毕业设计（论文）动物科学专业

1、丿 huazhong agricultural universih题目:教指导教师:本科毕业抡文多态性及其与产羔数性状的关联分析贾征学号 040801030动物科学姓名:专业:山羊褪黑激素受体1a基因hk i酶切杨利国职称中国武汉二oo八年六月密级分类号华中农业大学本科毕业论文山羊褪黑激素受体1a基因hk i酶切多态性及其与产羔数性状的关联分析hint i rflp of melatonin receptor 1 a(mtnria)gene and the association with the litter size traits in goat学生姓名学生学号 学生专业：动物科学 指导教

2、师：教授华中农业大学动物科学学院二oo八年六月摘要4abstract5前言61. 材料与方法71. 1材料71. 1. 1试验动物71. 1.2实验材料71. 1.3主要试剂的来源71. 1.4主要仪器设备81. 1.5主要试剂的配置81. 1. 6主要分子牛物学软件错误！未定义书签。1.2方法91. 2. 1.山羊基因组dna的提取91.2.2. 引物设计及其序列101.2. 3. pcr扩增及其电泳检测101. 2. 4.限制性内切酶消化扩增产物以及电泳检测121.2.5.统计分析132结果与分析132. 1 pcr扩增结果132. 2酶切结果142.3褪黑激素基因频率和基因型频率分析结果

3、152. 4 mtnrz基因型与波尔山羊头胎产羔数性状的关联分析152. 5 mtnrz基因型与经产产羔数性状的关联分析163 讨论163. 1个同山羊品种基因型频率及基因频率差异163. 2 .ima不同基因型对波尔山羊头胎和经产羔数的影响17参考文献17致谢18山羊褪黑激素受体1a基因hm i酶切多态性及其与产羔数性状的关联分析摘要木研究以褪黑激素受体1a基因为候选基因，分析该基因多态性对山羊产羔 数性状的影响。釆用限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, pcr-rflp)方法，检测了 65只波尔山羊和51马头山羊褪黑激 素

4、受体1a基因h加fl酶切多态性及其与产羔数性状的关联分析。结果表明，褪 黑激素受体1a基因在波尔山羊中存在h/fl酶切多态性，而在马头山羊样本小 则无多态性。在波尔山羊屮，检测到aa、gg两种基因型，未检测到ag型； 其中aa基因型个体在出现频率最高，为0.554, gg型为0.446； a、g等位基 因频率分别为0.554和0.446o性状关联分析结果表明：波尔山羊的m基因纯合 型头胎平均产羔数比gg基因杂合型多0. 07只，加性效应值为0. 035,显性效应 值为-1.42；经产羔数的aa型比gg型多0.09只；加性效应值为0. 046,显性效 应值为-1.84o a等位基因可能与波尔山羊

5、产羔数呈正相关，该位点主要以加性 方式起作用。关键词：山羊；繁殖性状；褪黑激素受体；pcr-rflphint i -rflp of melatonin receptor 1 a (mtnr1a) gene and the association with the litter size traits in goatabstractin the present study, melatonin receptor i a gene (mtnr1a) was analysed to find the assocation with litter size in goat as a candidate

6、 gene hint i rflp (restriction fragment length polymorphism, rflp) of mtnr1a was found in 65 boer goats and 51 goats ma tou. no polymorphism was detected in ma tau goats - two genotypes aa, gg were found in boer goats. the frequency of aa genotype was higher than gg genotype, which were 0.554 and 0.

7、446，respectively. the allele frequencies for a and g were 0.554 and 0.446 the results of traits association analysis showed that individuals with aa genotype had additional 0.07 average litter size at first kidding in boer goat. the additive effect value was 0.035, while the dominant effects value -

8、1.42. moreover, aa genotype had additional 0.09 average litter size for multiparity, the additive and dominant effects value were 0.046 and -1-84, respectively. allele a was possiblely positively correlated with litter size in boer goats- the additive effect was dominant at the site.key words: goat；

9、 reproductive traits； mtnr1a； pcr-rflp-jkx. 1刖5褪黑激素主要是由松果体合成的，其它合成部位还有:视网膜、眼眶腔的副 泪腺、唾液腺、肠的嗜钻细胞及红细胞，松果体把对外界光照形成的神经信息经 下丘脑视交叉上核转变成体液信息一z。1褪黑激素生理功能、作用机制；褪黑激素对生殖系统作用的机理主要是通过光作用于视网膜，然后通过视网 膜-下视丘至视交叉上核，再经过一系列复朵的神经交换至颈上神经节，其节后 交感神经作用于松果体。松果体分泌褪黑激素，通过下丘脑一垂体性腺轴影响生 殖系统。褪黑激素对生殖系统的作用因动物种类、生理状态不同而表现出抑制、 促进或无作用的多

10、重性(焦传珍，2005)o多项研究结果表明，褪黑激素虽然对 牛、鼠类、禽等动物和人的生殖系统的发育有抑制作用，但是对绵羊、山羊、鹿 等动物则明显表现出促进作用。2. 褪黑激素受体类型、作用机制；褪黑激素受体属于g蛋白耦联受体家族。根据其分子生物学方法乂可分为 mtnryk、mtnrv wtnryc三种亚型(张凯等，2006)。h前在哺乳动物中还没 有发现mtnrc受体，而具有明显季节性繁殖特征的动物仅在垂体结节部发现 j/w1a受体，提示垂体结节部可能是褪黑激素繁殖效应的作用位点。3. 褪黑激素受体分子标记在其它动物屮的研究进展冃前国内外对绵羊m tnr1a基因已经有所研究已经很多了。mess

11、er等(1997)和notter等(2003)用mnll和r sa i酶分别对白面杂种羊、萨福克 羊、特克塞尔羊、柯泊华斯羊和合成系绵羊群体mtnr1a基因外显了 2的824 bp 扩增产物进行消化，发现m n 1 1在5个绵羊群体屮都存在286 bp和236 bp 多态片段，r sa l都存在295 bp和290 bp多态片段。pelletier等(2000)用 m n ii限制性内切幽消化2组发情行为有明显差异(常年发情和季节性发情) 的merinos d arles母绵羊以及季节性发情明显的ile2de2france母绵羊m tnr1a 基因外显了 2的824 bp扩增产物，发现存在30

12、3 bp和236 bp多态片段。季从 亮等(2003)和chu等(2003)用m n 1 i和r sa i对常年发情的小尾寒羊和 湖羊以及季节性发情的多赛特羊和萨福克羊共146只绵羊m tnr1a基因外显子2 的824 bp扩增产物进行pcr-rflp多态性分析，发现m n 1 i在4个绵羊品种中 都存在303 bp和236 bp多态片段,r sa i都存在290 bp和267 bp多态片段。 在绵羊屮的研究结果表明，该基因对绵羊繁殖性能存在影响。但是，对于山羊， 只有对产绒或营养调控的研究，日前尚未发现有对山羊繁殖性能影响的相关报 道。4. 本实验目的意义木实验室滑国华等（2006）在山羊m

13、tnrik屮共发现7个snps,对其屮4个 snps分析结果显示:mtnr1a不同基因型对山羊产羔数性状有一定的影响。为进 一步研究该基因对山羊产羔数性状的影响，本试验选取g493a突变位点，采用引 入酶切位点方法，即限制性片段长度多态性forced pcr-rflp （polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphsim）,分析该位点在马头山羊和波 尔山羊屮的分布情况，并分析该位点对波尔山羊产羔数彩响，为山羊标记辅助选 择提供理论依据。1. 材料与方法1.1材料1.1.1试验动物马头山羊51头，采自湖北省十堰市；

14、波尔山羊65头，采自湖北省宜都市波 尔山羊种羊场。颈静脉采血10ml/只，edta抗凝，-20°c保存。1.1.2实验材料1.5ml eppendorf 管、双面板、微量移液枪（1000口1、200 口1、40 u 1、10 1、2. 5u 1）及枪头、一次性pe塑料手套。1.1.3主要试剂的来源tagdna聚合酶购口上海生工生物工程技术有限公司；dna限制性内切酶力f 1购门晶美生物工程有限公司；分子量标准loobp dna ladder和尸庭为勿如i购自上海生工生物工程技术 有限公司；三轻甲基氨基甲烷（tris）、苯酚、蛋白酶k、十二烷基硫酸钠（sds）、w 胺、丙烯酰胺（acr

15、ylamide, acr） n_n'亚甲基丙烯酰胺（bisacrylamide） 琼脂糖、澳化乙锭（eb）、琼脂糖、乙二胺乙二酸二钠盐（edtana?）等均购自 武汉凌飞科技有限公司。1.1.4主要仪器设备表1主要仪器设备table 1 laboratory equipment and instruments仪器设备名称型号生产厂家电热恒温水浴锅gd120英国grant公司台式禺心机tgl-16g上海安亭科学仪器厂梯度pcr仪t1 thermo cyler德国biometra公司冷冻离心机centrfuge 5810徳国eppendorf公司恒温摇床hs80中国科学院武汉科学仪器厂口动

16、双重纯水蒸懈器sz-93上海亚荣牛化仪器厂紫外分析仪uv-tv北京市新科技应川研究所电泳槽dyy-ttt北京六-仪器厂稳压稳流电泳议dyy-2北京六一仪器厂手提式高压灭菌锅yxq-sg46-280a上海博讯实业有限公司医疗设备厂超纯水仪waterpro美国labconco公司移液器lml； 200 u1； 40 n1；10p 1； 2. 5m 1芬兰labsystems公司1.1.5主要试剂的配置1. 1. 51用于血液样品采集的溶液的配制1) im tris, cl储备液：称取121. 4g tris碱溶于800ml双蒸水屮，加浓盐酸调至 ph二8.0,定容到1000mlo高压灭菌,室温保存

17、;2) 0. 5m edta (ph=8.0)：称取 186. lg na2edta 2h20溶于800ml双蒸水中,加入 naoh (约20g)调至ph=8.0,定容到1000ml0高压灭菌，室温保存;3) 10%sds：称取50g sds加热溶于400ml双蒸水屮，定容至500ml o高压灭菌， 室温保存；4) 抗凝剂(0. 2medta)：量取200ml 0. 5m edta加入双蒸水定容至500ml o1. 1. 5. 2用于基因组dna提取的溶液的配制1) 蛋白酶k：称取200mg蛋白酶k溶于10ml双蒸水，以lml分装，-20£冷冻保存;2) 氯仿/异戊醇(24:1)：量

18、取480ml氯仿,加入20ml异戊醇,混匀；3) 3mnaac：称取naac 3h20溶于400ml双蒸水中，用hac调至ph二5. 2,加水定容至500ml o高压灭菌，室温保存；4) te缓冲液：loomm tris - cl (ph=8.0), imm edta (ph=8.0)。1. 1. 5. 3用于琼脂糖凝胶电泳及检测溶液的配制1) 50xtae储备液:称取242g tris碱溶于750ml双蒸水中，加入57. lml hac、 100ml 0. 5m edta (ph=80),加水定容至 1000ml；2) 5xtbe储备液：称取54g tris碱和27. 5g硼酸溶p750ml

19、双蒸水屮，加入20ml 0. 5m edta (ph = 8. 0),加水定容至 1000ml；3) 6x±样缓冲液:0.25%混酚兰，0.25%二甲苯青，15%ficoll聚蔗糖;4) 漠化乙锭(eb, 10mg/ml) :100ml双蒸水中加入0. lg eb,搅拌使完全溶解, 转入棕色试剂瓶，锡箔包裹。1. 1. 5. 4用于聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染的溶液的配制1) 30%丙烯酰胺(丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺=29:1 ) :700ml双蒸水中加入290g 丙烯酰胺，10g甲叉双丙烯酰胺，搅拌使完全溶解，加水定容至1000ml, 4°c 保存；2) 10%过硫酸较：称取

20、lg过硫酸鞍溶于8ml双蒸水，定容至10ml；3) 10%乙醇：量取50ml无水乙醇溶于450ml水中，混匀；4) 1% hn03：量取15ml浓hno,溶于985ml双蒸水中，混匀；5) 0. 2% agn03：称取lg agn0.3溶于500ml双蒸水中，置于棕色试剂瓶；6) 3% na2c03 (0. 05%醛)：称取30g无水na2c03)§于900ml双蒸水中，加入l5ml 甲醛,定容至1000ml；7) 3% hac：量取30ml冰hac溶t970ml双蒸水，混匀。1.2方法1.2. 1.山羊基因组dna的提冃从山羊颈静脉采血10ml,放入装有抗凝剂(0.5mol/led

21、tanq的离心管中, 6000r/min离心15min,弃上清，吸取口细胞沉淀(参杂少量红细胞)于另一离心 管中；加入两倍体积双蒸镭水(灭菌)，摇匀沉淀，静置10min15min,破碎红 细胞；6000r/min离心15min,轻轻弃去上清，留白细胞沉淀；加入ixset 5ml, 蛋白酶k (10mg/ml) 0. 1ml至终浓度200ng/ml, 10% sds 250 u 1 至终浓度0. 5%, 55°c水浴消化过夜；加入等体积饱和平衡酚轻轻摇匀，12000r/min离心15min, 轻轻吸取上层水相于另一离心管中，弃下相苯酚；重复上步；加入等体积苯酚/ 氯仿/异戊醇(25:2

22、4:1),轻轻摇动loinin, 12000r/min离心15min,轻轻吸取上 层水相于另一离心管屮，弃下层有机相；加入等体积氯仿/异戊醇(24:1),儀 摇动10min, 12000r/min离心15min,轻轻吸取上层水相于另一离心管中，弃下层 有机相；加入两倍体积预冷无水乙醇，轻轻转动管子，dna呈絮状析出，用1ml 吸头（灭菌）吸出dna沉淀，放入l5i】il离心管屮，加入预冷无水乙醇洗涤一次， 离心弃去无水乙醇，再用75%乙醇漂洗2次，小心吸去乙醇，待dna沉淀自然干燥 后,加入适量te （loou 1300u1）溶解。1.2. 2引物设计及其序列引物参考滑国华等（2008）进行设

23、计，序列如下：上游引物：5' acgacccgaggatctattcc 3'下游引物：5' atataagtcctggggcttcagatt 3',在下游引物中引入错配碱基a,当突变位点为g （即反义链为c）时，可形 成hini i （gattc）酶切位点；当突变位点为a （即反义链为t）时，该酶切位 点缺失，由此可进行基因型判定。1.2.3.pcr扩增及其电泳检测1.2. 3. 1 pcr扩增反应体系（表2）表2 pcr扩增反应体系（20ul）table 2 pcr amplification of the response system （20 u 1）反应

24、体系response system反应体积v(u1)response volume (u 1)灭菌蒸馅水14.610x buffer2mg2*1.2dntp0.2上游引物0.4下游引物0.4taq dna 聚合酶(5 u/ml )0.2模板dna1total201.2. 3.2退火温度的优化利用pcr机器上都有一个gradient功能，在一次pcr过程屮，对机器屮不 同位点的反应采用不同的退火温度，一般在第一次实验中，采用引物溶点上下10度设置退火温度梯度。每个温度梯度一个反应，最后电泳检测并比较各个退 火温度的条带效果，得到最好结果。本试验屮退火温度设定为55 65°c,结果 表明

25、，退火温度60°c时，无菲特异性带，1=1的条带最为清晰。1.2. 3.3 pcr反应程序(表3)表3 pcr反应程序table 3 pcr ampliflcation of the response term步骤stepspcr反应条件pcrreactionconditi ons温度temperature时间time1预变性95 °c5min2c变性95 °c30sec3c退火60 °c30sec4c延伸72 °c30sec5延伸72 °c7min6保温16°clomin第二步至第四步循环35次。1.2. 3.4琼脂糖凝胶

26、电泳检测pcr扩增产物用1. 5%琼脂糖凝胶电泳检测，eb染色，利用b10rad凝胶成 相系统凝胶成像系统进行成像分析，记录结果并拍照。1.2. 3. 4.1琼脂糖凝胶电泳方法(1) 灌胶将透明胶带粘于灌胶模槽的两端，制成灌胶模。放入梳子。将模放于水平台 上。取一烧杯，放入：琼脂糖0.75 g； 1xtae 50 mlo混匀，加热，至琼脂糖 彻底溶解。待稍冷后，加入5ul饱和的渓乙锭，轻晃混匀，然后轻轻倒入模子。 用吸头吸去表面小泡。待冷却成胶。(2) 上样电泳轻轻拔出梳子，将胶两头的透明胶带揭去，移入电泳槽，点样孔一侧靠近操 作者，注入1xtae缓冲液，浸没凝胶。使用微量可调采样器取3u1d

27、na充分混 匀于适量澳酚兰，点样于1.5%琼脂糖凝胶孔内，并点3u 1 600bp marker i作 为参照。点样时，加样头尖端插入上样孔内1/3高度，轻轻将样品推入，避免刺 入前后凝胶和刺穿凝胶底部。使比重较大的样品自然沉入上样孔底。接上电源：阳极远离上样孔，阴极靠近上样孔（dna向阳极移动）。开启电源，电压调至100vo 2030min后检查。1.2. 3. 4. 2成像分析利用bi0rad凝胶成和系统凝胶成像系统进行成像分析，记录结果并拍照。1.2. 4.限制性内切酶消化扩增产物以及电泳检测1.2.4. 1酶切反应体系(表4)表4酶切反应体系table 4 pcr and the am

28、ount of the components反应体系response system反应体积v（p1）response volume (u 1)4. 70. 310灭菌蒸诸水10x buffer/77f i限制性内切酶pcr产物total将上述酶切体系置37°c水浴锅或恒温箱中酶切过夜。1. 2. 4. 2非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测1. 2. 4. 2.1聚丙烯酰胺凝胶电泳操作步骤不同的实验需要优化聚丙烯瞅胺凝胶的交联度和浓度，才能达到最好的实验 效果，木实验采取一下方法：1.在小烧杯中加入l&43ml双蒸水，9. 33ml 30%丙烯瞅胺（29:1）, 7ml的5 xtbe

29、混匀；2.清洗制胶用玻璃板，烘t后用透明胶封好底边和侧边，固定在制胶用的有机 玻璃板上；3.向小烧杯中加入245ul的10%ap, 13ul temed混匀后迅速灌胶；4.当胶灌至离玻璃板上边缘0.5cm时停止灌胶，插入梳了，注意梳齿下不要有 气泡，室温聚合1小时；凝胶聚合好后，拔出梳子，注射器吸出梳齿孔中未聚合的液体；取下玻璃板，撕下胶线，固定在电泳槽上，倒入电泳缓冲液1 xtbe；在pcr产物中加入1/6体积上样缓冲液，用微量进样器取5ul酶切样点样， 同时点分子量标记物pbr322/mspl；8.上样完毕后，打开电泳议以80v电泳20min,再调到120v屯泳45h。1. 2. 4. 2

30、. 2聚丙烯酰胺凝胶染色步!1. 拆下电泳装置，剥下聚内烯醜胺凝胶，放到一个駛料盘内，用双蒸水冲漂洗 2次；2. 加入500ml 10%乙醇固定液，在摇床上固定810 min,弃去反应液；3. 加入500ml 1%hno3氧化，在摇床上轻摇810 min,弃去反应液，用双蒸 水漂洗2次；4. 倒入500ml 0.2%agn03银染液，染色1530 min,弃去反应液，用双蒸水 漂洗2次；5. 加入500ml3%na2c03显色液，于-摇显色至出现清晰的银染带，迅速弃去反应液；6. 用500ml 3%hac停止显色；7. 将已经染好的聚丙烯酰胺凝胶置于透射白光板上，观察酶切反应结果、记录 并拍照

31、。1.2. 5统计分析基因频率与基因型频率使用软件spss 10. 0进行统计分析，不同基因型对产 羔数的最小二乘均值分析使用sas (8. 0版)glm (general linear model)软件 包进行，模型如下：丫诽1 二卩 +gi+pi+eijky丽为产羔数，卩为群体均值，&为基因型效应，p：为胎次效应，e,为随机 效应。基因效应分析：加性效应二(gg-aa) /2显性效应二ag- (aa+gg) /22结果与分析2.1 pcr扩增结果扩增波尔山羊和马头山羊基因组，产物用2.0%琼脂糖凝胶电泳检测，得到 的片段与预期片断大小一致(197bp),条带清晰(图1),特异性高，

32、满足后续 分析要求。6200b p100bp600bp500bp400bp300b pm 12345图1 pcr扩增结果注：m, marher i loobp dna ladder； 1、2、3 为波尔山羊 dna 扩增产物；4、5、6为马头山羊dna扩增产物fig. 1 agarose gel electrophoresis of pcr productm, 1-3, 4-6: loobp dna ladder, pcr product of ?goat, pcr product of ?goat2. 2酶切结果利用限制性内切iw hini i对pcr扩增产物进行酶切，使用8%的聚丙烯酰胺

33、凝胶(29： 1)电泳检测酶切产物。在197 bp的扩增片段在118bp处存在另一 力?f i酶切位点，酶切后产生118 bp和79bp片段，其中波尔山羊在118处的酶切位点存在多态性，酶切位点的存 在与缺失产生2种基因型，分别命名为aa和gg:aa ( 118bp/118bp )、gg(118bp /79bp ),酶切图谱见图2 ；而马头山羊在118处的酶切位点则无多 态性，基因型均为aa型。酶切图谱见图3。1 2 34 5 67 8 9 10 11 m118bp90bp79bp67bp147bp123bp110bp图2波尔山羊酶切图谱注：m, pbr322/msp 1 marher； 11

34、3为酶切产物条带fig.2 genotypes of the m tnr1a fragment defined by pcr-rflp123456 m118bp160bp147bp123bp110bp90bp图3马头山羊酶切图谱注：m, pbr322/msp 1 marherl8为酶切产物条带fig.3 genotypes of the m tnr1a fragment defined by pcr-rflp2.3褪黑激素基因频率和基因型频率分析结果分析两种山羊品种的褪黑激素基因型频率发现，在该酶切位点，马头山羊只 岀现aa基因型，波尔山羊虽然出现两种基因型，但aa型频率高于gg型。在所 检测

35、的两个群体中，a等位基因是优势等位基因。表6山羊mtnrlk基因hint i酶切基因型和基因频率分布表table 6 genotype and allele frequencies of hint i -rflp for the goat m tnra gene品种breed数量n基因型genetypegenetype frequency等位基因频率allele frequency波尔山羊65aagg0. 5540.446a 0.554g 0.446基因型频率马头山羊 51aa1a 12.4 mtnr1a基因型与波尔山羊头胎产羔数性状的关联分析由表7可知，波尔山羊的aa基因纯合型头胎平均产羔数

36、比gg基因杂合型多0.07只，加性效应值为0.035,显性效应值为-1.42。研究表明：波尔山羊的a 等位基因可能与山羊头胎产羔数呈正相关，该位点主要以加性方式起作用。表7波尔山羊mtnrk基因型对头胎产羔数性状的最小二乘均值及基因效应分析table 7 least squares means and allele substitution effects for litter size at first kidding in boar goat品种breed数量n基因型genetype最小二乘均值土标准误加性效应additiveeffec显性效应dominanteffectsleas tme

37、ans土 standardsquareserroraa1.4545 ±0.5222波尔山羊65gg1. 3846 ±0.50640. 035-1.422. 5 mtnrk基因型与经产产羔数性状的关联分析由表8可知，波尔山羊的aa型经产羔数比gg型多0.09只；加性效应值为 0. 046,显性效应值为-1.84。结果表明：a等位基因可能与波尔山羊产羔数呈正 和关，该位点主要以加性方式起作用。表8波尔山羊mtnr a基因型对经产产羔数性状的最小二乘均值及基因效应分析table 8 least squares means and allele substitution effec

38、ts for litter size in multiparous boar goat基因型genetype最小二乘均值土标准误least squares means±standarderror加性效应additiveeffects显性效应dominanteffectsaagg1.8827±0. 58711.7905 ±0.59880. 046-1.843讨论3. 1不同山羊品种基因型频率及基因频率差异利用荧光原位杂交方法和遗传连锁分析方法，褪黑激素受体1a已经在绵羊 等多种动物屮得到精细定位。并有多个研究结果表明，褪黑激素受体1a基因与 绵羊的繁殖性状有着紧密的

39、关联。在本研究所检测的两个山羊群体中，基因型频 率及基因频率存在较大差异。木研究结果显示：马头山羊是aa基因型纯合群体, 而波尔山羊屮存在aa和gg两种基因型。这可能与两个品种的育成史有关。马头 山羊是湖北省木地品种，长期闭锁选育，湖北马头山羊具有个体大、生长快、繁 殖率高等特点，其全年均可发情，母羊一年产2胎，年产羔率428%,平均窝产 羔数2. 14头，马头山羊繁殖力远远高于全国其它地方良种山羊品种(杨利国， 2004)。波尔山羊是引入品种，平均窝产羔数为193头，低于马头山羊。这也与 木研究结果符合，木研究结果显示aa基因型头胎和经产羔数均大于gg型 而马 头山羊群体均为m基因型。3.

40、2 mtnrk不同基因型对波尔山羊产羔数的影响木研究结果显示：在山羊样本中，无论是头胎还是经产山羊，褪黑激素受体 1a不同的基因型对性状的影响表现都为aa>gg,由于受到样本含量限制，该差 异并未达到显著水平，但是该结果初步揭示褪黑激素受体1a基因可能与山羊繁 殖性状相关，而该基因是否能够作为分子标记应用于山羊繁殖性状标记辅助选 择，则需进一步扩大样本含量，增加品种个数进行验证。参考文献1滑国华.山羊繁殖性状五个候选基因多态性及其与产羔数性状关联分 析.硕士学位论文武汉：华中农业大学图书馆，20062吴伟生抑制素基因作为山羊多胎性侯选基因的研究.硕士学位论文武 汉：华中农业大学图书馆，2

41、0063周文然，储明星，孙少华等.小尾寒羊高繁殖力候选基因inha的研究.农 业生物技术学报,2007, 15(1)： 32-364陈桂芳，李齐发，强巴央宗等.四藏耗牛和黑白花奶牛生长激素基因alu 1多态性的比较研究.畜牧与兽医，2002, 35： 115储明星，程笃学，刘文忠褪黑激素受体1a基因外显子2与小尾寒羊高繁 殖力的关联.安徽农业大学学报，2008, 35 (1) : 1246王林枫光照和埋植褪黑激素对内蒙古白绒山羊含氮物质分配和产绒性能 的影响及调控的研究.硕士学位论文.内蒙古：内蒙古农业大学图书 馆，20047闫守庆，王慧芳，祝万菊.蓝狐与银狐褪黑激索受体1a基因的克隆及序列 分析.中国畜牧兽医，2008, 35： 38季从亮，储明星，陈国宏.4个绵羊品种褪黑激素受体la基因第二外显 子pcrrflp分析.华中农业大学学报,2003, 4 (22) : 29 郭