环钻术 1929年Arinkin使用骨髓穿刺针抽吸髓液涂片作为血液病的检查方法以来,骨髓活检似乎已由骨髓穿刺涂片检查所代替。,但是由于抽吸骨髓往往被窦血所稀释,Berlin用同位素检查稀释度为40100%,有时干抽或抽出的髓液不能确切地代表骨髓细胞的增殖情况;而骨髓活检组织切片可以观察造血组织的完整结构包括细胞的多寡及其分布、脂肪组织、有无肿瘤细胞等,骨髓穿刺检查反映的是血细胞数量、形态、比例的改变，不能有效反映骨髓组织结构及间质成分的变化，了解骨髓造血组织结构与细胞之间以及组织之间的相互关系对很多血液系统疾病的诊断具有重要意义。,骨髓活体组织检查（bone marrow biopsy，BMB）简称骨髓活检，是观察骨髓组织结构和空间定位，补充骨髓涂片的有效方法。,方法,1选择检查部位 骨髓活组织检查多选择髂前上棘或髂后上棘。 2体位 采用髂前上棘检查时，病人取仰卧位；采用髂后上棘检查时，病人取侧卧位。,3.麻醉 常规消毒局部皮肤，操作者戴无菌手套，铺无菌洞巾，然后行皮肤、皮下和骨膜麻醉,4.穿刺 将骨髓活组织检查穿刺针的针管套在手柄上。 操作者左手拇指和示指将穿刺部位皮肤压紧固定，右手持穿刺针手柄以顺时针方向进针至骨质一定的深度后，拔出针芯，在针座后端连接上接柱（接柱可为1.5cm或2.0cm），再插入针芯，继续按顺时针方向进针，其深度达1.0cm左右，再转动针管360，针管前端的沟槽即可将骨髓组织离断。,5取材 按顺时针方向退出穿刺针，取出骨髓组织，立即置于95乙醇或10甲醛中固定，并及时送检。 6加压固定 以2碘酊棉球涂布轻压穿刺部位后，再用干棉球压迫创口，敷以消毒纱布并固定,注意事项,1开始进针不要太深，否则不易取得骨髓组织。 2由于骨髓活组织检查穿刺针的内径较大，抽取骨髓液的量不易控制。因此，一般不用于吸取骨髓液做涂片检查。 3穿刺前应检查出血时间和凝血时间。有出血倾向者穿刺时应特别注意，血友病病人禁止骨髓活组织检查。,适应症 1.骨髓穿刺多次失败（怀疑骨髓纤维化、骨髓转移癌、多发性骨髓瘤、多毛细胞白血病等）。 2.血象显示全血细胞减少，反复骨髓穿刺均为“血稀”或骨髓增生低下，病态造血、怀疑再生障碍性贫血、骨髓异常增生综合征及增生性白血病患者。,3.某些贫血、原因不明的发热、脾或淋巴结肿大，骨髓涂片不能确诊。 4.白血病疗效观察：有时骨髓涂片已达到完全缓解，但骨髓活检切片内仍可检出白血病性原始细胞簇。,骨髓穿刺与骨髓活检的比较,1.全面了解骨髓增生程度，造血组织、脂肪细胞和纤维组织所占的容积比例：了解粒/红比值及骨髓内铁存储情况，对于某些疾病（如再生障碍性贫血、缺铁性贫血及骨髓增生异常综合征）及化疗后骨髓抑制程度有明确的诊断价值。,临床意义,2.可以发现骨髓穿刺涂片检查不易发现的病理变化，当骨髓增生极度活跃或极度减低，纤维组织增多及骨质增生而发生干抽或骨髓稀释是活检格外重要。如低增生白血病、多毛细胞白血病、骨髓纤维化、骨髓坏死、恶性肿瘤累及骨髓等。对相关疾病的诊断、骨髓造血微环境及骨髓抑制的研究有重要意义。,3.活检比涂片能较早地预测疾病的预后。因活检比涂片能更早、更全面地发现早期的病理改变，对各种急慢性白血病和骨髓纤维化异常增生综合征有确诊和判定预后的意义，对骨髓转移癌、恶性组织细胞病、戈谢病和尼曼匹克病等诊断阳性率比骨髓涂片高。,4.活检可协助诊断慢性骨髓增生性疾病，如真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、骨髓纤维化等。,骨髓活检在血液肿瘤细胞中起辅助作用，结合骨髓涂片结果才有诊断价值。,尤其是骨髓“干抽”患者，干抽的材料处理特别重要，最好不经过脱钙，塑料包埋亦需低温。可以做多种免疫标记，还可以进行原位杂交，聚合酶链反应。经抽提后还可以进行比较基因组杂交、基因重组、芯片技术等分子水平诊断。 脱钙去除骨质中的无机盐，不容易做免疫组化。,造血细胞培养检验,体外造血祖细胞培养或造血细胞克隆形成实验（colony-stimulating assays，CSA）主要就是体外模拟体内的生理环境，培养从机体取出的造血祖细胞，使之生存、增殖和分化。,作用与意义： 1.研究造血过程造血细胞分化、成熟及调节机制； 2.各种细胞因子对造血调节的作用机制 3.造血细胞与非造血细胞之间相互作用及调控的分子机制 4.药物对骨髓造血的影响 5.造血系统疾病的发生机制、诊断和治疗效果,红系祖细胞培养,实验原理： 在培养体系中选择甲基纤维素作为支持物，加入适量EPO等细胞因子，使骨髓中红细胞系造血细胞形成BFU-E和CFU-E集落.每个集落可视为由一个红系祖细胞增殖分化而来。集落数的多少可反映培养物中红系祖细胞的量。,参考范围,CFU-E集落为8-50个细胞组成的细胞团。 BFU-E集落为50个以上细胞组成的细胞团。 骨髓：BFU-E：（25.37.6）个/2105有核细胞（MNC) CFU-E:（141.668.4）个/2105MNC 外周血：BFU-E：（264）个/2105MNC 脐血：BFU-E：（767）个/2105MNC,临床意义,1.BFU-E、CFU-E减少：见于再生障碍性贫血、单纯红细胞再障、急性白血病、慢粒等 2.BFU-E、CFU-E增加：见于真性红细胞增多症、原发性骨髓纤维化及部分慢粒患者,粒-单系造血细胞培养,原理：受检者血液、骨髓或脐血经过分离获得的单个核细胞在HGFs的作用下，在体外半固体琼脂上形成不同阶段的粒细胞和单核细胞集落。 刺激CFU-GM生长的造血因子主要有：GM-CSF、IL-3、G-CSF、M-CSF及SCF,培养7d后，培养皿倒置显微镜观察。 40个细胞团成为集落，40个细胞的团成为簇，3-15个细胞为小簇，16-40个细胞为大簇。,参考范围,骨髓：集落数为（150.0658.4）个/2105MNC 细胞簇与集落之比为5-20:1 外周血：集落数为BM的1/10 脐血：集落数为（486）个/2105MNC,临床意义,1.CFU-GM减少：再障、PNH、急性白血病、慢粒急变期、红白血病等 2.CFU-GM增加：慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多症、部分缺铁性贫血,巨核细胞培养,以血浆凝块或甲基纤维素为支持物，加入再生障碍性贫血患者血清或TPO、IL-3及SCF等生长因子，是骨髓中巨核细胞系祖细胞形成CFU-MK。,参考范围,培养10-14天后，倒置显微镜观察，含有3个巨核细胞以上者为CFU-MK集落。20-500个巨核细胞的集落称为BFU-MK。 骨髓：（16.410.3）/2105MNC,临床意义,CFU-MK减少：再障、获得性无巨核细胞血小板减少性紫癜、骨髓增生性疾病、血小板减少症和白血病。 CFU-MK增加：常见于慢粒,混合祖细胞培养,以甲基纤维素作为支持物配以各种造血生长因子如IL-3、GM-CSF和EPO或PHA-LCM加EPO作为CFU-MIX刺激因子在体外