2013执业兽医资格考试微生物学巴氏杆菌科及其相关属

1,巴氏杆菌属曼氏杆菌属里氏杆菌属嗜血杆菌属放线杆菌属,巴氏杆菌科及相关属,2,第十八章 巴氏杆菌科及相关属,巴氏杆菌属曼氏杆菌属：从巴氏杆菌属中分出里氏杆菌属嗜血杆菌属放线杆菌属泰勒菌属,3,重点介绍,巴氏杆菌属嗜血杆菌属放线杆菌属,4,第一节 巴氏杆菌属,为一类微小、粗短、卵圆形的G杆菌，由法国微生物学家、化学家巴斯德最早发现，故名。目前 已报道有20多种，以多杀性巴氏杆菌在兽医学上最为重要。,5,本属细菌的共同特性：,1、 G、细小短杆菌；两极染色；无鞭毛；无芽胞； 2、需氧或兼性厌氧； 3、普通培养基多生长不良，血或血清可促进生长； 4、分解糖类产酸不产气；不液化明胶； 5、 氧化酶阳性。,6,多杀性巴氏杆菌,多杀亚种败血亚种杀禽亚种,7,多杀性巴氏杆菌,形态特性培养特性生化特性抵 抗 力抗原结构致 病 性微生物学诊断,8,1、多杀性巴氏杆菌的形态特性,G、细小短杆菌，两端纯圆，中央凸起，近似椭圆形。无芽胞，无鞭毛，有荚膜。两极染色。,多杀性巴氏杆菌模式图,9,2、多杀性巴氏杆菌的培养特性,需氧或兼性厌氧；最适温度37，pH7.27.4。普通培养基中加蛋白胨、酪蛋白水解物、血液、血清或微量血红蛋白时可促进生长。菌落形态：血清琼脂：淡灰白、露珠样小菌落，边缘整齐、表面光滑。血液琼脂：湿润、水滴样小菌落，不溶血。血清肉汤或1%胰蛋白胨肉汤：均匀混浊，轴性沉淀，形成菌环。,10,根据有无荧光及荧光色彩，可分为3种菌落类型：Fg型：菌落小，蓝绿色带金光，边缘有狭窄的红黄光带，对猪、牛、羊等为强毒菌，对鸡等禽类的毒力弱。Fo型：菌落大，桔红色带金光，边缘有乳白色光带，对鸡及兔等为强毒菌，对猪、牛、羊等家畜的毒力则微弱。Fg型和Fo型可以发生互相转变。Nf型：上述2型经多次传代后，毒力降低或转为无毒力，不带荧光也无毒力。,新分离的强毒菌，血清琼脂上的菌落在45度折光下观察时，在菌落的表面可看到荧光。,11,粘液型（M型）：菌落大，有粘稠性，对小鼠有中等毒力；平滑型（荧光）：菌落中等大小，对小鼠毒力很强；粗糙型（蓝色）：菌落小，对小鼠毒力弱，能自家凝集。 粗糙型无荚膜，而粘液型和平滑型均有荚膜，成分为透明质酸,国外常把本菌在琼脂上的菌落分为3种类型：,12,糖类利用情况：分解葡、蔗、果、甘露糖和半乳糖，产酸，不产气。大多数发酵甘露醇。一般对乳糖、鼠李糖、杨苷、肌醇、菊糖和侧金盏花醇不发酵。H2S()、NH3 ()、IMViC()、还原硝酸盐()、还原美蓝()、接触酶()、氧化酶()、明胶液化()、石蕊牛乳()、尿素酶()、赖氨酸脱羧酶()等,3、多杀性巴氏杆菌的生化特性,13,4、多杀性巴氏杆菌的抵抗力,本菌抵抗力不强易被普通的消毒药、阳光或热杀死。3%石炭酸、3%福尔马林、10%石灰乳、0.5l%氢氧化钠、0.1%升汞及2%来苏儿经12min可被杀死。在水浴5615min、6010min内被杀死。直射阳光下曝晒10min可失活。,14,5、多杀性巴氏杆菌的抗原结构,抗原结构复杂，主要有荚膜抗原和菌体抗原。荚膜抗原有型的特异性及免疫原性。,荚膜抗原共有6个：用大写英文字母表示菌体抗原（O抗原）共有16个型：用阿拉伯数字表示我国 禽多杀性巴氏杆菌以5:A最多，其次是8:A； 猪以5:A和6:B为主，其次是8:A和2:D； 牛、羊以6:B最多； 家兔以7:A为主，其次是5:A。,15,6、多杀性巴氏杆菌的致病性,可引起多种畜禽巴氏杆菌病(亦称出血性败血症) 。不同动物的巴氏杆菌，常对该种动物呈现较强的致病力，对其他动物较少引起交叉感染。猪巴氏杆菌病：猪肺疫马巴氏杆菌病牛巴氏杆菌病：牛出血性败血症羊巴氏杆菌病家兔巴氏杆菌病禽巴氏杆菌病：禽霍乱，又名禽出败鹿巴氏杆菌病貂巴氏杆菌病：貂出血性败血症骆驼巴氏杆菌病,16,毒力因子及实验动物的感染,实验动物：小鼠极易感染，家兔、鸽感染性强毒力因子荚膜耐热外毒素内毒素：含氮的磷酸脂多糖,17,分离培养：新鲜病料接种于鲜血琼脂和麦康凯琼脂。菌落观察：麦康凯上不生长，鲜血琼脂平板上生长，24h后，可形成淡灰色、圆形、湿润、露珠样小菌落，不溶血。革兰氏染色为阴性两极浓染的短小杆菌。血清琼脂生长良好，于45折光下观察菌落荧光； 生化试验：见前述,7、多杀性巴氏杆菌的微生物学诊断,18,动物感染试验,血琼脂培养物,悬浮于2ml生理盐水中,动物死后剖检，观察病变,注射小白鼠、家兔,血液、肝、脾组织,美蓝染色和革兰氏染色,心血、肝、脾等组织,血琼脂平板，观察菌落,19,预防,使用疫苗：禽霍乱氢氧化铝甲醛菌苗禽霍乱弱毒活菌苗禽霍乱组织灭活菌苗使用抗菌药物喹诺酮类磺胺类链霉素、土霉素、氯霉素、庆大霉素及强力霉素,20,第二节 曼氏杆菌属,该属1999年成立，至少有7个种，代表种为溶血性曼氏杆菌（M.haemolytica），原名叫溶血性巴氏杆菌.,21,溶血性曼氏杆菌,形态和多杀巴氏杆菌相似，但比较大一些，长2.5um，宽0.5um，呈球状或杆状。G 、无芽胞、无鞭毛、有荚膜，两极着色。营养要求不严格，普通培养基生长良好，培养24h后，菌落呈圆形、光滑、湿润，半透明。在血液琼脂上，新分离的菌落呈微弱的溶血。连续传代培养，溶血性便减弱或消失。,22,发酵某些糖类产酸不产气（如葡、麦、蔗、半乳、果、甘露醇等）。与多杀巴氏杆菌相比不产生靛基质、紫乳变酸且凝固，有些菌株产生硫化氢。在麦康凯上生长慢，生成红色菌落本菌的抵抗力与多杀巴氏杆菌相似。本菌按生化特性和致病力可分为两个生物型：A生物型包括1、2、5、6、7、8、9和11、12、13、14血清型；T生物型分为3、4、10、15血清型。 引起牛和绵羊的肺炎、新生羔羊败血症。,23,血清型,属的水平划分按其生化反应和致病力可分为A和T两个生物型根据菌体表面蛋白抗原的差异，可分为17个血清型 T生物型：3，4，10，15A生物型：其余均属此型 溶血性曼氏杆菌包括:1，2，5，6，7，8，9，12，13，14，16。代表株为血清型2，从绵羊分离,24,致病性毒力因子包括毒素、菌毛及荚膜多糖一般认为毒力较强的致病菌株才有致病性本菌存在于牛、羊鼻咽部等，可致牛、绵羊肺炎、新生羔羊败血症、羊乳腺炎等微生物学诊断：从患病动物的肺、水肿液等病料中分离本菌,25,第三节 里氏杆菌属（Riemerella ）,概述 代表种为鸭疫里氏杆菌，原名鸭疫巴氏杆菌，为雏鸭传染性浆膜炎的病原菌,26,鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer）,鸭疫里默氏杆菌感染是家鸭、火鸡和多种鸟类的一种接触性传染病。主要发生于23周龄鸭，死亡率10%，也称为新鸭病、传染性浆膜炎。鹅也可发生，称为鹅渗出性败血症。该病呈急性或慢性败血症，特征病变为：纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪性输卵管炎和脑膜炎；也可能发生无任何症状的呼吸道感染。,27,该菌曾称为“鸭疫巴氏杆菌”为什么？,形态特性：与巴氏杆菌形态相似，为G ，有荚膜，无芽胞、不运动，两极着色。菌落形态也与巴氏杆菌相同。培养特性：在巧克力琼脂、血琼脂、姨酶大豆琼脂生长良好。（但该菌培养时需要5%的CO2）生化特性：与败血性巴氏杆菌基本相同。 由于以上等等因素，曾一度把鸭疫里默氏杆菌称为“鸭疫巴氏杆菌”,28,现在为什么称为 “鸭疫里默氏杆菌”,Hendrickson和Hilbert对该菌进行了分离鉴定，称为“鸭疫斐佛氏菌”Bruner和Fabricant认为该菌与莫拉氏菌有较多的共同点，建议命名为“鸭疫莫拉氏菌”。第7版伯杰氏细菌学鉴定手册列为鸭疫巴氏杆菌。第8版、第9版伯杰氏系统细菌学手册列为分类地位未定种。但将该菌从莫拉氏菌、巴氏杆菌中划分出来。Segers等人，根据DNA-rRNA杂交分析、蛋白质、脂肪酸组成和表型特征（如不产生色素、产生呼吸醌“7-甲基萘醌”）等，建议将该菌单独列为“里默氏杆菌属”，将该菌命名为“鸭疫里默氏杆菌”,29,抵抗力：不强，对多种药物敏感，但易形成耐药性致病性：主要感染雏鸭，以23周为主，兔和小鼠不易感，雏鹅也有感染微生物学诊断：材料选择：选用纤维素性渗出物，心包液、肝或心血培养基：选用绵羊鲜血琼脂或巧克力琼脂,血清型：目前已发现21个，我国以1型为主，近年 来也报道了2型存在,30,第四节 嗜血杆菌属,某养鸡户饲养的商品蛋鸡，发生了一种疾病。产蛋率由90%降至65%，无死亡。发病初期表现发热、精神不振，食欲减退，有时下痢。比较典型的症状是：眼睑和面部肿胀，流泪。从鼻道和窦腔内流出浆液性分泌物，并有难闻气味。严重者整个头部水肿，眼垢粘着眼睑，造成了暂时性失明。病鸡呼吸困难，气管出现罗音，张口伸颈或甩头，不断摇头甩出泡沫状粘液。剖检变化主要是：鼻腔和窦发生炎症，粘膜充血水肿，表面有大量粘液和炎性渗出物的凝块结痂，严重时气管粘膜也有类似的炎症。眼结膜充血、肿胀，眼部皮下水肿。病程较长的病鸡可见鼻腔、眶下窦和眼结膜内有干酪样物。,31,1、嗜血杆菌的染色与形态特性,染 色： G 。大 小：小到中等大小 ，0.4-0.81.0-3.0m 。形 态：单个、成对分布，两极着色重 ，菌体形态似“哑铃” 。有时形成丝状，表现为多形性。新分离菌株有时能见到荚膜；无芽胞；无鞭毛。,32,33,流感嗜血杆菌,Gram stain of Haemophilus influenzae from sputum,34,嗜血杆菌的酶系统不够完善，培养时需要加入X和V两种生长因子。X因子是指具有生长促进作用的血红蛋白衍生物。V因子是辅酶I或辅酶II两种脱氢酶的一种。血液中含有X和V两种生长因子。需氧或兼性厌氧，鸡嗜血杆菌培养时需要5%的CO2环境。,2、嗜血杆菌的培养特性,35,常用巧克力培养基。在巧克力琼脂上生长形成圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐、灰白色半透明的小菌落普通琼脂和鲜血琼脂生长不良。卫星现象：在鲜血琼脂上培养时，如同时有葡萄球菌生长，由于葡萄球菌可合成较多的V因子，因此可出现葡萄球菌周围的嗜血杆菌菌落较大，离葡萄球菌越远则越小。菌落特点：呈针尖大小的露滴状菌落菌落光滑、透明、不溶血，边缘整齐。,续：,36,副鸡 嗜 血 杆 菌,37,38,糖发酵试验：能发酵：葡、麦、甘、蔗；不发酵：乳、伯胶糖等。硝酸盐还原()、H2S () 、明胶液化() 、靛基质()氧化酶和接触酶：因不同菌株而有差异。,3、嗜血杆菌的生化特性,39,4、抗原及分型,荚膜多糖抗原： 多糖和磷壁酸，具有型特异性菌体结构抗原：脂多糖抗原和外膜蛋白抗原，在种内和属内均有交叉流感嗜血杆菌根据荚膜抗原分为6个生物型，以型表示,40,嗜血杆菌的抵抗力不强： 常用消毒剂可杀灭； 一般在60条件下1020分钟即可杀灭； 室温下只能生存24天。,5、嗜血杆菌的抵抗力,41,6、嗜血杆菌属的致病力,毒力因子：荚膜、菌毛和内毒素临床意义：流感嗜血杆菌：引起各种呼吸道感染及小儿脑膜炎副流感嗜血杆菌：寄居人的上呼吸道副猪嗜血杆菌：4个血清型，为猪的下呼吸道的正常菌群，应急状态下，可引起全身感染，比如引起猪多浆病，即在大的体腔、关节、脑脊膜的纤维蛋白性炎症。本菌也常与猪流感病毒联合引起猪流感副禽嗜血杆菌：引起禽类呼吸道系统疾病，引致鸡鼻炎（可从气管侵入到整个肺部）、打喷嚏及面部水肿，产蛋减少，对雏鸡致病力较强,42,（以鸡传染性鼻炎为例）病原分离鉴定：镜检 采取脑脊液、血液、分泌液分离培养 采用鲜血琼脂或巧克力琼脂V因子需要试验 用灭菌棉拭子蘸取病鸡的眶下窦中的粘液或浆液，在鲜血琼脂上划线，并取保姆菌交叉划线，于蜡烛瓶或CO2培养箱中培养1824小时，若分离菌在血琼脂平板上生长呈现“卫星现象”，菌落呈露滴状、针尖大小的小菌落，且过氧化物酶试验呈现阴性，则可作出诊断。由于嗜血杆菌在体外存活时间很短，对该病原菌的分离必须及时。,7、嗜血杆菌的微生物学检查,43,除了传统的分离鉴定及常规的血清学方法外，还建立了更加特异敏感的ELISA方法、DNA探针及PCR诊断技术。,44,制定合适的防疫程序，加强预防力度，可减少传染病的发生。（以传染性鼻炎为例） 接种传染性鼻炎菌苗能有效地预防本病的发生，现在中国和外国都有这类商品性灭活菌苗供应。在鸡传染性鼻炎的防制上，一般是在68周龄时进行第一次菌苗接种，34周以后或产蛋前再加强免疫接种一次，可获良好的免疫保护效果。,8、嗜血杆菌的免疫,45,第五节 放线杆菌属Actinobacillus,本属细菌为G杆菌，两极染色，兼性厌氧。,猪胸膜肺炎放线杆菌林氏放线杆菌驹放线杆菌,对家畜有致病性的主要有3种：,46,1、形态、染色,G球杆菌，两极染色，无抗酸性； 三无：无荚膜、无芽胞、无鞭毛。,47,2、培 养,兼性厌氧；普通琼脂生长不良；常用血清琼脂。菌落细小、圆形、粘稠；,猪胸膜肺炎放线杆菌溶血林氏放线杆菌蓝灰色,48,3、致病性,（1）猪胸膜肺炎放线杆菌 特点：高度宿主专一性，临床表现为最急性型、急性型、慢性型，病理变化根据病理长短稍有差异，一般特点是：气管和支气管内有大量血色液体和纤维素，粘膜水肿、出血和增厚；肺脏充血、肿大、出血、水肿和肝变，病程久者有大小不等的坏死灶和脓肿，胸