菌种的分离纯化技术——平板划线法

1、名词的认识：名词的认识： l菌落：由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固 体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有一定形 态结构等特征的子细胞的群落。 l当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每 个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。 菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养 温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。 l菌苔：细菌在固体培养基接种线上由母细胞繁 殖长成的一片密集的、具有一定形态结构特征 的细菌群落，是许多菌落连成一片形成的 l细菌在斜面培养基接种线上长成的一片密集的 细菌群落，

2、不同属种细菌的菌苔形态是不同的 实验原理 l平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同 细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布 的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分 离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必 须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表 面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。 l划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线, 第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区) 是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区

3、出现大量的 单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积 的分配应是DCBA。 实验目的实验目的 l了解平板划线分离纯种的原理，并熟练 掌握该操作法。 实验器材 l菌悬液 l牛肉膏蛋白胨培养基 l无菌培养皿，水浴锅，接种环等。 实验步骤 1融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水 浴中加热至融化。 2倒平板：待培养基冷却至50左右，按无菌操 作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。 右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手 将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰； 然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可 将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与

4、无名指之间夹住。 如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞 则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打 开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养 皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面 上，待凝后即为平板。 倒平板的方法倒平板的方法 3.划线方法划线方法 用接种环以无菌操作挑取悬液一环，先在平板培养基的一边作第 一次平行划线3-4条，再转动培养皿约70角，并将接种环上剩 余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再 用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次 平行划线部分作第四次平行划线A)。划线完毕后，盖上皿盖，倒 置于温室培养

5、。 (2)(2)将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连 续划线续划线( (图图) )。划线完毕后，盖上皿盖，倒置温。划线完毕后，盖上皿盖，倒置温 室培养。室培养。 (3) 其他划线方法其他划线方法 1.斜线法斜线法 2.曲线法曲线法 3.方格法方格法 4.放射法放射法 5.四格法四格法 实验结果及讨论实验结果及讨论 l1实验结果 检查每个平板划线分离的结果，并绘制菌苔、菌落分布草图。 l2讨论讨论 l针对实验原理、步骤、现象进行讨论。 l通过本次实验你学到了什么技术通过本次实验你学到了什么技术?请请 列举出来并把它的技术要点写出来列举出来并把它的技术要点写出来. 讨论讨论 l培养皿为什么要倒置培养培养皿为什么要倒置培养? ? l斜线划线为什么要在变换角度时灼烧接种环斜线划线为什么要在变换角度时灼烧接种环? ? l曲线划线为什么接上次划线的末端继续划曲线划线为什么接上次划线的末端继续划? ? l2讨论讨论 l针对实验原理、步骤、现象进行讨论。 讨论讨论 l培养皿为什么要倒置培养培养皿为什么要倒置培养