常见病原菌的病原学检查

实验九常见病原菌的病原学检查,实验目的要求,1、掌握常见病原菌的主要生物学性状2、熟悉常见病原菌有关的鉴定方法,主要内容：,病原性球菌肠道杆菌,病原性球菌,金黄色葡萄球菌白色葡萄球菌柠檬色葡萄球菌,一、葡萄球菌,（一）葡萄球菌的形态、染色和血平板上的生长情况材料：1、菌种：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌培养物2、培养基：血平板3、其他：无菌生理盐水、载玻片、革兰染液,方法：,1、分离培养、观察菌落特征：分别取三种葡萄球菌培养物，用分离划线方法接种血平板，37培养18-24h以后观察结果。2、革兰染色、观察形态学特征：取葡萄球菌培养物少许涂片，革兰染色、镜检。,结果观察,1、菌落观察2、形态学观察,（二）葡萄球菌生化反应,葡萄球菌触酶试验：,(-) (+),H2o2,H2o,o2,氧化氢酶,+,菌种：葡萄球菌培养物试剂：3%过氧化氢方法：见右图结果：见右图,葡萄球菌生长现象及生化反应结果观察,金黄色葡萄球菌,形态学特征,血平板生长现象,表皮葡萄球菌,柠檬色葡萄球菌,触酶试验,二 、肠道杆菌,（一）肠道杆菌的形态、染色及在选择培养基上的生长情况材料：1、菌种：粪便标本或大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌培养物2、培养基：SS平板、EMB3、其他：无菌生理盐水、载玻片、革兰染液,SS琼脂培养基选择培养原理：,此培养基是强选择性培养基中性红为指示剂，酸性时呈现红色，碱性时呈淡黄色。在此培养基上，大肠杆菌属的菌落大而混浊，因发酵乳糖，菌落呈现红色 志贺氏菌属和沙门氏菌属的菌落形态为光滑无色透明，园形、中等大小，边缘整齐的菌落。由于宋内氏痢疾杆菌有分解胆盐中的某些物质和发酵乳糖(产酸)较慢等特点，而使菌落呈淡红或红色的较大或边缘不整齐的扁平菌落。某些沙门氏菌属及变形杆菌因 产生硫化氢，使菌落呈现黑色中心。,伊红美兰琼脂培养基（）选择培养原理：,此培养基为弱选择性培养基。以伊红美兰作指示剂（）大肠杆菌分解乳糖产酸时染上伊红，因为伊红和美兰结合所以菌落不是红色而呈现紫黑色，且有金属光泽(大肠杆菌)或棕色(产气杆菌)，扁平混浊，而较大边缘色淡的菌落。（）致病菌的菌落为无色半透明、园形，中等大小，边缘整齐的菌落，在靠近大肠杆菌的可疑菌落往往呈现淡兰色。,方法：,1、分离培养、观察菌落特征：分别取四的培养物，用分离划线方法接种SS平板或EMB培养基37培养18-24h以后观察结果。2、革兰染色、观察形态学特征：取各菌培养物少许涂片，革兰染色、镜检。,结果观察,1、菌落观察2、形态学观察,SS平板,沙门氏菌：无色透明菌落，有黑色中心志贺氏菌：无色透明菌落。,SS或EMB培养基生长现象观察,大肠杆菌,伤寒杆菌,痢疾杆菌,变形杆菌,SS菌落的形态特征,EMB菌落的形态特征,肠道杆菌形态学观察,（二）肠道杆菌生化反应及动力试验,材料：1、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌培养物2、培养基：克氏双糖斜面培养基、生化反应管、半固体培养基3、其他：接种环、接种针、酒精灯等。,克氏双糖斜面培养基生化反应原理,该培养基含葡萄糖与乳糖的比例为1:10，并含硫酸亚铁和指示剂酚红。大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，所以上层呈黄色，直立段有气泡存在肠道病原菌不能发酵乳糖，只能发酵葡萄糖，分解葡萄糖产酸，使PH下降，因斜面部分先呈现黄色，由于葡萄糖含量少，所生之酸接触空气而氧化，又因细苗的生长利用含氮物质生成碱性化合物，所以斜面部分后来又变成红色由于直立段(底层)呈厌氧状态，细菌发酵葡萄糖所生的酸不被氧化，所以一直呈黄色。大肠杆菌产气，有动力(沿穿刺线向周围扩散生长)伤寒杆菌有动力，而痢疾杆菌则没有动力 某些细菌如变形杆菌，乙型副伤寒杆菌能分解培养基中含硫氨基酸（如胱氨酸）产生硫化氢、硫化氢与硫酸亚铁中的亚铁离子结合形成黑色的硫化铁，而痢疾杆菌不产生硫化铁,生化反应管原理（1）,尿素试验：此培养基鉴别沙门氏菌和变形杆菌属细菌，自铁质双糖培养基上取菌苔作斜面接种，置37恒温箱内培养1824小时同时作镜检观其是否为纯培养变形杆菌含有尿素酶，经24小时培养能分解培养基中较多量尿素产生大量的氨，使培养基PH变为硷性，而呈现红色。即阳性反应，阳性反应可弃之。痢疾杆菌属及沙门氏菌属之细菌不能分解尿素而不呈现碱性反应即阴性反应，阴性反应 需继续作生化反应及血清学试验。,生化反应管原理（2）,糖发酵试验，细菌具有多种酶系统能分解糖类，产酸产气。不同的细菌对各种糖类的分解不同，因而可以利用糖发酵进行各种细菌(特别是肠道细菌)的鉴别。大肠杆菌能发酵乳糖、葡萄糖产酸产气。志贺痢疾杆菌、沙门氏菌、变形杆菌不分解乳糖，但能分解葡萄糖产酸。宋内氏痢疾杆菌迟缓发酵乳糖产酸，能分解葡萄糖产酸。,生化反应管原理（3）,硫化氢试验：某些细菌能分解培养基中硫氨基酸（如胱胺酸）产生硫化氢、硫化氢与硫酸亚铁中的亚铁离子结合形成黑色的硫化铁，变形杆菌，乙型副伤寒杆菌能产生硫化铁痢疾杆菌不产生硫化铁。,方法：,1、克氏双糖铁斜面培养基：分别取四种肠道杆菌的培养物，用穿刺加斜面划线接种方法接种于4支克氏双糖斜面培养基，37培养18-24h以后观察结果。2、生化反应管：取尿素反应管、硫化氢反应、葡萄糖反应、乳糖反应管，每种反应管分别穿刺接种大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌，37培养18-24h以后观察结果。3、动力试验：分别取四种肠道杆菌的培养物，用穿刺接种方法接种于4支半固体培养培养基，37培养18-24h以后观察结果。,结果观察,大肠杆菌,伤寒杆菌,痢疾杆菌,变形杆菌,克氏双糖铁,葡萄糖,乳糖,硫化氢,动 力,尿素,H2S,生化反应管,葡萄糖,乳糖,+,结果观察,大肠杆菌,伤寒杆菌,痢疾杆菌,变形杆菌,克氏双糖铁,葡萄糖,乳糖,硫化氢,动 力,尿素,H2S,生化反应管,葡萄糖,乳糖,+,-,-,-,+