非发酵.ppt

第九章 不发酵革兰阴性杆菌,张 楠,不发酵革兰阴性杆菌,定义：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；多为条件致病菌。,葡萄糖OF反应结果,不发酵菌主要特点,氧化酶：；不动杆菌，嗜麦芽窄食单胞 菌属除外,部分洋葱伯克霍尔德菌。 O/F试验：O/ 动力试验：多数有鞭毛，但半固体动力试验不明显，常采用镜检或鞭毛染色,肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别,不发酵革兰阴性杆菌,第一节 假单胞菌属,假单胞菌属细菌根据rRNA-DNA同源性分为5群，其中群最多见共12种细菌，代表菌种为铜绿假单胞菌。 假单胞菌属多为条件致病菌，占非发酵菌感染的70-80%。 现把II、V群分别独立为伯克霍尔德属及窄食单胞菌属。,假单胞菌属共同点,革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或丛鞭毛 专性需氧 氧化酶： O/F：O 产生水溶性色素,二 铜绿假单胞菌,假单胞菌属的代表菌种，假单胞菌感染主要为铜绿假单胞菌，分布广泛主要的条件致病菌。,铜绿假单胞菌形态染色,革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单鞭毛,（一）生物性状 形态染色性：革兰阴性菌杆，呈球杆状或长丝状，长短不一，单个或短链排列。无芽胞，无荚膜，单端单鞭毛，运动活泼。,培养特性： 专性需氧，4不长，42可生长。 血平板：典型的菌落扁平、湿润、毛玻璃样、金属光泽、有透明的溶血环、生姜味、菌落和培养基灰绿色 普通平板：可产多种色素，主要有：绿脓素（兰绿色，可溶于水）和荧光素（即青脓素，黄或黄绿色，只溶于水）。从临床标本中分离的菌株大多产生此色素（90%）,铜绿假单胞菌在血琼脂平板上的菌落特征（18-24h）,80-90%产生绿脓素和荧光素,铜绿假单胞菌产荧光素,铜绿假单胞菌产绿脓素,铜绿假单胞菌绿脓素,铜绿假单胞菌荧光素,麦康凯上可形成5种不同形态的菌落： 典型型：灰绿色，大小不一，扁平湿润，边缘不齐，表面可见金属光泽。 大肠菌群型：圆形凸起，灰白色半透明。 粗糙型：菌落中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。 侏儒型：细小无光泽，半透明菌落 粘液型：光滑凸起呈粘液状,生化反应： 氧化酶，O/F上能氧化分解葡萄糖、木糖产酸、精氨酸双水解酶，枸橼酸盐，硝酸盐。 抵抗力：较强，临床分离株对多种抗生素耐药,葡萄糖OF反应结果,（二）致病性： 可产生多种致病物质：菌毛、荚膜、胞外酶和溶血物质 、 内毒素、外毒素. 除自然界外，也存在于人体皮肤上及与外界相通的腔道中。 多为继发感染，如烧伤后的创面感染，也可引起肺炎、脑膜炎、尿道感染，严重时可引起败血症，死亡率甚高。,（三）微生物学检验 1、显微镜检查：标本直接涂片革兰染色镜检；鞭毛染色镜检 2、培养：标本接种血平板、Mac平板分离培养，血标本先增菌，再转种 3、鉴定： 初步鉴定：菌落特征、水溶性绿色色素、生姜气味、氧化酶、O/F 全面鉴定：色素不典型者需全面鉴定,铜绿假单胞菌检验程序,荧光假单胞菌,革兰阴性杆菌，单端丛鞭毛 专性需氧 营养要求不高，普通平板、Mac平板可生长 最适生长温度2530，4生长，35、42不生长 产生水溶性荧光素（青脓素），不产绿脓素 氧化酶； O/F：O；卵磷脂酶；明胶液化 具有嗜冷性，可在冰箱储存血中繁殖,恶臭假单胞菌,革兰阴性杆菌，单端丛鞭毛 专性需氧 最适生长温度2530，4及42不生长 产生水溶性荧光素（青脓素），不产绿脓素；陈旧培养物有腥臭味 氧化酶； O/F：O；卵磷脂酶；明胶液化,OF试验：O 氧化酶：+ 精氨酸水解：+ 葡萄糖酸氧化：+ 氮气：+,假单胞菌鉴定程序,第二节 伯克霍尔德菌属,属于rRNA第II群 主要有马勒伯克霍尔德菌、伪马勒伯克霍尔德菌、洋葱伯克霍尔德菌等 条件致病菌。,马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌,鼻疽病与类鼻疽病的病原体 2004年NCCLs称为可能成为生物恐怖的细菌 肺鼻疽病 、皮肤鼻疽病、内脏脓肿、菌血症、脓毒血症,生物学特性,革兰阴性杆菌 无芽胞、无荚膜 伪马勒鼻伯克霍尔德菌一端有丛鞭毛(14 根)， 42生长 马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力，42 不生长,洋葱伯克霍尔德菌,染色：细小阴性杆菌 菌落：细小透明的菌落、可产黄色素、紫色素 生化: O/F非发酵，有动力，多数氧化酶阳性（缓慢阳性）。,三、嗜麦芽窄食单胞菌,属于假单胞菌科的rRNA同源群 嗜麦芽窄食单胞菌（S.maltophilia）和S. africana,分类,临床意义,为条件致病菌 呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染，菌血症及心内膜炎。 在不发酵菌引起的感染中，仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌，居临床分离阳性率的第三位。,生物学性状,形态与染色：革兰阴性，端鞭毛，(18)根 无芽孢、无荚膜 培养特性: 生长温度为35，4不生长血琼 脂、普通培养基均能生长 血平板上: 菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生不溶血的黄色色素,嗜麦芽窄食单胞菌菌的菌落形态,生化鉴定：氧化酶阴性 O/F氧化型 有动力 液化明胶 水解七叶苷 赖氨酸脱羧酶阳性 氧化分解麦芽糖 DNA酶阳性,药物敏感试验及结果解释,治疗首选磺胺类：TMP/SMZ；喹锘酮类：环丙 氟派酸或替卡西林/棒酸 泰能(Imipenem)天然耐药 药敏试验纸片法仅有三种抗生素：左氧氟沙星、米诺环素、复方磺胺有折点。其他药敏试验应选用肉汤、琼脂稀释法作MIC，或采用E-TEST的方法。,洋葱与嗜麦芽的鉴别,第四节 不动杆菌,不动杆菌（Acinetobacter）为一群氧化酶阴性，不发酵糖类、无动力的革兰阴性菌。 含6个种：醋酸钙不动杆菌 洛菲不动杆菌 溶血不动杆菌 鲍曼不动杆菌 琼氏不动杆菌 约翰逊不动杆菌,一、生物学性状 形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列，不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。 最适温度35 ，鲍曼不动杆菌42可生长。 血平板上 圆形凸起、23 mm ，光滑、边缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶血不动杆菌可形成 -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。,革兰阴性球杆菌，常成双排列，不易退色,鲍曼不动杆菌在血琼脂平板上的菌落特征（18-24h）,鲍曼不动杆菌在麦康凯琼脂平板上的深红色菌落（19-24h）,生化反应 触酶阳性，葡萄糖O/F为氧化型。氧化酶（）硝酸盐还原（）。动力（），生化三阴。 二、致病性 该菌广泛存在于自然界，属条件致病菌，也是医院感染的常见病菌之一，常引起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。,三、鉴定 （1）直接镜检：染色为革兰阴性球菌或球杆菌，成双排列。 （2）生化反应：氧化酶（），硝酸盐还原（）。动力（），不发酵葡萄糖。 符合上述即可判定为不动杆菌属的细菌。,4.两种不动杆菌的鉴别,第五节 产碱杆菌属,粪产碱杆菌,木糖氧化产碱杆菌,木糖氧化产碱杆菌 氧化亚种,木糖氧化产碱杆菌 脱硝亚种,产碱杆菌属主要特征,革兰阴性杆菌、有周鞭毛、无芽孢、无荚膜 专性需氧 营养要求不高，普通平板和Mac平板上可生长 氧化酶、O/F：-/-、不分解任何糖 是医院感染病原菌之一，粪产杆菌多见,产碱杆菌属鉴定要点,革兰阴性杆菌 氧化酶 O/F： -/- 动力：+ 硝酸盐还原；亚硝酸盐还原 KIA：底层斜面不变色,第六节 黄杆菌科,革兰阴性杆菌，无鞭毛 专性需氧、营养要求不高，普通平板上生长，形成黄色色素 麦康凯平板上不生长 氧化酶 O/F：O,黄杆菌：黄色色素,第七节 莫拉菌属,微生物特性,革兰阴性球杆菌 呈双短链状排列，具有多形性,微生物检验,分离培养： 营养要求较高 生长温度3235 血琼脂平板上生长良好 针尖大小的圆形凸起、光滑、半透明、边缘整齐不溶血的菌落。,微生物检验,鉴定： 酶阳化氧性 触酶阳性 无动力 不分解任何糖类 吲哚试验阴性,第六节 军团菌属,分类,军团菌属(Legionella) 属于军团菌科（Legionellaceae） 常见的与人类疾病有关的军团菌： 嗜肺军团菌（Legionella pneumophila） 米克戴德军团菌（L. micdadei） 长滩军团菌（L. longbeachae） 杜莫夫军团菌（L. dumoffii） 波兹曼军团菌（L. bozemanii）,临床意义,引起肺炎型和非肺炎型(庞蒂亚克热Pontiac fever)感染 肺炎型：多器官损害，肺部、消化道及神经系统症 状及体征，致死率高 医院感染可高达23% 慢性心、肺、肾病变、艾滋病或接受免疫抑制剂者 易发本病，且死亡率高达45%,临床意义,空气乳胶微粒传播 发病机制：内毒素和细胞产生的多种酶 裂解红细胞 消化卵黄囊,生物学特性,革兰阴性杆菌 菌体呈线状 无芽胞，无荚膜，有端 鞭毛或侧鞭毛 严格需氧 触酶阳性 可液化明胶 不分解糖类 部份菌株氧化酶阳性,微生物检验,分离培养： 营养要求苛刻，生长缓慢 生长温度为35 最适pH6.77.0 初次分离必须采用(BCYE) 35天可形成12mm直径的光泽菌落,核酸检测：是快速特异的方法，采用DNA探针及PCR扩增rRNA的方法均可用于军团菌的快速诊断 抗体检测：是检测军团菌感染临床常用手段，常采用方法：IFA、MAA、TAT、ELISA法等,常见不发酵菌的鉴定双岐索引,-,OF试验：O 氧化酶：+ 精氨酸水解：+ 葡萄糖酸氧化：+ 氮气：+,假单胞菌鉴定程序,思考题： 1、 什么叫非发酵菌？有何特点？ 2、铜绿假单胞菌在形态和培养特性有 何特性？如何鉴定铜绿假单胞菌？ 3、如何鉴定不动杆菌？,测验1,关于铜绿假单胞菌，错误的是 A 革兰阴性杆菌 B 氧化酶、触酶 C 硝酸盐还原 D 产生水溶性蓝绿色