课件：放射医学研究所.ppt

朱茂祥 军事医学科学院放射医学研究所 2004.06,中式卷烟的 生物医学评价技术,报告内容,发展中式卷烟的意义 从吸烟与健康谈起 中式卷烟的生物医学评价技术 技术原理与方法 代表性中式卷烟的安全性评价举例 烟丝添加神农液降低卷烟危害 使用SRM生物滤嘴降低卷烟危害,吸烟与健康 事实与问题,全世界1/3的成年男性吸烟，香烟销售量约1.51010支/d（约1.0107支/min） 未成年人中有近1/5的吸烟者，而且每天还以810万人的速度增加（近一半在亚洲） 发达国家吸烟人数呈下降趋势，但女性吸烟者增多。目前美国吸烟的女性约2200万人，韩国女性吸烟比例从1989年的3.9%上升到1998年的6.7%，增加了近2倍；在日本，最近十年中女性吸烟者的比例也达到近10% 在中国，香烟消费量占全世界1/3，每年消耗的香烟数约1.71012支（每分钟3.0106支），吸烟人数3.2亿，比整个美国人口还多，成年人中，约67%的男性和4%的女性吸烟，未成年人中，约1/3的男性和8%的女性吸烟 WHO：2004年公布的统计数字,事实,19651998年间美国大于18岁公民中吸烟者的比例（按性别） （CDC，MMWR, 2000，Vol 49, No. 39）,事实,1964 US Surgeon General报告吸烟对健康的不良影响 1965 41%的美国成年人吸烟 1967 烟盒上标示“吸烟有害健康” 1970 电视上禁止烟草广告 2000 美国只有25%的成年人吸烟,19001998年间美国成年人年均吸烟量,烟草中含有大量碳水化合物（占40%50%），羧酸，色素，萜烯类，链烷烃，类脂物质，以及一些生长必需的营养物（如硝酸盐等）和某些污染物（如农药、重金属等） 吸烟是不完全燃烧过程，烟草经一系列热分解与热合成反应，产生大量化学物质。据分析，烟气中化学成分共5068种，除烟草中存在的1172种外，3896种是吸烟过程中产生的新的化学物质 Roberts，1988 Tobacco Reporter,事实,卷烟烟气的粒相物（如脂肪烃、芳香烃、萜类、羰基化合物、酚类、有机酸、氮杂环、亚硝胺、金属）和气相物（如氮、氧、CO2、CO、氢、挥发性烃类、酯类、呋喃类、腈类）中包含多种有害成分，如气相中的CO、氮氧化物、丙烯醛、挥发性芳香烃、氢氰酸，粒相中的稠环芳烃、酚类、烟碱、亚硝胺、杂环化合物及微量放射性元素，以及气相与粒相中都存在的自由基等 Hoffmann list：卷烟烟气存在44种有害成分 69种致癌物中（包括一些促癌剂或辅致癌物）NNK最受关注 Hoffmann D：Chem Res Toxicol 2001; 14(7):767-90 40年吸烟（40支/天）的累积NNK量可致癌 Hoffmann D：Prev Med 1997; 26(4):427-34,事实,几乎所有的机体组织、器官或系统均可受到吸烟的影响，其中，最敏感的部位是呼吸系统（肺、气管、咽喉）、循环系统（心脏、血管），神经系统（脑），免疫和抗氧系统也是近年来研究较多的问题。孕妇、未成年人（特别是婴育儿）对吸烟的敏感性尤为值得关注 吸烟可造成40种致命疾病，包括口腔癌、食道癌、喉癌、肺癌、胰腺癌、胆囊癌、子宫内膜癌及其他非常罕见的疾病等。长期吸烟者肺癌发病率比不吸烟者高1020倍，喉癌发病率高610倍，冠心病发病率高23倍。循环系统发病率高3倍，气管炎发病率高28倍 英国牛津拉德克里夫医院ICRF癌症研究中心 医学统计与流行病学教授Richard Peto 世界卫生组织烟草与卫生规划署研究员Alan D. Lopez 19502000年期间发达国家的吸烟死亡率,事实,全世界每年死于与吸烟有关的疾病人数达400万，相当于每8秒就有1人死亡。预计这一数字在2020年会上升到1000万 在中国，平均每天约有3 000人死于吸烟 世界卫生组织烟草与卫生规划署烟草与卫生：全球状况报告 在美国，因吸烟引起的死亡，包括母亲吸烟所致婴儿早熟及被动吸烟等间接的影响在内，每年估计超过400 000人，约为全部死亡数的1/5，由此花费的医疗和保健费用约1500亿美元,美国每年死于与吸烟有关的疾病人数（430,000人）,(引自：CDC, MMWR 1999; 48; 131-38),(19901994年间年平均值),事实,1994年美国与吸烟有关的疾病死亡情况 （引自：CDC，MMWR 1997, Vol. 48, No. 43; 993-996）,1995年英国因吸烟的疾病死亡人数统计数据 (引自：Health Education Authority, 1998),在英国，估计每年有28.4万 人因吸烟引起的疾病住院治疗，其中死亡人数约12万人。据估计，19502000年间，英国有600万人死于与吸烟有关的疾病，平均每年死于吸烟的人数是二战前的12 倍。1995年，英国死于吸烟的人数为12.31万人，是交通事故(3444人)、吸毒(2663)、犯罪谋杀(503)、自杀(4379)、爱滋病(195)以及其他意外死亡(8986)的总和（20170）的6倍,问题,如果不进行剂量分析和评价，单凭卷烟烟气中存在的有害成分，就认定其对健康有不良影响，是不科学的 “所有的物质本身并非毒物，剂量才使一种物质变成毒物” “毒物和药物之间的区别在于正确的剂量” 16世纪著名医学家Paracelsus 与城市空气污染比较，人类接触有害环境因素中，来自于卷烟烟气，相对来说是较少的 目前，“吸烟有害健康”的“证据”主要来自于流行病学调查和动物实验研究的结果，存在商榷之处,吸烟者的“误区” 停止吸烟会导致体重增加 没有直接证据表明吸烟能导致癌症 肺癌是多因素疾病 绝大多数人都吸烟 吸烟的危害远没有政府宣传和倡导的那么严重 许多重度吸烟者并没有得病，且寿命很长 目前市场是的烟焦油量都较低，每天吸烟少于20支应该说是安全的 环境烟草烟气对不吸烟者并没有严重的影响,问题,中式卷烟的 生物医学评价技术 技术原理与方法,筛选对烟气敏感的细胞系：用于实验研究的细胞系有数百种，其中人支气管上皮细胞(BEAS-2B)富含P450酶，在无需代谢活化因子S9时能转化利用NNK等烟气中主要有害物质,研制中的细胞气体中毒装置：细胞在培养液中染毒，与人类吸烟实际情况有差别，研制细胞气体中毒装置对烟气评价意义重大,卷烟烟气毒理学评价,动物吸烟中毒实验模型建立：动物在恒氧、恒压、恒湿、恒温和烟气均匀条件下自由吸入卷烟烟气,动物吸烟试验,烟气细胞中毒试验,急性毒性,评价方案,急性毒性,慢性毒性,蓄积毒性,生殖毒性,免疫毒性,增殖死亡,氧化损伤,膜损伤,致突致畸致癌,基因毒性,烟草烟气中有数千种物质，单一或数种有害成分的分析难以全面真实客观地反映吸烟的健康影响。卷烟烟气毒理学评价是以吸烟产生的烟气做为整体，通过动物和细胞中毒试验，用毒理学的方法，对卷烟烟气的健康影响进行评价。通过与同品质对照烟比较，检验降焦减害技术应用于卷烟中提高卷烟安全性的效果。,其他功能检测,第一级，动物要求2种，雌雄各半，细胞至少2种，代表人和动物来源的支气管和成纤维细胞各1种。最好是2种染毒途径。如果两种卷烟（一般是试验样品烟和对照烟）的急性毒性差异明显，则无需进行进一步的评价，否则需进行第二级和第三级，甚至其他评价实验,分级评价方案,实验动物及其吸烟染毒,实验动物 昆明小鼠和Wistar大鼠是我国“新药审批办法”推荐使用的动物。动物到达后，按SOPA034的要求接收。每笼5只，饲养在二级动物房内，温度301，湿度605%。由获得资格认可的人员饲养。所有动物按SOPA035要求检疫观察1-3天，在此时间内观察动物的疾病和死亡指征，出现异常现象需向专题负责人和临床兽医报告。由实验动物中心提供标准饲料。从动物到达至研究结束自由摄食。用饮水瓶供应消毒自来水，由动物自由饮用。每日冲洗饮水瓶 吸烟染毒 用吸烟器吸烟，将烟气导入中毒室（有机玻璃盒），动物在恒氧、恒压、恒湿、恒温和烟气均匀的条件下自由吸入卷烟烟气，造成动物吸烟中毒的实验模型,用于实验研究的靶细胞主要有鼠或人来源的成纤维细胞和上皮细胞四大类 叙利亚地鼠胚胎细胞（SHE） 优点：易获得，易培养，稳定，经济 缺点：敏感性较差，结果难以外推到人 人支气管上皮细胞（BEAS-2B） 优点：敏感性好，与人类接近 缺点：难培养，费用高 将吸烟器抽烟的烟气，分别经过有机相（乙酸乙酯）和无机相（基本培养液）收集。将有机溶剂挥发后，与培养液混合，并将烟气浓度调整为1支烟/ml，加入细胞培养液中培养细胞，造成细胞烟气中毒的实验模型,细胞系及其暴露卷烟烟气染毒,通常急性毒性是指动物1d内单次或多次染毒后在714d中连续观察动物产生的毒性反应及死亡情况。考虑到吸烟的实际情况，在吸烟的急性毒性实验中，我们采用所有动物同时开始吸烟，连续染毒，直至全部动物死亡为止，观察动物吸烟的反应，准确记录每只动物的死亡时间和吸烟量，计算平均活存时间和平均致死吸烟量，提供以下实验结果： 第一只动物和最后一只动物死亡的时间和致死吸烟量（即死亡时间和剂量的范围） 一半动物发生死亡的时间和吸烟量（T1/2和LD50） 对照烟动物全部死亡时，实验烟动物的活存率 必要时，需对急性致死动物的进行病理观察,动物暴露卷烟烟气的急性毒性试验,细胞存活试验,细胞在正常情况下按一定生长速度倍增，当受到有害因素作用时，细胞周期发生紊乱，表现出直接死亡或增殖性死亡 接种效率试验 细胞在低密度接种条件下，受损伤细胞不能存活，而正常细胞在一定时间后形成集落（克隆），通过计数克隆数，可以计算活存细胞百分数 MTT试验 噻唑兰（MTT）是一种细胞染料，能被活细胞在生长过程中利用并在细胞内沉积，因此，MTT试验可用来检测细胞增殖死亡率，评价有害物质对细胞的毒性作用,细胞氧化损伤活性氧检测,几乎所有的环境有害因素均能通过直接或间接作用，诱发细胞产生包括活性氧在内的自由基，这一方面是由于外源性化合物的代谢活化，并与其细胞或基因毒性密切相关；另一方面是细胞应激性启动抗氧化防御机制以对抗外源性有害因素可能导致的细胞损伤。细胞活性氧水平反应了细胞对外源性有害因素作用时的毒性应答，也就是外源性化合物的毒性 细胞内活性氧水平 细胞中，分子探针DCFH-DA和HE可分别与H2O2和O2.反应，生成二氯荧光黄（DCF）和溴乙锭（EB），并产生绿色和红色荧光，通过测定细胞内DCF和/或EB的荧光强度，即可相对定量细胞内H2O2和O2.水平 细胞外活性含量 过氧化氢（H2O2）用辣根过氧化物酶和酚红捕获，通过标准曲线进行定量；超氧阴离子（O2.）用细胞色素C捕获，通过测定吸光度改变进行定量；羟自由基（.OH）用番红花红捕获，通过测定吸光度改变进行定量过氧化氢,细胞膜是细胞与外界的屏蔽，具有信号转导与物质交换的重要功能。有人提出膜损伤是疾病发生甚至癌变的标志。细胞膜损伤可从以下几个方面进行评价： 膜的通透性 乳酸脱氢酶（LDH）是胞浆中的一种常见酶，通常情况下不能透过细胞膜外逸，因此，通过检测细胞外LDH的活性，可以评价膜通透性的改变 膜的结构与功能 腺苷三磷酸酶（ATPase）是细胞膜上的一种重要酶，负责重要离子的主动跨膜运输。通过检测细胞膜ATPase的活性，可以评价膜功能性的改变 膜的流动性 采用荧光偏振法，细胞经DPH荧光探针标记后，用荧光分光光度计测荧光偏振度。Kex 362nm , Kem 432nm ,狭缝10nm ,测温25 ,细胞膜损伤,长期毒性（也称为亚急性毒性、亚慢性毒性、慢性毒性或终生毒性）是指动物反复多次染毒的毒性反应。实验时，动物每天固定时间吸烟1次，按实验设计要求控制吸烟时间和吸烟量，持续3个月后活杀一批，余下动物继续饲养1个月进行恢复期观察。分别在吸烟前、吸烟期间的1个月和2个月、停止吸烟时（吸烟后3个月）、停止吸烟后1个月（吸烟后4个月）观察动物体重变化、血液学参数。实验结束后，全部处死动物，进行肺组织病理学观察。观察指标包括 一般观察 外观体征和行为活动（如神态萎靡、倦缩不动或过度兴奋、躁动惊跳、肌肉麻痹或震颤、步态异常等），皮毛帖身或稀疏竖散，粪便性状、颜色，食量及体重变化等 血液学指标 红细胞或网织红细胞细胞数，血红蛋白含量，白细胞及其分类细胞数，血小板计数，凝血时间等 血液生化指标 天氡氨酸氨基转换酶（AST）、丙氨酸氨基转换酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、总胆红素（TBIL）、肝酐（CREA）、总胆固醇（TCH）、钙浓度（CA）等 病检器官 心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸(子宫)、脑、交列腺等的重量及其系数，以及部分器官的病理学检查,动物暴露卷烟烟气的慢性毒性试验,细菌回复突变试验 即Ames试验。实验用菌株为鼠伤寒沙门氏菌不同组氨酸缺陷型突变株，根据致突变物能灵敏而特异地使组氨酸缺陷型突变株回变成原型的特点，故在缺乏组氨酸的培养基上，只有少数自发回变菌落生长，而能诱发细菌回变的致突变物可使细菌生长增多，从而可判断被试物是否具有致突变性 染色体畸变分析 染色体数目畸变 非整倍体（亚二倍体和超二倍体）、多倍体和内复制 染色体结构畸变 裂隙、断裂、断片、着丝粒环和无着丝粒环等 姐妹染色体交换 微核试验,致突变试验,Hchr 11分带,AL细胞 (400),AL细胞染色体核型,次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶（HPRT）主要参与嘌呤核苷酸的补救合途径，正常细胞能从头合成DNA，因此HPRT酶对细胞存活繁殖是非必需的，HPRT基因突变后仍能较长期活存。利用正常细胞中HPRT酶活性，加入毒性嘌呤类似物6-巯基鸟嘌呤（6-TG）培养，细胞死亡，而HPRT基因突变的细胞对6-TG有抗性而活存，并形成克隆，以此可以检测HPRT基因突变 人类11号染色体基因突变分析用人-中国仓鼠卵巢杂交细胞（AL细胞）检测人类11号染色体（Hchr 11）基因突变是近几年发展起来的一种快速、简便、经济、灵敏的检测基因突变的实验方法,基因突变,细胞恶性转化试验 细胞转化是是细胞失去原有正常形态和功能的表型特征，是细胞癌前病变的重要标志，表现在细胞增殖速度加快（倍增时间缩短），细胞间接触抑制消失（叠层生长），并具有异种组织的浸润性（转移）。检测细胞转化能力是评价外源性化合物致癌性的基本方法 动物致癌试验 选择肿瘤易感性高和肿瘤自然发生率低的纯品系动物，常用小鼠和大鼠。年龄以刚断乳为宜，因它们的易感性较高，同时也可具有较长的实验观察时间。计算癌瘤发生率，一般以病理组织诊断为依据，并与对照组相比较，以确定致癌的显著性。确定诱癌潜伏期的长短以第一例癌瘤发现时间或平均癌瘤发现时间计。判定癌瘤多发性，应计数包括同一机体内发生两种或两种以上类型的肿瘤，或同一脏器、同一系统中出现多个同类型的癌瘤,致癌试验,生殖毒性试验,雄性生殖毒性检测方法 精子活动度和精子计数分析 精子形态学试验 亲代雄鼠睾丸(附睾)重量系数 系列交配与扩展交配试验 雌性生殖毒性检测方法 一代繁殖试验 多代繁殖试验 其它辅助试验 （如雌性动物动情周期观察、性激素水平的测定等 ） 胚胎毒性评定方法 胚胎死亡率 生长迟缓率 功能不全率 畸形率,免疫功能评价,体液免疫 血对胸腺依赖抗原SRBC的抗体空斑反应(PFC) 血清抗体滴度(血凝法、ELISA法) 有丝分裂原LPS刺激淋巴细胞转化 细胞免疫 T细胞数(ANAE染色法) 迟发性变态反应(DTH) 有丝分裂原PHA、ConA刺激淋巴细胞转化 非特异免疫 自然杀伤细胞 单核细胞及T、B淋巴细胞标记 腹腔巨噬细胞对CRBC的吞噬作用 单核细胞对炭粒的廓清,代表性中式卷烟 安全性评价举例 烟丝添加神农液降低卷烟危害 使用SRM生物滤嘴降低卷烟危害,烟丝添加神农液 降低卷烟危害的生物医学评价 五叶神卷烟,试验样品,五叶神品牌卷烟 烟丝中添加2.5神农萃取液制成的卷烟(编号205#) 同品牌对照烟 未使用神农萃取液的空白烟,烟丝添加神农液降低卷烟危害,与同品质对照烟比较，吸五叶神烟组，小鼠的平均活存时间和平均致死吸烟量分别增加了29.4%和34.1% 吸烟210 min，五叶神烟组小鼠100%存活，而对照烟组小鼠存活率仅为40%，当对照烟组小鼠全都死亡时，五叶神烟组小鼠的存活率为高达86.7%,小鼠吸烟急性致死毒性试验,n=6, 与空白烟比较，*p0.05, *p0.005,吸烟急性致死小鼠肺组织病理改变,n=6, 与空白烟比较，*p0.05, *p0.001,吸烟急性致死大鼠肺组织病理改变,小鼠,大鼠,正常肺组织,对照烟,五叶神,吸烟急性致死动物肺组织病理形态改变,肺组织病理观察结果表明，同为吸烟急性致死动物，五叶神烟组肺损伤程度明显减轻，表现在淋巴细胞浸润、肺泡壁增厚、出血、气管扩张、上皮变薄、肺囊泡和管周水肿等多项病理损伤指标均明显好于对照烟组,五叶神及其对照烟的细胞毒性比较,五叶神烟诱发SHE和BEAS-2B细胞增殖的半数致死剂量分别是对照烟的1.7倍和4倍。提示： 五叶神烟的细胞毒性明显降低 不同细胞系对卷烟烟气敏感性不同 BEAS-2B细胞对空白烟的敏感性约是SHE细胞的11.5倍；而对五叶神烟的敏感性仅为SHE细胞的4.5倍：提示： 五叶神卷烟烟气中能被P450酶活化的有害物质降低？,过氧化氢（H2O2）,超氧阴离子（O2.-）,五叶神及其对照烟诱发细胞内ROS增高,五叶神卷烟诱发细胞内过氧经氢和超氧阴离子增高的能力分别仅为对照烟的65%和60%。提示五叶神卷烟对细胞的氧化损伤显著降低。 不同种类活性氧对烟气的敏感性不同：超氧阴离子的增高为过氧化氢的2.3倍,五叶神烟诱发细胞产生的过氧化氢和超氧阴离子含量含量增高分别仅为同品质对照烟的40%和29%，羟自由基含量不仅明显低于同品质对照烟，而且观察到对羟自由基的清除(?)作用。表明五叶神卷烟对细胞的氧化损伤显著降低。,五叶神及其对照烟诱发细胞外ROS含量增高,五叶神及其对照烟对膜通透性影响,乳酸脱氢酶（LDH）是胞浆中一种常见酶，通常情况下不能透过细胞膜外逸，因此通过检测细胞外LDH的活性，可以评价膜通透性的改变 五叶神卷烟诱发细胞释放的LDH活性增高仅为同品质对照烟的36%，表明五叶神卷烟对细胞膜损伤显著降低。,五叶神及其对照烟对细胞膜结构和功能影响,腺苷三磷酸酶（ATPase）是细胞膜上的一种重要酶，负责重要离子的主动跨膜运输。通过检测细胞膜ATPase的活性，可以评价膜功能性的改变 对照烟诱发细胞膜ATP酶活性的降低程度为五叶神烟的1.5倍，表明五叶神卷烟对细胞膜损伤明显减轻。,总ATP ase活性,五叶神及其对照烟对细胞膜结构和功能影响,不同ATP酶活性,钠/钾-ATP酶,镁-ATP酶,钙-ATP酶,钙/镁-ATP酶,钙、镁-ATP酶是对烟气敏感的指标 除钙-ATP酶外，五叶神烟对其他ATP酶的损伤作用明显轻于对照烟 神农萃取液含有活化钠/钾-ATP酶的活性成分(?),五叶神及其对照烟对Hchr 11基因突变的影响,人类11号染色体(Hchr 11)对包含单拷贝Hchr 11的人-中国仓鼠卵巢杂交细胞(AL细胞)的存活无明显影响。利用Hchr 11表达CD59表面抗原的特性，用CD59抗体可以筛选Hchr 11基因突变的AL突变细胞，从而检测Hchr 11基因突变率。,五叶神卷烟诱发Hchr 11基因突变率明显低于同品质对照烟，提示五叶神烟具有较低的基因毒作用。,五叶神及其对照烟对HPRT基因突变的影响,次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶（HPRT）对正常细胞DNA合成是非必需的，而HPRT基因突变体对基因毒物6-巯基鸟嘌呤具有抗性，以此可检测HPRT基因突变。 低剂量时，五叶神卷烟诱发HPRT基因突变率与对照烟无明显差异 高剂量时，五叶神卷烟诱发HPRT基因突变率明显低于同品质对照烟,五叶神及其对照烟诱发SHE细胞转化的比较,细胞转化是细胞失去原有正常形态和功能的表型特征，是细胞癌前病变的重要标志。检测细胞转化能力是评价外源性化合物致癌性的基本方法。 五叶神有2个连续剂量组（0.008和0.010）转化率明显增高，对照烟有3个连续剂量组（0.006、0.008和0.010）转化率明显增高。 相同剂量下五叶神诱发的细胞转化率明显低于对照烟，诱发细胞转化率增高的能力比对照烟减少50%。,减少氨水刺激小鼠致咳反应（治咳）,延长喘息性抽搐潜伏期（平喘）,增加离体气管酚红排泌量（祛痰）,改善瘀血组织的血液流动性,降低吸烟所致细胞染色单体交换（SCE）率,抑制吸烟所致细胞微核形成,神农萃取液应用于卷烟中，使小鼠和大鼠吸烟急性死亡的时间和致死吸烟量分别增加了约60%和30%；特别是当吸对照烟组动物全部死亡时，五叶神烟组动物存活率高达85%以上 同为吸烟急性致死动物，五叶神烟组肺损伤程度明显减轻，表现在淋巴细胞浸润、肺泡壁增厚、出血、气管扩张、上皮变薄、肺囊泡和管周水肿等多项病理损伤指标均明显好于对照烟组。 与同品质对照烟比较，五叶神卷烟的细胞毒性降低了约24倍，诱发的细胞氧化损伤、膜损伤、染色体基因突变和细胞转化等细胞生物学改变均明显减轻 与同品质对照烟比较，五叶神卷烟减少动物的刺激性咳嗽反应，延长喘息性抽搐的潜伏期，增加离体气管酚红排泌量，改善瘀血的血液流动性，降低了吸烟所致染色单体交换率，抑制吸烟所致微核形成,结论,使用SRM生物滤嘴 降低卷烟危害的生物医学评价 5mg中南海混合型卷烟,SRM降低卷烟烟气自由基的效果及稳定性,实验样品,1#烟 普通香烟 2#烟 5 mg 中南海香烟 4#烟 5 mg 中南海SRM低自由基香烟 (以上样品均由北京卷烟厂提供),细胞毒作用,小鼠急性毒性,雄性小鼠吸烟1个月后生殖器官改变,吸烟组动物体重、睾丸重量及附睾重量均低于不吸烟组，其中体重和附睾重量降低明显，但各吸烟组间无差异,雄性小鼠吸烟1个月后精子活性改变,精子总数,吸1#烟组动物精子总数明显减少 吸2#烟组动物精子总数减少，但无统计学差异 吸4#烟组动物精子总数与不吸烟组相当,活泼(I类)和较活泼(II类)的精子数 吸1#烟组动物最少，2#烟次之，4#烟最多，但均明显低于不吸烟组,吸4#烟组动物的活性精子数明显多于1#烟组和2#烟组,死精子(IV类)数 吸烟组，1#烟和2#烟差不多，4#组较少，但均高于不吸烟组 吸4#烟组动物的死精子数明显少于2#烟和1#烟,活动不良精子(III类) 3个吸烟组相近，稍高于不吸烟组，但统计上无明显差异,不吸烟小鼠,吸2#烟小鼠,吸1#烟小鼠,吸4#烟小鼠,小鼠吸烟3个月后器官免疫功能,小鼠免疫功能,吸烟组动物体重、脾脏重量及胸腺重量均低于不吸烟组，其1#和2#烟组减轻明显，4#烟组与不吸烟组统计上差异列明显，且4#烟组胸腺重量及其指数均明显高于1#和2#烟组,非特异免疫,体液免疫,细胞免疫,3项免疫指标吸烟组均低于不吸烟组，除外#烟的体液和细胞免疫外，均与不吸烟组有显著性差异 4#烟组所检测的3项免疫指标均明显高于