双甲脒有关物质气相分析方法验证方案

1、双甲脒有关物质气相分析方法验证方案方案批准起草人：日期：审核人：日期：部门负责人：日期：QC经理：日期：QA经理：日期：目录1. 概述31.1 验证目的31.2 验证项目32. 参考资料43. 色谱条件和分析过程43.1 色谱条件43.2 分析过程44. 器材和试剂54.1 器材54.2试剂65. 验证内容65.1 系统适用性65.2 专属性75.3 检测限、定量限85.4 线性和范围105.5 准确度135.6 精密度165.7 方法耐用性195.8 溶液稳定性206. 结论217. 审核和批准218. 文件变更历史211. 概述1.1 验证目的通过验证确定该方法适用于双甲脒有关物质的检测。

2、1.2 验证项目本方法属于杂质定量检测方法，所以需要验证的项目有：系统适用性，专属性，系统精密度，检测限和定量限，线性及范围，准确度（回收率），方法耐用性，溶液稳定性。具体参数以及标准参考下表：验证项目接受标准验证结果系统适用性连续6针对照溶液中各个杂质峰面积的RSD值不大于5.0%。杂质a: 杂质b:杂质c: 杂质d:专属性空白溶剂图谱中目标物出峰位置没有明显干扰；各个杂质之间分离度不小于1.5。检测限、定量限信噪比S/N在3-5范围内对应的杂质浓度为检测限；杂质a:杂质b:杂质c:杂质d: 信噪比S/N在10-15范围内对应的杂质浓度为定量限。杂质a:杂质b:杂质c:杂质d:线性及范围杂质

3、对照浓度的60%，80%，100%，120%，140%范围内线性相关系数不小于0.99。杂质a:杂质b:杂质c:杂质d:准确度在杂质对照浓度80%，100%，120%三个浓度点下，平均回收率在80%-120%范围内；各回收率的RSD不大于10.0%。杂质a: RSD=杂质b: RSD=杂质c: RSD=杂质d: RSD=精密度重复性连续检测6次对照溶液，6针对照图谱中各个杂质峰面积的RSD值不大于5.0%中间精密度由两个人在不同时间不同的仪器上对同一批产品分别检测6次，杂质含量12次检测结果的RSD不大于25.0%。方法耐用性色谱条件发生微小变动时，方法仍适用于样品检测，对照图谱中各个杂质之间

4、的分离度不小于1.5；连续6针对照各个杂质峰面积不大于5.0%。溶液稳定性样品溶液放置一段时间后，杂质含量的绝对值在0.1以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质，则认定该时间内样品溶液是稳定的。2. 参考资料ICH Q2(R1);EP ;USP .3. 色谱条件和分析过程3.1 色谱条件仪器 ：GC， 型号： 检测器 ：UV， 波长： nm色谱柱 ：石英毛细管柱(规格10m0.53mm)，柱壁涂布5m的聚硅氧烷95%甲基，5%苯基固定相（毛细管柱Chrompack CP-SiL 8 CB可用）柱温 ：起始柱温125，保持在1255分钟，然后开始以5每分钟的速度线性上升到270，然后保持2701

5、5分钟,进一步升温至230。进样口温度 ：230C检测温度 ：300C载气 ：N2流速 ：12mL/min 进样量 ：1L3.2 分析过程 溶液配制杂质a(2,4-二甲基苯胺 )贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺250mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容， 浓度为0.1 %(W/V)。(注意闭光冷藏保存)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺200mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得， 浓度为2.0%(W/V)。(注意闭光冷藏保存)。杂质dN,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒贮备液：精密称取N,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒200mg于10m

6、l容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为2.0%(W/V)。(注意闭光冷藏保存)。溶液A的制备：分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.20%(W/V)的溶液。(注：如没有配制杂质b、杂质d贮备液，则溶液A的制备方法为：分别精密称取20mg的杂质b和20mg的杂质d于同一10ml容量瓶中，并将精密量取1ml杂质a贮备液加入其中，加乙酸甲酯定容即可)。溶液B的制备：精密称取30mg的杂质c N-甲基-N-(2,4-二甲苯基)甲脒溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入32

7、mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。对照溶液的制备：等体积的溶液A和溶液B的混合溶液。供试品溶液的制备：精密称取500mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。 进样程序在色谱条件平衡的条件下，分别进1针空白溶液（乙酸甲酯），6针对照溶液，2针供试品溶液，1针对照溶液记录色谱图。 计算公式杂质a=100%=杂质b=100%=杂质c=100%=杂质d=100%=式中：A样：样品溶液中杂质的峰

8、面积； C标：对照溶液中对应杂质的浓度，%； A标：对照溶液中对应杂质的峰面积。 系统适用性要求连续6针对照各杂质的峰面积的RSD不大于5.0%。4. 器材和试剂4.1 器材仪器名称型号编号生产厂家校正有效期气相色谱仪分析天平物理天平移液管容量瓶4.2试剂名称批号级别厂家有效期/复验期乙酸甲酯三乙胺杂质a(2,4-二甲基苯胺 )杂质b(2,4-二甲基代苯胺)杂质c N-甲基-N-(2,4-二甲苯基)甲脒杂质dN,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒5. 验证内容5.1 系统适用性5.1.1 目的对由分析设备，试验操作，被分析产品组成的系统进行评估，确定该方法在该系统条件下是可适用的。5.1.2 实际

9、操作：杂质a(2,4-二甲基苯胺 )贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺 mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容， 浓度为0.1 %(W/V)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺 mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得， 浓度为2.0%(W/V)。杂质dN,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒贮备液：精密称取N,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒200mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为2.0%(W/V)。溶液A的制备：分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010

10、%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.20%(W/V)的溶液。溶液B的制备：精密称取 mg的杂质c N-甲基-N-(2,4-二甲苯基)甲脒溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入 mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。对照溶液的制备：等体积的溶液A和溶液B的混合溶液。分别移取空白溶液（乙酸甲酯），供试品空白溶液和对照溶液注入色谱仪中，分别进针1次，1次和6次，记录色谱图，计算连续6针对照图谱中双甲脒峰面积的RSD值。5.1.3 接受标准：连续6

11、针对照图谱中各杂质峰面积的RSD值不大于5.0%。5.1.4 验证结果：表1：系统适用性验证结果序号杂质a峰面积杂质b峰面积杂质c峰面积杂质d峰面积123456平均峰面积RSD（%）结论：5.2 专属性5.2.1 目的：对分析方法准确可靠测定被分析物的能力进行测试。5.2.2 实际操作：杂质a(2,4-二甲基苯胺 )贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺 mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容， 浓度为0.1 %(W/V)。(注意闭光冷藏保存)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺 mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得， 浓度为2.0%(W/V)

12、。(注意闭光冷藏保存)。杂质dN,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒贮备液：精密称取N,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒 mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为2.0%(W/V)。(注意闭光冷藏保存)。溶液A的制备：分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各 ml于同一10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.20%(W/V)的溶液。溶液B的制备（杂质c溶液）：精密称取 mg的杂质c N-甲基-N-(2,4-二甲苯基)甲脒溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入 mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲

13、酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。供试品溶液的制备：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。 混合溶液的制备：分别取溶液A和溶液B适量，与同体积的供试品溶液混合。（V:V:V=1:1:1）分别取空白溶液，杂质a溶液，杂质b溶液，杂质c溶液，杂质d溶液和混合溶液注入气相色谱中，记录色谱图。5.2.3 接受标准：溶液乙酸甲酯对双甲脒的检测没有影响；混合溶液中各峰的分离度不小于1.5；样品溶液中可能存在的降解杂质对双甲脒的检测没有影响

14、。5.2.4 验证结果：表2-1：专属性验证结果-单独溶液中各峰的相对保留时间名称相对保留时间杂质a杂质b杂质c杂质d双甲脒RT （min）表2-2：专属性验证结果-混合溶液中各杂质分离度名称项目杂质a杂质b杂质c杂质d双甲脒相对保留时间 （min）与相邻峰的分离度结论：5.3 检测限、定量限5.3.1 目的：确定该方法在一定的条件下最小能够检测到的被分析物的浓度为多少，以及最小能够定量的被分析物的浓度为多少。5.3.2 实际操作：杂质a储备液的配制：精密称取杂质a对照品 mg于 mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后，摇匀。杂质a检测限溶夜：精密移取 mL杂质a储备液于 mL的容量瓶中

15、，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中，信噪比S/N在3-5之间。杂质a定量限溶液：精密移取 mL杂质a储备液于 mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中，信噪比S/N在10-15之间，一般为检测限浓度的3倍。杂质b储备液的配制：精密称取杂质b对照品 mg于 mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后，摇匀。杂质b检测限溶夜：精密移取 mL杂质b储备液于 mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中，信噪比S/N在3-5之间。杂质b定量限溶液：精密移取 mL杂质b储备液于 mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯

16、稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中，信噪比S/N在10-15之间，一般为检测限浓度的3倍。杂质c储备液的配制：精密称取杂质c对照品 mg于 mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后，摇匀。杂质c检测限溶夜：精密移取 mL杂质c储备液于 mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中，信噪比S/N在3-5之间。杂质c定量限溶液：精密移取 mL杂质c储备液于 mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中，信噪比S/N在10-15之间，一般为检测限浓度的3倍。杂质d储备液的配制：精密称取杂质d对照品 mg于 mL的容量瓶

17、中，加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后，摇匀。杂质d检测限溶夜：精密移取 mL杂质d储备液于 mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中，信噪比S/N在3-5之间。杂质d定量限溶液：精密移取 mL杂质d储备液于 mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中，信噪比S/N在10-15之间，一般为检测限浓度的3倍。取空白溶液（甲酸乙酯）注入气相色谱仪连续检测3次，然后分别取检测限溶液和定量限溶液注入色谱仪，检测限溶液连续进样3次，定量限溶液连续进样5次。5.3.3 验证结果：表3-1：基线信噪比序号123基线噪声 表3-2：检测限杂质名称

18、名称浓度(g/mL)S/NS/N平均浓度（ppm）杂质a检测限杂质b检测限杂质c检测限杂质d检测限表3-3：定量限杂质名称名称浓度(g/mL)S/NS/N平均RSD， %浓度（ppm）杂质a检测限杂质b检测限杂质c检测限杂质d检测限5.4 线性和范围5.4.1 目的： 确定设计的范围内，测试结果与被测物浓度呈正比关系的程度。5.4.2 实际操作：杂质a(2,4-二甲基苯胺 )贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺 mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容， 浓度为0.2 %(W/V)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺 mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10m

19、l摇匀即得， 浓度为4.0%(W/V)。杂质dN,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒贮备液：精密称取N,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒200mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为4.0%(W/V)。溶液A的制备：分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.40%(W/V)的溶液。溶液B的制备：精密称取 mg的杂质c N-甲基-N-(2,4-二甲苯基)甲脒溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入32mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲

20、洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.2%左右)。200%对照溶液制备：精密量取等体积的溶液A和溶液B混合。对照溶液的制备：精密量取等体积的200%对照溶液和乙酸甲酯混合。60%对照溶液的配制：精密量取 ml200%对照溶液于 mL容量瓶中, 用乙酸甲酯稀释至刻度。（备注：例如量取3ml稀释至10ml）80%对照溶液的配制：精密量取 ml对照溶液于 mL容量瓶中, 用乙酸甲酯稀释至刻度。（备注：例如量取4ml稀释至10ml）100%对照溶液的配制：精密量取 ml对照溶液于 mL容量瓶中, 用乙酸甲酯稀释至刻度。（备注：例如量取5m

21、l稀释至10ml）120%对照溶液的配制：精密量取 ml对照溶液于 mL容量瓶中, 用乙酸甲酯稀释至刻度。（备注：例如量取6ml稀释至10ml）140%对照溶液的配制：精密量取 ml对照溶液于 mL容量瓶中, 用乙酸甲酯稀释至刻度。（备注：例如量取7ml稀释至10ml）分别取空白溶液（乙酸甲酯）、对照溶液、60%-120%对照浓度溶液、对照溶液1注入色谱仪。空白进样1次，对照溶1进6针，60%-120%对照溶液分别进样1针，对照溶液进1针。记录色谱仪，并计算线性方程和线性相关系数。5.4.3 接受标准：线性方程的线性相关系数不小于0.99。5.4.4 验证结果：表4-1：杂质a线性验证结果溶液

22、名称杂质a浓度（mg/mL）对照溶液中杂质a峰面积杂质a峰面积杂质a含量（%）对照溶液160%对照溶液80%对照溶液100%对照溶液120%对照溶液线性方程线性相关系数表4-2：杂质b线性验证结果溶液名称杂质b浓度（mg/mL）对照溶液中杂质b峰面积杂质b峰面积杂质b含量（%）对照溶液160%对照溶液80%对照溶液100%对照溶液120%对照溶液线性方程线性相关系数表4-3：杂质c线性验证结果溶液名称杂质c浓度（mg/mL）对照溶液中杂质c峰面积杂质c峰面积杂质c含量（%）对照溶液160%对照溶液80%对照溶液100%对照溶液120%对照溶液线性方程线性相关系数表4-4：杂质d线性溶液名称杂质

23、d浓度（mg/mL）对照溶液中杂质d峰面积杂质d峰面积杂质d含量（%）对照溶液160%对照溶液80%对照溶液100%对照溶液120%对照溶液线性方程线性相关系数结论：5.5 准确度5.5.1 目的： 考察分析方法测定结果与真实值或参考值接近的程度。5.5.2 实际操作：杂质a(2,4-二甲基苯胺 )贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺 mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容， 浓度为0.2 %(W/V)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺 mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得， 浓度为4.0%(W/V)。杂质dN,N-双(2,4-二甲苯基)甲

24、脒贮备液：精密称取N,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒200mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为4.0%(W/V)。溶液A的制备：分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.40%(W/V)的溶液。溶液B的制备：精密称取 mg的杂质c N-甲基-N-(2,4-二甲苯基)甲脒溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入32mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B

25、(其中杂质c的含量为0.2%左右)。200%对照溶液制备：精密量取等体积的溶液A和溶液B混合。对照溶液的制备：精密量取等体积的200%对照溶液和乙酸甲酯混合。空白供试溶液1的制备：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。空白供试溶液2的制备：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。空白供试溶液3的制备：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。80%-1加样溶液的配制：精密称取

26、 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加如 ml200%对照溶液，然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。（备注加上4ml）80%-2对照溶液的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加如 ml200%对照溶液，然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。（备注加上4ml）80%-3对照溶液的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加如 ml200%对照溶液，然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。（备注加上4ml）100%-1对照溶液的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加如 ml200%对照溶液，然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。（备注加上

27、5ml）100%-2对照溶液的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加如 ml200%对照溶液，然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。（备注加上5ml）100%-3对照溶液的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加如 ml200%对照溶液，然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。（备注加上5ml）120%-1对照溶液的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加如 ml200%对照溶液，然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。（备注加上6ml）120%-2对照溶液的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加如 ml200%对照溶液，

28、然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。（备注加上6ml）120%-3对照溶液的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加如 ml200%对照溶液，然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。（备注加上6ml）5.5.3 接受标准：单一回收率应在80%120%之间；各浓度水平内的回收率及各浓度水平回收率平均值之间的RSD不大于10.0%。5.5.4 验证结果：表 5-1：杂质a的加样回收率验证结果名称加入杂质a的浓度空白公式样品中杂质a的平均含量杂质a的面积检测到的杂质a含量，%实际回收的杂质a的含量，%实际回收的杂质a的浓度回收率，%对照溶液80%-1对照溶液80%-1对照溶液80%

29、-1对照溶液100%-1对照溶液100%-2对照溶液100%-3对照溶液120%-1对照溶液120%-2对照溶液120%-3对照溶液回收率RSD，%=表 5-2：杂质b的加样回收率验证结果名称加入杂质b的浓度空白公式样品中杂质b的平均含量杂质b的面积检测到的杂质b含量，%实际回收的杂质b的含量，%实际回收的杂质b的浓度回收率，%对照溶液80%-1对照溶液80%-1对照溶液80%-1对照溶液100%-1对照溶液100%-2对照溶液100%-3对照溶液120%-1对照溶液120%-2对照溶液120%-3对照溶液回收率RSD，%=表 5-3：杂质c的加样回收率名称加入杂质c的浓度空白公式样品中杂质c

30、的平均含量杂质c的面积检测到的杂质c含量，%实际回收的杂质c的含量，%实际回收的杂质c的浓度回收率，%对照溶液80%-1对照溶液80%-1对照溶液80%-1对照溶液100%-1对照溶液100%-2对照溶液100%-3对照溶液120%-1对照溶液120%-2对照溶液120%-3对照溶液回收率RSD，%=表 5-4：杂质d的加样回收率验证结果名称加入杂质d的浓度空白公式样品中杂质d的平均含量杂质d的面积检测到的杂质d含量，%实际回收的杂质d的含量，%实际回收的杂质d的浓度回收率，%对照溶液80%-1对照溶液80%-1对照溶液80%-1对照溶液100%-1对照溶液100%-2对照溶液100%-3对照

31、溶液120%-1对照溶液120%-2对照溶液120%-3对照溶液回收率RSD,%=结论：5.6 精密度5.6.1 重复性5.6.1.1 目的：在相同的操作条件下，测试在较短时间间隔精密度。5.6.1.2 实际操作：杂质a(2,4-二甲基苯胺 )贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺 mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容， 浓度为0.1 %(W/V)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺 mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得， 浓度为2.0%(W/V)。杂质dN,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒贮备液：精密称取N,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒20

32、0mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为2.0%(W/V)。溶液A的制备：分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.20%(W/V)的溶液。溶液B的制备：精密称取 mg的杂质c N-甲基-N-(2,4-二甲苯基)甲脒溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入 mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。对照溶液的制备：等体积

33、的溶液A和溶液B的混合溶液。分别取空白溶液（乙酸甲酯）、对照溶液注入色谱仪，空白1针，对照溶液连续检测6次，记录色谱图，计算RSD值。5.6.1.3 接受标准： 连续6针对照图谱中，各个杂质的峰面积的RSD值不大于5.0%。5.6.1.4 验证结果：表6-1： 重复性验证结果进样次数杂质a峰面积杂质b峰面积杂质c峰面积杂质d峰面积123456RSD, %结论：5.6.2 中间精密度5.6.2.1 目的：按照重复性实验的测定程序，在同一实验室，评价在改变实验员、日期条件下所的结果之间的精密度。5.6.2.2 实际操作：选取一批代表性的产品作为供试品。实验员A，气相色谱仪I：杂质a(2,4-二甲基

34、苯胺 )贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺 mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容， 浓度为0.1 %(W/V)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺 mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得， 浓度为2.0%(W/V)。杂质dN,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒贮备液：精密称取N,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒200mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为2.0%(W/V)。溶液A的制备：分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.2

35、0%(W/V)、杂质d为0.20%(W/V)的溶液。溶液B的制备：精密称取 mg的杂质c N-甲基-N-(2,4-二甲苯基)甲脒溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入 mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。对照溶液的制备：等体积的溶液A和溶液B的混合溶液。供试品溶液1的配置：精密称取 mg的双甲脒供试样品(批号： )于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。供试品溶液2的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品(批号： )

36、于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。供试品溶液3的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品(批号： )于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。供试品溶液4的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品(批号： )于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。供试品溶液5的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品(批号： )于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。供试品溶液6的配制：精密称取 mg的双甲脒供试样品(批号： )于10ml容量瓶

37、中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。实验员B，气相色谱仪II：溶液配置过程参考以上过程。分别移取空白溶液（乙酸甲酯）、对照溶液，供试品溶液1-供试品溶液6，对照溶液注入气相色谱仪，空白溶液进1针，对照溶液分别连续检测6针和1针，供试品溶液进1针。记录色谱图，计算供试品各个杂质的含量。5.6.2.3 接受标准：6份样品溶液中杂质含量之间的RSD不超过25.0%（小于0.05%的除外）。2个不同实验员所测的平均杂质含量均在该范围之内（0.05%值0.10%）。2个不同实验员所测的平均杂质含量的差值不超过0.10%（0.10%值0.50%）。2个不同实验员所测的平均杂

38、质含量的差值不超过0.20%（值0.50%）5.6.2.4 验证结果：表6-2：中将精密度验证结果实验员/仪器/日期序号样品称重，mg杂质a含量,%杂质b含量,%杂质c含量,%杂质d含量,%123456平均123456平均两次检测的差值，%12次检测的RSD，%结论：5.7 方法耐用性5.7.1 目的：确认在测定条件有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度。5.7.2 实际操作：杂质a(2,4-二甲基苯胺 )贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺 mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容， 浓度为0.1 %(W/V)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺 mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得， 浓度为2.0%(W/V)。杂质dN,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒贮备液：精密称取N,N-双(2,4-二甲苯基)甲脒200mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为2.0%