白细胞介素8与肺动脉高压大鼠血管重构和血管新生的关系

分类号：R7254密级：单位代码：10422学 号：201013248鬃办孚硕士学位论文论文题目：白细胞介素8与肺动脉高压大鼠血管重构和血管新生的关系The relationships between interleukin 8 and vascularremodeling with angiogenesis in pulmonary arterialnVDertenSlon rat，I作者 姓 名学院 名 称专业 名 称指导 教 师合作 导 师宋 钊医学院儿科学王玉林 教授201 3年4月1 5日原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：钲日期：虹关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)一：雒翩虢址日 期：印!；：矿：!篁目 录中文摘要1英文摘要4符号说明8前 言99刖 舌实验准备和实施1 8结 果25：日7K厶J讨论29结 论32附图33参考文献41致 谢46攻读学位期间发表的论文47CATALOGUEchinese abstract1english abstract4symbol explanation8preface9preparement&implement1 8results25discussion29conclusion32figures33ref-erence4lacknowledgement46published artical47山东火学硕二jj学位论文白细胞介素8与肺动脉高压大鼠血管重构和血管新生的关系研究生宋钊导师王玉林山东大学附属省立医院儿科中文摘要研究目的观察PAH(pulmonary arterial hypertension， 肺动脉高压)大鼠模型肺组织肺动脉血管重构和新生以及IL8(interleukin 8，白细胞介素8)与血管重构和血管新生的关系。研究方法1选用48只健康雄性Wistar大鼠，随机将其分为空白组、模型组。其中空白组8只，模型组40只。模型组随机平均分为7d组、14d组、21d组及28d组，每组10只，均经腹腔注射野百合碱50mgKg；空白组Wistar大鼠经腹腔注射等体积生理盐水。2模型组分别于7、14、21、28d取材，空白组于28d取材。分别测量各组大鼠平均右心室)压,f13(RVSP)、计算右心室肥厚指数(RVHI)：大鼠麻醉后开胸经右颈总静脉测量右心室压力；测量完成后即心室取血而后摘取心脏，分离右心室游离壁，室间隔和左心室，以右心室游离壁和室间隔及左心室的重量之比RVHI=RV(L+S)来表示右心室肥厚程度。3HE染色(Hematoxylin-Eosin staining)观察大鼠肺脏形态结构及动脉结构的变化，并计算肺小动脉平均血管壁面积与血管总面积的百分比(vessel wall area，WA)：测量血管壁总面积(total area，TA)和血管腔面积(vessel area，VA)，以管壁面积与血管壁总面积的比值WA=(TA-VA)TA反映肺小动脉增生重构程度。4免疫组化观察肺动脉高压大鼠肺组织中CDl05的表达分布，计算微血管密度(mircovessel destiny，MVD)。5酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中IL-8水平。山东大学硕：j学位论文6统计学处理：应用SPSSl30进行数据分析。组间右心室收缩压、右心室肥厚指数、微血管密度及IL8浓度均以均数4-标准差(i士s)表示，其组间比较采用one-way analysis of variance test(oneway ANOVA，单因素方差分析)：两两比较采用Student-Newman-Keuls analysis；相互关系采用Linear corralation analysis，PO05认为差异有统计学意义。研究结果1肺组织大体标本观察：空白组大鼠肺组织色泽白中带粉，表面完整平滑；模型组大鼠肺组织随着时间的延长色泽由白逐渐发灰发黄，部分可出现萎缩，变形。2右心室压力及右心室肥厚指数：模型组大鼠在7d时检测到的右心室收缩压较空白组有所上升，14d时检测到明显升高的压力，实验数据表明右心室收缩压随病情发展表现出不断上升的趋势；与此类似，右心室肥厚指数也表现出了相同的趋势。3肺动脉形态学观察：空白组大鼠肺动脉内皮细胞形态正常，无缺失脱落，血管壁完整平滑，无腔内突出，各层之间连接紧密，无破损、断裂及增生。肺泡无肿胀变形，肺泡腔完整，腔内无渗液；而模型组大鼠随着时间的进展Nd,动脉内皮细胞逐渐出现肿胀、脱落；血管腔形态异常，出现狭窄变形，愈发严重；中膜出现增生并随病情进展表现为进行性增厚，部分可有典型纤维化表现致管腔几乎堵闭。管壁周围可观测到炎性细胞浸润。图像分析显示模型组大鼠肺动脉WA随病情加重表现出逐渐增高的趋势。4大鼠血清IL8及肺组织MVD的变化：与空白组对比，模型组大鼠的血清IL8浓度及MVD随病情进展均呈上升趋势(7天P005，14天-28天尸O01)，各时间点均高于空白组(尸O01)。5相关分析表明，IL8与WA、MVD，WA与MVD均呈正相关(FO644，r=0641，r=0721；P均001 o研究结论1模型组大鼠在注射MCT后，随着病程的进展右心室压力和右心肥厚指数呈不断上升的趋势。第2周时出现较为明显的升高，而第3周时右心室压力和右心肥厚指数明显加重，同时随着病情进展肺动脉重构日趋严重，表明MCT诱导大鼠山东大学硕士学位论文肺动脉高压模型构建成功。2模型组大鼠肺组织WA、MVD随着肺动脉高压的进展表现出逐渐增多的趋势，提示随着肺动脉高压的进展血管重构愈加严重、血管新生现象逐渐活跃。肺动脉WA与肺组织MVD相关性分析提示血管重构和血管新生互相影响，形成恶性循环导致肺动脉高压进行性恶化。3模型组大鼠血清IL8浓度随着病情进展呈增高的趋势， IL8和肺动脉WA、MVD的相关性分析提示IL8和肺动脉高压血管重构、血管新生有紧密的关系。4肺动脉高压不仅有血管重构的出现，也伴随了血管新生的出现和发展。并且两者之间相互作用，共同影响肺动脉高压的进展。IL8作为一种促炎因子和促进血管新生因子，不仅与肺动脉重构有着密切的联系，在血管新生方面扮演了重要角色，或可起到了一定的促进作用，本研究为肺动脉高压的发病机制和治疗开拓了新的思路。关键词：肺动脉高压；野百合碱；血管新生；肺动脉重构；白细胞介素8山东大学硕士学位论文The relationships between interleukin 8 and vascularremodeling with angiogenesis in pulmonary arterialnVDertenSlOn ratv IPostgraduate SONG ZhaoAdvisor ，A NG Yu1inDepartment of Pediatrics，Shandong Provincial Hospital Affiliated to ShandongObjectiveUniversity，JinanABSTRACTTo observe vascular remodeling and angiogenesis levels of interleukin-8(IL-8)aswell as the relationship between vascular remodeling and angiogenesis and IL一8 inpulmonary arterial hypertension ratsMethods148 healthy male Wistar rats were randomly divided into two gmops：controlgroup(n=8)and model group(n=40)And the 40 rats of model group were equally&randomly divided into four groups：7th day group，14th day group，21th daygroup，28th day group，1 0 rats for each groupThe model group rats were intraperitonealinjected MCT 50mgKg while the rats in control group were intraperitoneal injected anequal volume saline2The model group rats were drawn from day 7,4，2 1，28 respectivelyControlgroup was drawn from day 28All of the fortyeight rats were measured rightventricular systolic pressure(RVSP)and calculated right ventricular hypertrophy index(RVHI)after the rats were anesthetized measured right ventricular pressure through theright carotid vein when thoracotomy was accomplishedCompleted measurement andthen removed of the heart after ventricular blood was drawed then separated rightventricular free wall，interventricular septum and left ventricularThe weight ratio ofright ventricular free wall VS interventricular septum plus left ventricularRVHI=RV4山东大学硕士学位论文(L+S)】was to predict the extent of right ventricular hypertrophy3With HematoxylinEosin staining of rat lung to observe morphology and arterialchanges in the structure，and calculate the vessel wall area(WA)：measured thetotal area(TA)of the vessel wall and vessel lumen area(VA)The ratio vessel wall areaWA2(TAVA)TAreflected the degree of remodeling of small pulmonaryarteries hyperplasia4The angiogenesis was investigated by CD 1 05 immunohistochemistry of rat lungtissue to calculate the area ratio of the microvascular density(MVD)5。The serum IL8 level was investigated by ELISA6Using SPSS 1 30 for windows to achieve all statistical analysis，with asignificance level of O05All enumeration datas were showed as mean士SDThedifferences between each group were analysed with oneway ANOVA testComparisons of parametric data between groups were indicated byStudent-Newman-Keuls lestMutual relations used linear correlation analysis to showResults1Lung tissue specimens observation：lung tissue of control group：the colorwas white with pink，the tissue was smooth and integrityModel group rats lung tissueas time extended changed from grey to yellow white color，some parts were shrink，deformation2RVSP and RVHI：The right ventricular systolic pressure of model group ratsappeared tO rise from the 7th day by com