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文档简介

1、实验四肠道致病菌分离鉴定,病原生物学教研室,Content,示教： 主要肠道杆菌，大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌的形态、染色性 主要肠道杆菌的培养特性：SS平板/EMB平板 主要肠道杆菌的生化反应：双糖、尿素分解反应 操作： 肥达反应 粪便肠道致病菌的分离和鉴定血清学 (*续) 录像： 厌氧菌,肠道杆菌的分类,肠杆菌科,志贺菌属,埃希菌属,沙门菌属,克雷伯菌属,变形杆菌属,ETEC, EIEC, EPEC, EHEC, EAEC,痢疾、福氏、 鲍氏、宋内,伤寒，副伤寒， 猪霍乱，肠炎,肠道杆菌的基本特征,形态结构相似 培养要求不高 生化反应活跃 抗原结构复杂 抵抗力不强 易发生变异,粪

2、便标本肠道致病菌鉴别流程,标本,鉴别培养基 （SS培养基）,生化反应 （双糖管）,血清学鉴定,SS 平板挑取可疑菌落2个 (无色,透明,小菌落),接种双糖管 培养,观察,SS平板 分离肠道病原菌的强选择培养基,成分： 基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、中性红（pH6.8-8.0，红橙黄） 作用： 乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。 胆盐、枸橼酸钠、煌绿：抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，对肠道致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。 病原菌:小,无色,透明 非致病菌:大,红色,

3、EMB平板 病原菌:透明,无色 非致病菌:紫黑色,双糖管,发酵乳糖 H2S试验 发酵葡萄糖(产酸产气)及动力,上层：乳糖,Fe2+ 固体 下层：葡萄糖 半固体 指示剂:酚红（pH6.8-8.4, 黄 红）,致病菌红色,非致病菌黄色, 观察：,乳糖 葡萄糖 动力 硫化氢 尿素酶 大肠埃希菌 + 痢疾志贺菌 + 伤寒沙门菌 + + +/ 副伤寒杆菌 + + 变形杆菌 + + +,双糖管结果观察,可疑肠道致病菌,大肠埃希菌,双糖管接种方法,穿刺斜面接种法,肥达试验,原理：,伤寒沙门菌菌体O 抗原,伤寒沙门菌鞭毛抗原,甲型副伤寒沙门菌鞭毛H抗原,肖氏沙门菌鞭毛抗原,已知抗原,病人血清中的未知抗体,凝集

4、,肥达试验,操作：,Ag加样方向,肥达试验结果分析（1）,凝集程度： （）上层液澄清，细菌全部凝集于孔底 （）上层液基本透明，细菌大部分（75）凝集于孔底 （）上层液半透明，细菌在孔底有明显凝集 （）上层液混浊，孔底有少量凝集 （）不凝集，同于对照 书写报告：反应的最高稀释度为凝集效价,肥达试验结果分析（2）,凝集效价：伤寒沙门菌O 1：80，H 1：160 副伤寒沙门菌H 1：80 动态观察：双份血清，效价 4倍 O与H抗体的诊断意义：OIgM, HIgG O、H抗体均高：肠热症 O、H抗体均低：未患病 O抗体不高，H抗体高：回忆反应，预防接种 O抗体高，H抗体不高：感染早期，交叉反应,上次实验结果观察：,脓汁标

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